重组Ⅱ型单纯疱疹病毒(OH2)基因组修饰稳定性研究

目的探讨重组Ⅱ型单纯疱疹病毒(OH2)基因组修饰的稳定性。方法型别鉴定实验根据Ⅰ型(HSV-1)及Ⅱ型(HSV-2)单纯疱疹病毒g D糖蛋白基因的保守序列设计引物进行PCR扩增,HSV-1 PCR片段上有一个Msp I酶切位点,经酶切及电泳实验鉴别OH2病毒的型别;基因修饰实验根据被敲除或插入的序列位点上下游病毒核酸序列设计引物进行PCR扩增及电泳,并用电泳图分析OH2病毒基因组中是否剔除ICP34.5基因、ICP47基因及插入hGM-CSF基因;ELISA检测OH2上清中hGM-CSF含量验证插入的hGM-CSF基因能否正常表达。结果型别鉴定实验中HSV-1经酶切实验出现130bp和70bp两条条带,而HSV-2和OH2病毒PCR条带和酶切条带均只有一条,且为200bp。基因修饰实验中OH2病毒在四对引物下扩增,能扩增出对应大小的条带。ELISA实验中hGM-CSF浓度在31.25~500pg/m L范围内线性关系良好,且OH2病毒中hGM-CSF表达量均大于2ng/mL。结论 OH2病毒中被修饰的基因稳定地存在,同时插入的hGM-CSF基因能够正常表达。