Ola1对小鼠早期胚胎体外发育的影响

【目的】探究Obg样ATP酶1(Obg-like ATPase 1,Ola1)对小鼠早期胚胎发育的影响。【方法】采用体外受精技术获取小鼠合子并进行胚胎体外发育培养,利用电转siRNA干扰技术敲低Ola 1基因,检测Ola 1基因干扰效率,并统计卵裂率和囊胚率;通过免疫荧光和TUNEL法检测胚胎的DNA损伤情况和早期凋亡情况;利用实时荧光定量PCR检测胚胎多能性和凋亡相关基因的转录水平。【结果】与对照组相比,敲低Ola 1基因后,小鼠胚胎中Ola 1基因相对表达量极显著降低(P<0.01),成功实现小鼠胚胎中敲低Ola 1基因表达。敲低Ola 1基因后,早期胚胎卵裂率与对照组相比无显著差异(P>0.05),但囊胚率极显著低于对照组(P<0.01),γ-H2A.X荧光强度和囊胚凋亡率极显著高于对照组(P<0.01),表明敲低Ola 1基因引起早期胚胎体外发育受阻。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,敲低Ola 1基因后,早期胚胎的多能性相关基因性别决定区Y框蛋白2(SOX2)和多潜能性基因(Nanog)表达量极显著降低(P<0.01),促凋亡基因B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase3)表达量显著或极显著上调(P<0.05;P<0.01),抗凋亡基因B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达量极显著下调(P<0.05)。【结论】Ola1可能通过调控早期胚胎的多能性相关基因表达,参与DNA损伤和早期胚胎凋亡过程,从而影响早期胚胎发育潜力。

超保守RNA uc.102-uc.106及其宿主基因OLA1在不同组织中的差异表达

目的:本研究旨在探究超保守RNA uc.102-uc.106基因簇及其宿主基因Obg样ATP酶1(OLA1)在C57BL/6J小鼠不同组织器官中的表达差异。方法:选取5只8~10周龄的健康雄性C57BL/6J小鼠,在正常生理条件下采集不同组织器官(包括肝脏、睾丸、骨髓、大脑、肾脏、血液、肺、结肠、胸腺、脾脏、胃、心脏、淋巴结和膀胱)。同时使用磁珠分选技术提取骨髓血细胞,包括B细胞、巨噬细胞、有核红细胞和成熟红细胞。通过RT-qPCR技术,以GAPDH作为内参照,检测uc.102-uc.106和OLA1 mRNA的表达量。结果:OLA1 mRNA在C57BL/6J小鼠大脑、淋巴结、睾丸和胸腺中呈高水平表达,在肝脏、脾脏、肺、结肠和外周血中呈低水平表达(P<0.05)。uc.102-uc.106的表达趋势与OLA1的mRNA表达基本相反,但在睾丸组织中两者均呈高水平表达(P<0.05)。在血细胞中,OLA1和uc.102-uc.106在B细胞中的表达水平最高,在成熟红细胞中的表达水平最低(P<0.05)。结论:OLA1基因和uc.102-uc.106基因簇在C57BL/6J小鼠的不同组织器官及血细胞中均有表达且存在差异。值得注意的是,OLA1基因和uc.102-uc.106基因簇在小鼠睾丸中均呈高水平表达,表明OLA1基因和uc.102-uc.106基因簇可能与雄性小鼠的生殖功能密切相关。

OLA1通过抑制细胞凋亡影响乳腺癌细胞耐药性机制探讨

乳腺癌是世界上发病率最高的癌症之一,在临床治疗中以手术为主,化学药物治疗为辅.为解决化疗进行中,病患身上出现的对药物的耐受性问题,通过构建乳腺癌耐药细胞株研究OLA1变化对乳腺癌耐药性影响,依靠siRNA转染改变OLA1在细胞内的表达情况,接着使用流式细胞仪检测OLA1变化对细胞凋亡影响.最终发现OLA1通过影响细胞凋亡相关蛋白表达,降低紫杉醇对乳腺癌细胞的杀伤效果,由此提高乳腺癌细胞对药物的耐受性.

OLA1对香烟暴露下肺部结构细胞损伤的调控机制研究

目的:研究OLA1对香烟暴露下肺部结构细胞损伤的影响机制。方法:A549细胞暴露于香烟烟雾提取物(5%CSE)。Si RNA下调OLA1表达后,通过化学比色法检测A549细胞的超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(Malonaldehyde,MDA)表达变化,通过Western blot法检测A549细胞的OLA1和ERS标志物葡萄糖调节蛋白78(Glucose-regulated protein of 78 kD,GRP78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)的表达水平。结果:si RNA下调A549细胞OLA1表达后,5%CSE暴露下的A549细胞的SOD含量随着时间延长逐渐降低,但下降程度明显减轻(P<0.05),MDA表达水平刺激15 min、30 min后上升,60 min后表达下降。5%CSE处理si RNA下调A549细胞OLA1表达后,A549细胞的OLA1及ERS相关蛋白CHOP、GRP78在各个时间点表达无明显增加或减少(P>0.05)。结论:香烟暴露下,下调A549细胞中OLA1表达,可减轻A549细胞的OS/ERS水平。这有可能进一步减轻了A549细胞的损伤。

