OK-432肿瘤细胞疫苗对荷瘤小鼠B细胞免疫效应的影响

目的探讨OK-432肿瘤细胞疫苗对DBA/2小鼠B细胞免疫效应的影响。方法利用7,12-二甲基苯蒽(DMBA)/巴豆油二阶段诱癌法建立DBA/2小鼠皮肤癌荷瘤模型,将荷瘤小鼠随机分为3组:OK-432疫苗组,OK-432组和空白对照组。各组小鼠于左侧腹腔分别注射浓度为5×105个/100μl的OK-432肿瘤细胞疫苗100μl、0.7 KE/100μl的OK-432 100μl、PBS液100μl,每周注射1次,连续注射3周,比较和分析不同实验组皮肤癌荷瘤小鼠的免疫应答。结果药物末次干预后第1,3,7,14天,OK-432疫苗组小鼠外周血中B淋巴细胞含量在各个时间点较空白对照组和OK-432组均明显升高(P<0.05);OK-432组与空白对照组前3 d差异不明显(P>0.05),第7天和第14天时较空白对照组明显增高(P<0.05)。结论 OK-432肿瘤疫苗能增加B细胞的含量,可以增强机体体液免疫应答。

基于M2与OK-432的肿瘤细胞裂解物致敏的树突状细胞疫苗抗小鼠Lewis肺癌作用研究

目的建立增强肺癌细胞裂解物（L）致敏的树突状细胞（D）疫苗（L-D）免疫临床治疗肺癌效果的方法.方法：以来源于热休克蛋白70第407-426的两段重复序列（M）和OK-432（O）为佐剂刺激Lewis肺癌细胞裂解物,制备了树突状细胞疫苗LMO-D.结果：与L-D相比,LMO-D显著增加CD11c、CD40、CD80、CD86、MHC-Ⅰ和Ⅱ等细胞表面抗原的表达;LMO-D免疫荷瘤小鼠后,显著增强Th1类细胞因子肿瘤坏死因子α和干扰素γ,而不增强Th2类细胞因子白介素-5的表达;T淋巴细胞增殖诱导显著和淋巴细胞毒反应; 此外LMO-D显著降低荷瘤小鼠瘤重与体积,延长了荷瘤小鼠的生存期.结论：LMO-D可通过诱导显著的T细胞免疫反应有效抑制肿瘤生长.

OK-432肿瘤疫苗对DBA/2小鼠脾脏细胞中Th1细胞因子以及TNF-α分泌的影响

目的利用DBA/2小鼠移植舌癌荷瘤模型,探讨OK-432肿瘤疫苗对DBA/2小鼠脾脏细胞中Th1细胞因子以及TNF-α分泌的影响。方法 ELISA定量检测脾脏淋巴细胞所产生的IFN-γ,IL-2,TNF-α等细胞因子的分泌水平。结果 OK-432肿瘤疫苗组中IFN-γ、IL-2以及TNF-α的含量明显高于实验对照组(P<0.05)。结论 OK-432肿瘤疫苗可刺激荷瘤小鼠脾脏细胞Th1细胞及TNF-α的分泌,增强DBA/2小鼠的抗肿瘤免疫功能。

OK-432肿瘤疫苗对小鼠肝癌细胞Hca-F抑制作用的研究

目的研究探讨OK-432肿瘤疫苗对小鼠淋巴高转移肝癌细胞Hca-F的抑制作用。方法对DBA/2小鼠背部接种高转移肝癌细胞Hca-F,建立肿瘤转移模型,设对照组和OK-432肿瘤疫苗组,3周后测量肿瘤大小,并绘制肿瘤生长曲线,检测各组抑瘤率、淋巴结转移抑制率,淋巴结石蜡切片HE染色观察两组淋巴细胞数。结果 OK-432肿瘤疫苗具有明显的抑瘤作用,抑瘤率达68.4%;淋巴结转移抑制率为31.6%;通过比较对照组和给药组淋巴结的HE染色,发现给药组淋巴结内淋巴细胞明显多于对照组。结论 OK-432肿瘤疫苗能够有效抑制肿瘤生长,促进机体免疫应答,抑制肿瘤的淋巴结转移。

