瑞马唑仑调节HIF-1α/BNIP3信号通路对OGD/R诱导神经细胞自噬和凋亡的影响

目的探讨瑞马唑仑对OGD/R诱导的神经细胞自噬和凋亡的影响及作用机制。方法体外培养小鼠海马神经元细胞(HT22)并进行神经细胞氧糖剥夺/再复氧(OGD/R),筛选实验用瑞马唑仑浓度;将HT22细胞分为对照组、OGD/R组、瑞马唑仑组、2-ME2组、瑞马唑仑+2-ME2组;CCK8法检测5组HT22细胞活力;流式细胞术检测5组HT22细胞凋亡率;透射电子显微镜观察5组HT22细胞自噬小体的形成;Western blot检测5组HT22细胞HIF-1α、BNIP3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达。结果确定实验用瑞马唑仑浓度为50μg/mL;与对照组比较,OGD/R组HT22细胞OD450值、HIF-1α、BNIP3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白水平下调,凋亡率上调(P<0.05);与OGD/R组比较,瑞马唑仑组HT22细胞自噬小体增加,OD450值、HIF-1α、BNIP3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白水平上调,凋亡率下调(P<0.05);2-ME2组HT22细胞OD450值、HIF-1α、BNIP3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白水平下调,凋亡率上调(P<0.05)。与瑞马唑仑组比较,瑞马唑仑+2-ME2组HT22细胞自噬小体数量减少,OD450值、HIF-1α、BNIP3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白水平下调,凋亡率上调(P<0.05);与2-ME2组比较,瑞马唑仑+2-ME2组HT22细胞OD450值、HIF-1α、BNIP3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白水平上调,凋亡率下调(P<0.05)。结论瑞马唑仑可通过激活HIF-1α/BNIP3信号通路促进OGD/R诱导的神经细胞自噬,抑制细胞凋亡,从而减轻OGD/R诱导的神经细胞损伤。

辛芍组方对缺血/再灌注损伤的神经细胞炎症反应和氧化应激的影响

目的 探讨辛芍组方对缺血/再灌注损伤的神经细胞炎症反应和氧化应激的影响。方法 建立小鼠海马神经元HT22细胞氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)模型,不进行其他处理的作为模型对照(Con)组,使用不同浓度(0.31、0.62、1.25 mg/L)的辛芍组方处理建模后的HT22细胞,作为0.31 mg/L组、0.62 mg/L组、1.25 mg/L组。正常培养的HT22细胞作为正常(Normal)组。采用细胞计数(CCK)-8试剂盒检测细胞活性;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β炎症因子水平;采用试剂盒检测过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。采用Western印迹检测微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3Ⅱ)、自噬相关蛋白(P62)、低氧诱导因子(HIF)-1α蛋白表达;采用荧光显微镜检测细胞自噬体数量。结果 与Normal组比较,Con组细胞OD值显著降低,TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著升高,MDA含量显著升高,CAT、SOD活性显著降低,LC3Ⅱ蛋白表达和自噬小体数量显著升高,P62蛋白表达显著降低,HIF-1α蛋白表达显著升高(均P<0.05);与Con组比较,0.31、0.62、1.25 mg/L辛芍组方组细胞OD值显著升高,TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著降低,MDA含量显著降低,CAT、SOD活性显著升高,LC3Ⅱ蛋白表达和自噬小体数量显著降低,P62蛋白表达显著升高,HIF-1α蛋白显著降低,且呈剂量依赖性(均P<0.05)。结论 辛芍组方可以显著降低缺血/再灌注损伤的神经细胞炎症因子水平,并抑制细胞的氧化应激和自噬活化。

丹参酮通过调控巨噬细胞分化保护OGD/R诱导的心肌细胞凋亡的作用

目的探讨丹参酮通过调控巨噬细胞分化保护OGD/R诱导的心肌细胞凋亡及相关机制。方法选用THP-1单核细胞株经佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯(PMA)诱导为贴壁的巨噬细胞后,分为丹参酮低剂量组(1μg/ml)、丹参酮中剂量组(2μg/ml)和丹参酮高剂量组(4μg/ml),荧光定量PCR检测M1型和M2型巨噬细胞活化相关基因表达。采用巨噬细胞和心肌细胞共培养的方式探索巨噬细胞的分化对OGD/R诱导的心肌细胞凋亡的影响,Tunel染色检测心肌细胞凋亡情况,Western blot检测心肌细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl2和Caspase3表达以及NF-κB信号通路相关蛋白p-IKB、IKB、p-P65和P65表达。使用NF-κB信号通路激动剂探索巨噬细胞的分化对OGD/R诱导的心肌细胞凋亡影响的相关机制,进行上述相同的检测。结果丹参酮低、中和高剂量都可抑制M1型巨噬细胞分化相关基因表达,促进M2型巨噬细胞分化相关基因(P<0.05),其中丹参酮中剂量效果最佳(P<0.01)。相关机制研究发现,丹参酮可通过调控巨噬细胞分化过程抑制OGD/R诱导的心肌细胞凋亡(P<0.05)以及凋亡相关蛋白Bax/Bcl2和Cleaved-caspase3/Caspase3表达(P<0.05)。相关信号通路研究发现,M2型巨噬细胞活化相关因子主要通过影响NF-κB信号通路相关蛋白p-IKB和p-P65的表达抑制OGD/R诱导的心肌细胞凋亡(P<0.05)。使用NF-κB信号通路激动剂研究结果显示,激活NF-κB信号通路能够阻碍丹参酮通过调控巨噬细胞分化抑制OGD/R诱导的心肌细胞凋亡过程。结论丹参酮通过调控巨噬细胞分化,影响NF-κB信号通路,进而抑制OGD/R诱导的心肌细胞凋亡。