膀胱癌组织中OLA1、BARD1表达水平及临床预后意义

目的分析膀胱癌组织中Obg样ATPase 1(OLA1)、乳腺癌基因1相关环指结构域蛋白1(BARD1)的表达水平及临床预后意义。方法选取2014年3月至2017年3月经本院确诊并进行手术治疗的80例膀胱癌患者的癌组织(癌组织组)与距肿瘤边缘4 cm处的癌旁组织标本(癌旁组织组)作为研究对象。根据免疫组化染色结果, 将膀胱癌组织分为OLA1高表达组(52例)、OLA1低表达组(28例)、BARD1高表达组(50例)和BARD1低表达组(30例)。分析OLA1、BARD1表达水平与膀胱癌患者的临床病理特征的关系, 采用Cox回归分析探讨影响膀胱癌患者预后的相关因素。结果 OLA1、BARD1在癌组织组的高表达率(65.00%、62.50%)均明显高于癌旁组织(41.25%、43.75%)(均P<0.05)。OLA1、BARD1高、低表达组患者的年龄、性别、肿瘤长径比较, 差异均无统计学意义(均P>0.05);OLA1、BARD1高表达组的病理分级、临床分期T2~T4、淋巴转移、复发患者多于OLA1、BARD1低表达组, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。OLA1高表达、低表达组患者的5年存活率分别为30.77%(16/52)、89.29%(25/28), BARD1高表达、低表达组患者的5年存活率分别为30.00%(15/50)、86.67%(26/30), OLA1、BARD1高表达组与低表达组的5年存活率比较, 差异均有统计学意义(P<0.05)。单因素分析得出:病理分级、临床分期、淋巴结转移、是否复发以及OLA1、BARD1表达水平均与膀胱癌患者的预后密切相关(均P<0.05)。多因素Cox回归分析得出:淋巴转移、高级别病理分级、T2~T4临床分期、复发、OLA1高表达、BARD1高表达均为影响膀胱癌患者预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论膀胱癌组织中OLA1、BARD1均呈高表达, 且表达水平与患者病理分级、临床分期、淋巴转移、是否复发显著相关, 可作为预测膀胱癌患者预后的肿瘤标志物。

吸烟慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中OLA1表达与氧化应激、内质网应激的相关性分析

目的探讨吸烟慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺组织中OLA1表达与氧化应激(OS)、内质网应激(ERS)的相关性。方法收集胸外科手术患者的肺组织标本24例,分为非吸烟肺功能正常组、吸烟肺功能正常组、吸烟COPD组,每组各8例;采用免疫组化检测肺组织中OLA1、OS指标超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和ERS相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达水平,并分析OLA1表达水平与OS水平、ERS活化程度的相关性。结果 OLA1、MDA、GRP78、CHOP在吸烟COPD组和吸烟肺功能正常组中表达明显高于非吸烟肺功能正常组(P<0.05),吸烟COPD组高于吸烟肺功能正常组(P<0.05),SOD在吸烟COPD组和吸烟肺功能组中表达明显低于非吸烟肺功能正常组(P<0.05),吸烟COPD组低于吸烟肺功能正常组(P<0.05); Pearson直线相关分析OLA1在肺组织中表达与MDA表达呈正相关(r=0.793,P<0.01),与SOD表达呈负相关(r=-0.643,P<0.01),与GRP78表达呈正相关(r=0.815,P<0.01),与CHOP表达呈正相关(r=0.843,P<0.01)。结论与非吸烟肺功能正常组相比,吸烟肺功能正常和吸烟COPD患者肺组织标本中支气管上皮细胞和肺泡上皮细胞OLA1表达明显升高,OS、ERS水平显著升高; OLA1水平与OS、ERS水平具有显著相关性,提示OLA1表达上调可能参与吸烟相关COPD的发病机制。

特异性GTP酶YchF及其在蛋白质生物合成中的功能研究进展

GTP酶是一类参与多种重要细胞过程的蛋白质,例如信号转导、核糖体组装、细胞运动、细胞内转运和翻译等。在真核生物、细菌和古细菌中存在一组普遍保守的GTP酶,YchF是其中之一,这些普遍保守的GTP酶一般参与细胞中的蛋白质翻译、核糖体合成和蛋白质的靶向运输等。除YchF功能未知之外,其余酶的功能均与蛋白质的生物合成或核糖体组装相关。蛋白质是生物体内具有重要功能的大分子,核糖体的异常组装会导致胞内蛋白生物合成紊乱,严重时导致细胞死亡从而对机体造成伤害。探讨YchF及其同源物的功能具有重要的现实意义。本文从YchF的结构出发,探讨其结构可能具备的功能、结合蛋白的研究进展,以期为揭示YchF在细胞中的功能提供研究思路。