抑制SOCS1联合OK-432刺激的DC疫苗抗肿瘤效应的初步研究

背景与目的:细胞因子信号抑制因子(suppressor of cytokine signaling1,SOCS1)在肿瘤免疫负反馈调节中起重要作用,下调其表达可以有效增强机体的抗肿瘤免疫反应。本研究应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术下调SOCS1基因表达联合OK-432刺激成熟的树突细胞(dendritic cell,DC)体外诱导特异性抗肿瘤作用,初步探讨其作用机制。方法:利用特异性小干扰RNA(siRNA)下调DC中SOCS1的表达,同时用肝癌HepG2细胞裂解物负载DC,OK-432刺激DC成熟,观察DC的形态特征,流式细胞仪检测刺激前后DC的表型变化,奥马蓝(AlamarBlue)法检测成熟DC对自身淋巴细胞的激活和增殖作用,LDH法检测其对HepG2、EC109细胞和K562细胞的杀伤作用。结果:DC体外诱导培养成功,设计的siRNA片段能有效下调iDC中SOCS1的表达,OK-432刺激DC成熟,CD80、CD83、CD86、HLA-DR等DC表面抗原明显表达上调,而负载肝癌抗原对DC表型无明显影响;SOCS1的下调可以促进DC成熟,负载肝癌抗原的DC能有效刺激自体淋巴细胞增殖,T细胞增殖率为(110.7±22.2)%,同时产生针对HepG2细胞的特异性杀伤作用,特异性细胞毒T淋巴细胞活性为(54.0±13.2)%。而针对EC109细胞和K562细胞的杀伤率仅为(10.0±30.7)%和(14.5±15.5)%。结论:RNAi下调SOCS1表达,OK432刺激负载肝癌全细胞抗原的成熟DC可以产生高效而特异性的抗肝癌的免疫应答。

OK432-肿瘤疫苗对DBA/2小鼠外周血中T细胞亚群的影响

目的探讨OK432-肿瘤疫苗对小鼠外周血T细胞亚群的影响。方法将36只DBA/2小鼠随机分为OK432-肿瘤疫苗组、OK432组及正常组,每组12只。培养细胞,制作疫苗后,对三组小鼠分别腹腔注射OK432-肿瘤疫苗、OK432及磷酸盐缓冲液(PBS),每周1次,连续3周。然后分别在1、3、7 d时眼球采血,利用流式细胞术检测外周血中的T细胞亚群的含量,采用SPSS 17.0软件进行数据处理。结果免疫后第3天,OK432-肿瘤疫苗组、正常组、OK432组CD3+T细胞平均值分别为(55.31±2.06)%、(48.81±3.60)%、(47.21±3.51)%;CD4+T细胞平均值分别为(40.55±2.32)%、(34.91±1.04)%、(34.24±0.95)%;OK432-肿瘤疫苗组与正常组及OK432组CD3+、CD4+T细胞差异均有统计学差异(P<0.05)。免疫后第7天,OK432-肿瘤疫苗组、正常组CD3+T细胞平均值分别为(36.26±1.98)%、(23.72±1.90)%;CD4+T细胞平均值分别为(27.11±0.87)%、(15.42±2.87)%;CD4+/CD8+的平均值分别为(3.47±0.33)%、(2.91±0.52)%,差异均有统计学差异(P<0.05);OK432-肿瘤疫苗组、OK432组CD8+T细胞的平均值为(7.85±0.98﹚%、(5.48±0.40)%,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 OK432-肿瘤疫苗能够有效增强小鼠的细胞特异性免疫能力。

OK432优化的内皮细胞疫苗抗小鼠乳腺癌作用研究

目的探讨OK432优化的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)疫苗对小鼠EAC乳腺癌的生长抑制作用。方法体外培养HUVECs,与佐剂OK432混合,制备HUVECs-OK432疫苗,以小鼠EAC乳腺癌皮下移植瘤模型考查HUVECsOK432疫苗的抗肿瘤效应,并通过ELISA、脾细胞增殖及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤实验检测疫苗免疫后体液及细胞免疫应答水平。结果在预防性免疫中,HUVECsOK432疫苗可以明显抑制EAC乳腺癌生长;HUVECs-OK432疫苗诱导小鼠产生了高滴度的特异性HUVEC抗体;HUVECs-OK432疫苗能有效刺激免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖;HUVECs-OK432组小鼠脾细胞诱导产生了明显的靶向HUVEC细胞的CTL杀伤作用。结论 HUVECs-OK432疫苗可以有效诱导机体产生靶向HUVEC的特异性体液及细胞免疫应答,从而有效抑制了小鼠EAC乳腺癌的生长。

