血管紧张素(1～7)对鼠系膜细胞和OK细胞增殖的影响

目的 观察血管紧张素 (1～ 7) [Ang(1～ 7) ]对自发性高血压大鼠 (SHR)肾小球系膜细胞和负鼠肾小管OK细胞 (OK细胞 )增殖的影响。方法 采用体外培养的SHR肾小球系膜细胞和OK细胞 ,通过3 H 胸腺嘧啶核苷掺入法观察这两种细胞对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )及Ang(1～ 7)增殖变化。结果 (1)AngⅡ对SHR肾小球系膜细胞和负鼠肾小管OK细胞DNA合成的刺激作用 ,随着浓度的升高 (10 -10 ～ 10 -6mol/L)作用加强 ,且呈剂量依赖关系 ,而浓度进一步升高到 10 -5mol/L时 ,作用反而减弱。 (2 )当培养液中同时加入AngⅡ和Ang(1～ 7)时 ,随着Ang(1～ 7)浓度的升高 ,抗AngⅡ增殖作用逐步增强。 (3)当培养液中同时加入AngⅡ和血管紧张素转换酶抑制剂苯那普利拉 (Benazepri lat)时 ,随着Benazeprilat浓度的升高 ,抗AngⅡ增殖作用逐步增强。 结论 (1)AngⅡ能刺激自发性高血压大鼠肾小球系膜细胞和负鼠肾小管OK细胞增殖 ;(2 )Ang(1～ 7)和Benazeprilat能抑制AngⅡ引起的细胞增殖作用 ,对肾脏细胞可能有直接保护作用 ;(3)它们的抑制作用呈剂量依赖关系。

受体Megalin和Cubilin在培养的Opossum肾近端小管细胞的表达

目的及方法 采用Western印迹法及免疫细胞化学双标记法检测肾近端小管培养的OK细胞株上受体megalin及cubilin的表达及分布。结果 受体megalin及cubilin在分离的OK细胞膜上有所表达 ,并且 ,应用me galin及cubilin抗体的免疫细胞化学双标记法显示 ,它们分布在细胞内顶部胞质的细胞内吞系统 ,包括微绒毛根部的有被小凹、胞内的有被吞饮小泡、大泡、溶酶体及参与细胞膜再循环的顶部致密小管。结论 这一分布特征提示 ,两种大分子糖蛋白受体与肾近端小管上皮细胞受体介导的细胞内吞功能有关。由于其分布极其接近 ,很可能在一些大分子的重吸收中起到相互作用。

受体Megalin和Cubilin在Opossum肾小管细胞的表达及定位

目的 检测肾小管细胞膜大分子糖蛋白受体Megalin和Cubilin在Opossum肾小管 (OK)细胞的表达及亚细胞分布。方法 采用Western印迹法、免疫荧光双标记法及免疫细胞化学双标记法。结果 受体Megalin及Cubilin在分离的OK细胞膜上有表达 ,荧光双标记显示两种受体十分相似地分布在细胞周边部 ,电镜下 ,标记金颗粒的两种受体相近地分布在细胞顶部胞质的细胞内吞系统。结论 两种受体在OK细胞上的分布特征与两种受体在体内肾近端小管小皮细胞的分布相似 ,提示OK细胞可成为研究两种受体介导可能的、未知的配体细胞内吞功能的有效细胞株 。

受体megalin和cubilin介导白蛋白吸收的免疫组织化学研究

目的及方法 采用免疫荧光双标记技术对培养的opossum肾 (OK)细胞膜受体megalin和cubilin的表达及其与荧光标记的白蛋白摄取的关系进行研究。结果 不同荧光标记的受体megalin及cubilin同时表达在相同的OK细胞上 ,分布主要局限在细胞膜 ,而且形式相似。被摄取的荧光标记的白蛋白点状分布在OK细胞内。此外 ,有受体megalin和cubilin表达的细胞就有白蛋白的摄取 ;反之 ,既不表达受体megalin和cubilin的细胞 ,也没有白蛋白的摄取。结论 这种白蛋白的摄取与受体megalin和cubilin表达的特征提示 ,两种大分子糖蛋白受体megalin和cubilin与白蛋白的摄取有密切相关性 ,很可能在肾小管重吸收白蛋白中起到相互作用。

低浓度哇巴因对负鼠肾小管上皮细胞增殖的影响

目的:用低血清培养液来模拟肾脏供血不足的营养不良状态,研究低浓度哇巴因对低血清培养下OK细胞(负鼠肾小管上皮细胞)增殖的影响。方法:用低浓度哇巴因(1-30n M)处理0.2%血清培养下OK细胞,MTT实验和Brdu掺入法检测哇巴因对OK细胞增殖的影响;Western blot检测Akt和ERK1/2的磷酸化水平;用LY294002和PD98059分别抑制PI3K/Akt和ERK1/2蛋白激酶活性,观察抑制PI3K/Akt和ERK1/2对哇巴因促进OK细胞增殖的影响。结果:低浓度哇巴因(1-30n M)促进OK细胞的增值,上调OK细胞中Akt和ERK1/2磷酸化水平。用LY294002和PD98059特异抑制Akt和ERK1/2的活化能够抑制哇巴因的促增殖作用。结论:低浓度哇巴因(1-10n M)能够促进OK细胞的增值,PI3K/Akt和ERK1/2信号通路参与哇巴因对OK细胞促增殖作用的调节。