泌尿生殖道沙眼衣原体omp1基因多态性研究

从中国不同城市收集疑为沙眼衣原体(Ct)感染的泌尿生殖道标本323份,巢式PCR扩增Ctomp1基因片段(包括4个变异区),测定其中96份阳性标本omp1基因序列,根据同源性分型并分析其多态位点;根据氨基酸序列,用Mega 3软件构建进化树,分析临床株与相应参考株之间的亲缘关系。从96份沙眼衣原体阳性标本中,检出28种基因变体,其中E型最常见;同时发现Ct E、F型omp1基因高度保守,而其它基因型都显示一定的变异性。进化树分析发现,各临床株与相应参考株之间遗传距离较近。实验结果表明沙眼衣原体omp1基因呈现较大的多态性,可为其疫苗的研制及感染的防治提供重要的实验依据。

沙眼衣原体15个血清型omp1基因的VS1和VS2区序列分析

目的比较分析沙眼衣原体15个血清型omp1基因VS1和VS2序列的同源性和变异性。方法巢式PCR扩增VS1-VS2基因，自动测序仪测定核苷酸序列，DNAstar生物软件进行比对分析。结果15个血清型沙眼衣原体扩增出大小453bp的VS1-VS2基因。VS1区域序列比对显示血清群B和中间群的VS1核苷酸序列相对保守，而血清群C各型VS1区域表现出较大的核苷酸变异，型间显示1～9个核苷酸替换，且发生在中心区域。血清型VS2序列较VS1存在更多的变异，血清群B中各血清型间均存在2～19个核苷酸的改变，血清群C表现为4～8个核苷酸差异，中间群的F和G型之间存在6个核苷酸差异。结论阐明VS1和VS2区核苷酸的多态性，为下一步进行该蛋白表达和构建寡核苷酸型特异性探针奠定了基础。

沙眼衣原体Omp1变异性与致病性的研究进展

沙眼衣原体是沙眼和非淋菌性尿道炎的最主要病原体之一。而沙眼衣原体感染的临床过程差异性较大,人们认为这与个体差异或型别有关。omp1基因编码主要外膜蛋白,是研究沙眼衣原体最重要的靶基因,omp1基因的变异性可引起沙眼衣原体致病性的改变,因此研究omp1变异性对沙眼衣原体的致病性具有重要的意义。

F型沙眼衣原体主外膜蛋白基因omp1原核表达及其序列分析

目的对F型沙眼衣原体主外膜蛋白(MOMP)基因进行原核表达,获得omp1基因重组蛋白,并对克隆到的基因进行序列分析,为F型沙眼衣原体的诊断及疫苗研究奠定基础。方法利用PCR技术从沙眼衣原体阳性病人尿道拭子标本中扩增omp1基因,分析序列,并定向克隆入原核表达载体pGEX-5X3中,与GST进行融合表达。结果对克隆到的沙眼衣原体omp1基因进行序列分析,基因序列与F型沙眼衣原体F/IC-CAL3相似性达99%,构建Omp1-pGEX-5X3重组质粒,omp1与GST融合表达。结论成功构建F型沙眼衣原体omp1基因原核表达系统,得到重组蛋白,为沙眼衣原体疫苗的研究和临床检测试剂盒的研制打下基础。

Cloning of Omp1 Gene from Chlamydia trachomatis F Genotype

Objective: To directionally clone the ompl gene fromChlamydia trachomatis (Ct) F genotype onto a plasmid vectorfor constructing a rudimentary DNA vaccine. Methods: The complete ompl gene from genomic DNA of CtF genotype wild species was amplified with primers designedby computer. The recombinant gene was obtained byrestriction enzyme cutting, linking the gene with the plasmidvector in vitro, transforming the recombinant gene intobacteria, and extracting the DNA from the bacteria. Results: DNA extracted from the bacteria was composed ofthe ompl gene and plasmid, which is identified by threemethods of singular restrictive enzyme cutting, doublerestrictive enzyme cutting and PCR. Conclusion: Cloning of the ompl gene from the Ct Fgenotype means that a rudimentary DNA vaccine wassuccessfully constructed.