OK-432增强脐血树突状细胞瘤苗抗胃癌作用的实验研究

目的:用脐血浆代替胎牛血清,观察OK-432对脐血来源的树突状细胞(DCs)功能的影响,探讨制备高效抗肿瘤DCs疫苗的优化方案。方法:分离脐血单个核细胞并在含10%同源脐血浆、GM-CSF和IL-4的培养体系中诱导培养,部分加入肿瘤冻融抗原和/或OK-432冲击,MTT法检测DCs体外刺激同种混合淋巴细胞增殖的免疫活性,LDH法检测DCs诱导的CTL对不同靶细胞的细胞毒作用。结果:收集第9 d的各组DCs,肿瘤冻融抗原冲击后的DCs呈成熟形态,能呈递胃癌相关抗原给淋巴细胞刺激其增殖并诱导对胃癌细胞株特异的CTL毒性。OK-432联合肿瘤冻融抗原冲击能增强其抗原呈递功能,诱导更强的混合淋巴细胞增殖反应及针对胃癌细胞株的强烈CTL杀伤效应。结论:该DCs培养方案具有培养时间短、细胞因子消耗少、试剂简单等优点,可用于制备DCs肿瘤疫苗,有临床应用价值。

OK-432增强人腹腔抗癌免疫功能的研究

目的 探讨腹腔内注射OK - 4 32增强腹腔免疫功能的机制。方法 选择非炎症和非肿瘤手术患者作为实验对象 ,实验组分别于手术前 72小时、4 8小时和 2 4小时腹腔内注射 4KE的OK - 4 32。开腹后采集腹腔内巨噬细胞 ,并用人胃癌MKN1细胞作为靶细胞对巨噬细胞的癌细胞毒性进行分析。同时采集大网膜 ,对大网膜乳斑的数量和面积进行了观察分析。结果 OK - 4 32显著增加了腹腔内巨噬细胞的数量 (P <0 .0 5 )、增强了巨噬细胞的吞噬活性和酶活性 (P <0 .0 5 )、增加了NO的分泌和巨噬细胞的癌细胞毒性 (P <0 .0 5 ) ,以及大网膜乳斑的数量和面积 (P <0 .0 5 )。结论 手术前腹腔内注射OK - 4 32可以作为预防癌细胞腹腔内种植转移的有效方法。

瘤体内注射OK－432和白细胞介素2治疗原发性肝癌的实验研究

本实验分组观测了不同给药方法时，ＯＫ－４３２和白细胞介素２（１Ｌ－２）对荷瘤鼠外周血ＮＫ细胞和ＬＡＫ细胞活性的影响。结果表明：ＯＫ－４３２和ＩＬ－２单独瘤体内注射对ＮＫ和ＬＡＫ细胞活性均有明显增强作用；联合给药时，ＯＫ－４３２和ＩＬ－２可产生明显的协同作用，这种协同作用以先注射ＯＫ－４３２接着注射ＩＬ－２或ＯＫ－４３２、ＩＬ－２同时注射时最强。

OK-432联合IL-2对C_(57)BL/6小鼠Lewis肺癌抑制的实验研究

目的:研究OK-432与IL-2联用,抑制近交系小鼠C_(57)BL/6 Lewis肺癌的作用。方法:以G_(57)BL/6小鼠Lewis肺癌为模型,观察OK-432联合IL-2对肿瘤发生、生长、转移的影响,及体内对肿瘤细胞的作用。结果:二者联用对肿瘤体积和重量的抑制作用明显增强(P<0.01),增强抑瘤率(P<0.05),肺转移灶的数目明显减少。光镜下显示肿瘤灶中出现许多凋亡细胞;肿瘤组织电镜观察,瘤细胞核染色质浓集成块,在核膜内呈新月形或环形排列,核膜清楚,瘤细胞内质网扩张,线粒体肿胀。结论:在二者剂量减半的情况下,联合用药的抑瘤效应仍得到加强,克服了IL-2的毒副作用,其杀瘤过程主要为对瘤细胞的直接攻击,和促进体内多种反应细胞相互作用,诱导瘤细胞的凋亡。

