OGDC-E2和BCOADA-E2的二联体检测在原发性胆汁性肝硬化中的意义

目的通过重组表达抗原OGDC-E2和BCOADC-E2的二联体融合蛋白(B0),并用于检测自身抗体及临床意义。方法重组表达的融合蛋白(B0),通过Ni-NTA亲和柱纯化,经过免疫印迹法(IBT)和酶链免疫吸附(ELISA)法检测56份PBC患者血清,以48份自身免疫病患者、50份其他肝病患者、70例正常人血清为对照组。结果56例确诊的PBC患者中,42例阳性,阳性率为75.0%。而健康体检者和疾病对照组血清中的M2抗体均为阴性。结论通过用重组表达的二连体B0检测PBC患者血清中的M2抗体,具有一定的特异性及敏感性,为临床进一步研究PBC,辅助诊断提供一些辅助参考。

人源M2二联体靶抗原BO-E2融合蛋白的克隆表达与鉴定

目的:表达二联体BO-E2重组融合蛋白,以用于人原发性胆汁性肝硬化(PBC)的早期发现和临床诊断.方法:通过逆转录聚合酶链式反应(RT- PCR)方法扩增得到抗线粒体抗体二亚型(AMA-M2)的二个靶抗原侧链:二氧酸脱氢酶复合体E2(BCOADC-E2)、2-氧戊二酸脱氢酶复合体E2(OGDC-E2)相应的基因片段,经测定序列验证后插入表达载体pET28a(+),构建重组表达载体pET28a(+)-BCOADC-E2,pET28a(+)-OGDC-E2,pET28a(+)-BO-E2,转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达蛋白质.表达蛋白经SDS-PAGE、westem blot等鉴定.结果:经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功地构建了3种重组质粒.异丙基-B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,获得3种融合蛋白.经免疫学鉴定,重组抗原片段具有AMA-M2的免疫原性.结论:重组表达的BO-E2融合蛋白将有利于PBC的实验室诊断.

利用重组人源靶抗原二联体OP检测M2抗体及临床意义

目的 利用重组抗原检测自身免疫病患者血清中抗OP自身抗体并探讨其临床意义。方法 经Ni-NTA柱纯化表达重组OP融合蛋白作为抗原，分别用免疫印迹法（IBT）和酶链免疫吸附试验（ELISA）检测70份PBC患者血清，80份其它肝病患者血清，80份自身免疫病患者血清和100份正常人血清。结果 70份PBC患者血清中检测出阳性患者62例，阴性8例，阳性率为87．6％。其它肝病患者血清、自身免疫病患者血清和正常人血清均为阴性。重组抗原检测M2抗体有一定的敏感性。结论 利用重组抗原OP检测M2抗体，有较好的敏感性及特异性，有助于PBC的临床诊断。