基于Omp1基因的泌尿生殖道感染沙眼衣原体多样性及分布特征分析

目的基于主要外膜蛋白基因(Omp1)研究泌尿生殖道感染患者沙眼衣原体多态性及分布特征,为该疾病的诊治及疫苗研究奠定基础。方法对泌尿生殖道感染临床标本常规处理后,使用沙眼衣原体核酸检测试剂盒筛选阳性标本,然后以巢式PCR扩增Omp1基因,选择4个限制性内切酶进行RFLP分析确定其基因型,选择代表菌株测定Omp1的DNA序列并与参比菌株比较确定其血清型,最后将基因型及血清型与患者的性别、科室及年龄进行对比分析,研究其分布特征。结果 2013-2014年2年间共筛选得到178份阳性标本,61份标本扩增获得Omp1基因,Omp1-PFLP分析将61份标本分为6个基因型,占比分别为24.59%,24.59%,4.92%,9.84%,3.28%和32.79%,血清型分析表明61份标本属于F,H,J,G,Da,D和E 7种血清型,E型及F型占比最多。结论本地区引起泌尿生殖道感染的沙眼衣原体主要属于F,H,J,G,Da,D和E 7种血清型,E型及F型占比最多,基因型及血清型与患者性别具有相关性,与科室、年龄无相关性。

血清E型沙眼衣原体的Real-time PCR定量分析

目的沙眼衣原体感染是最常见的性传播疾病,本文拟建立一种准确快速、标准化的感染动物组织衣原体载量检测体系。方法体外扩增感染用沙眼衣原体血清E型,克隆衣原体特异基因OMP1基因片段作为标准品,用Real time PCR法测定衣原体基因组拷贝数进行衣原体定量。结果 Real time PCR在OMP1基因片段200至2×108拷贝检测结果成线性,在模板中加入小鼠基因组未出现非特异扩增,同时未影响扩增效率。结论针对衣原体特异基因OMP1的实时定量PCR方法可以较为灵敏的特异的定量检测感染动物样本中的衣原体。

中国南方部分城市泌尿生殖道沙眼衣原体基因分型研究

目的 了解中国南方4个城市性病高危人群中沙眼衣原体（Ct）基因型的分布特征。方法 从衡阳、上海、广州、江门四个城市的性病门诊收集1180份泌尿生殖道标本，经质粒PCR筛选后，阳性者用巢式PCR扩增Ctompl基因片段，酶切omp1扩增产物，分析Ct各临床株omp1基因的限制性片段长度多态性（RFLP），将临床株分型。结果 Ct质粒PCR阳性者301份，用于分型者286份。通过RFLP分型，共检出10个基因型，其中常见的是E（30．8％）、J（23．8％）、D（17．5％）、F（10．5％）、G（6．2％）型，并且不同城市间基因型的分布差异无统计学意义（r=0．981，P〉0．05）。结论 4个城市存在Ct多种基因型，并且基因型的分布大致相同。

湘西地区女性泌尿生殖道沙眼衣原体感染状况及基因分型初步研究

目的对湘西地区女性泌尿生殖道沙眼衣原体的感染状况及基因分型进行初步研究。方法利用单克隆抗体直接免疫荧光法(DFA)对100例宫颈病变患者及77位健康女性进行筛查,对沙眼衣原体感染者的宫颈管内拭子标本直接进行套式PCR,扩增主要外膜蛋白基因(Omp1)第4可变区(VS4),对将扩增的Omp1VS4基因片段进行测序、分型,并进行同源性分析。结果DFA检测177名妇女的宫颈拭子标本,36份沙眼衣原体阳性,29份阳性标本扩增出277bp目的DNA。经基因测序,共检出8个基因型,其中E型9株(31.0%)、F型7株(24.1%)、G型5株(17.2%)、D型3株(10.3%)、H型2株(6.9%)、J型1株(3.5%)、Ba型1株(3.5%)、K型1株(3.5%),4例存在Omp1基因变异。结论湘西地区女性存在生殖道沙眼衣原体感染,利用对基因的多态性分析可以对沙眼衣原体感染流行情况作出分析。