OK-432抗人卵巢癌细胞SKOV3生长及诱导凋亡机制研究

目的观察OK-432(主要活性成分为OK-PSA)体外对人卵巢癌细胞株SKOV3凋亡的影响,探讨其作用机制。方法对数生长期的SKOV3细胞随机分为对照组和OK-432给药组(浓度分别为10、20、40、80、160mg/L),给药24h之后,倒置显微镜观察细胞形态,MTT法测定OK-432对SKOV3细胞增殖的影响。应用20mg/L的OK-432处理SKOV3细胞,免疫荧光法检测内质网功能相关蛋白PDI随时间表达情况,Western blotting检测SKOV3肿瘤细胞内质网应激和凋亡相关蛋白随时间表达水平。结果MTT法检测结果显示,与对照组相比较,OK-432可呈剂量依赖性抑制SKOV3细胞增殖(P<0.05),20mg/L的OK-432即可使肿瘤细胞变圆,体积缩小,脱壁细胞增多;随着OK-432给药时间延长,PDI在细胞核周聚集的量逐渐增加,凋亡相关蛋白cleaved-caspase 3、内质网应激相关蛋白Grp-78、CHOP表达量也逐渐增加。结论OK-432可能通过内质网应激来诱导SKOV3凋亡。

OK-432抑制人乳腺癌细胞体外增殖及机制研究

目的从细胞增殖方面观察OK-432对乳腺癌细胞MCF-7的抑制作用。方法通过MTT比色法、软琼脂克隆形成实验和细胞周期检测观察MCF-7细胞的生长情况;通过流式细胞仪检测MCF-7细胞的增殖细胞核抗原(PC-NA)表达。结果 OK-432能明显降低MCF-7细胞的增殖代谢活性而抑制其增殖。药物处理组具有显著的生长抑制作用(F=3.765,P=0.000)。OK-432组S+G2/M期的细胞比例为(25.53±1.77)%,与空白对照组(39.32±2.56)%相比显著下降(P<0.05)。结论 OK-432能显著抑制MCF-7细胞增殖。

OK-432腹腔注射的抗肿瘤免疫机制(文献综述)

OK-432是一种链球菌族的减毒冻干制剂,腹腔内应用,通过诱导和激发中性粒细胞、淋巴细胞及巨噬细胞等,增加这些效应细胞活性进入腹腔对肿瘤细胞进行包裹破坏,并抑制肿瘤细胞生长,从而减少或消除胃肠道肿瘤病人癌性腹水和腹腔内肿瘤细胞。同时,它还降低抑制细胞的趋化,对全身的免疫机制也起到调节作用,增加肿瘤宿主的抗肿瘤免疫机制。

瘤体内注射OK-432和白细胞介素2治疗原发性肝癌

瘤体内注射ＯＫ－４３２和白细胞介素２治疗原发性肝癌吴建卫陈汉吴孟超我们观察了ＯＫ－４３２（人源性Ａ组溶血性链球菌Ⅲ型Ｓｕ株，经青霉素灭活，４５℃热处理后，冷冻干燥而成的制剂）和白细胞介素２（ＩＬ－２）联合应用，对荷瘤鼠免疫功能的影响，以及对原发性肝癌...

肿瘤细胞裂解物抗小鼠B16F10黑色素瘤的作用研究

反复冻融B16F10肿瘤细胞制备裂解物,以白喉毒素(Diphtheria toxin,DT)为载体,OK432和来源于结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)热休克蛋白70(HSP70)第407-426(mHSP70407～426,M)的两段串联重复序列M2为佐剂,制备了肿瘤细胞疫苗B16F10-DT-M2-OK432(BDTMOK),探讨其能否抑制小鼠B16黑色素瘤,并且对其抗肿瘤的作用机理进行部分探讨。以制备的BDTMOK免疫C57BL/6小鼠,分别检测体液免疫应答和细胞免疫应答。通过ELISA法,从血清中检测到高滴度的抗B16肿瘤细胞裂解物(B16 tumor cell lysate,B16TCL)类抗体。淋巴细胞增殖实验的结果显示,BDTMOK的免疫能够有效的刺激脾淋巴细胞的增殖。预防结合治疗性实验的结果显示,BDTMOK激发的免疫应答对于B16肿瘤攻击起到有效的保护作用,与PBS阴性对照组比较,皮下注射BDTMOK可以延长皮下移植瘤发生的潜伏期(P<0.05),并且平均瘤重显著降低(P<0.05);抑制了小鼠皮内肿瘤模型中的血管新生(P<0.01)。疫苗BDTMOK能有效的抑制小鼠B16黑色素瘤的生长。