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慢性粒细胞白血病Bcr/Abl基因OD域融合蛋白的原核表达及纯化
被引量:
5
1
作者
季茂胜
黄峥兰
+5 位作者
黄世峰
曾建明
刘钉宾
罗红伟
曹唯希
冯文莉
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2010年第4期354-357,共4页
目的原核表达并纯化慢性粒细胞白血病(CML)Bcr/Abl基因OD域融合蛋白。方法将TAT、OD和HA基因片段顺次克隆入pET32a(+)原核表达载体,构建重组原核表达质粒pTAT-OD-HA,经PCR、双酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coliBL2(lDE3),IPTG诱...
目的原核表达并纯化慢性粒细胞白血病(CML)Bcr/Abl基因OD域融合蛋白。方法将TAT、OD和HA基因片段顺次克隆入pET32a(+)原核表达载体,构建重组原核表达质粒pTAT-OD-HA,经PCR、双酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coliBL2(lDE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE及Westernblot分析后,用镍离子亲和层析柱纯化。结果所构建的重组质粒pTAT-OD-HA经PCR、双酶切及测序鉴定正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为30000,诱导6h蛋白表达量达最高,约为10%;Westernblot分析显示,该蛋白可与鼠抗HA单克隆抗体发生特异性反应;纯化后纯度约为95%。结论已成功原核表达并纯化了TAT-OD-HA融合蛋白,为进一步研究其在CML中的作用奠定了基础。
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关键词
慢性粒细胞白血病
BCR/ABL基因
od域
原核表达
纯化
原文传递
题名
慢性粒细胞白血病Bcr/Abl基因OD域融合蛋白的原核表达及纯化
被引量:
5
1
作者
季茂胜
黄峥兰
黄世峰
曾建明
刘钉宾
罗红伟
曹唯希
冯文莉
机构
重庆医科大学临床血液学教研室临床检验诊断学教育部重点实验室
出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2010年第4期354-357,共4页
基金
国家自然科学基金(30670901).
文摘
目的原核表达并纯化慢性粒细胞白血病(CML)Bcr/Abl基因OD域融合蛋白。方法将TAT、OD和HA基因片段顺次克隆入pET32a(+)原核表达载体,构建重组原核表达质粒pTAT-OD-HA,经PCR、双酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coliBL2(lDE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE及Westernblot分析后,用镍离子亲和层析柱纯化。结果所构建的重组质粒pTAT-OD-HA经PCR、双酶切及测序鉴定正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为30000,诱导6h蛋白表达量达最高,约为10%;Westernblot分析显示,该蛋白可与鼠抗HA单克隆抗体发生特异性反应;纯化后纯度约为95%。结论已成功原核表达并纯化了TAT-OD-HA融合蛋白,为进一步研究其在CML中的作用奠定了基础。
关键词
慢性粒细胞白血病
BCR/ABL基因
od域
原核表达
纯化
Keywords
Chronic myeloid leukemia(CML)
Bcr / Abl gene
od
domain
Prokaryotic expression
Purification
分类号
R733 [医药卫生—肿瘤]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
慢性粒细胞白血病Bcr/Abl基因OD域融合蛋白的原核表达及纯化
季茂胜
黄峥兰
黄世峰
曾建明
刘钉宾
罗红伟
曹唯希
冯文莉
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2010
5
原文传递
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参考文献
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