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大肠杆菌外膜蛋白OmpF结构研究进展 被引量:5
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作者 赵志平 聂鑫 +3 位作者 李再新 张智 谢万如 王艺军 《四川理工学院学报(自然科学版)》 CAS 2012年第1期6-9,共4页
OmpF是大肠杆菌最重要的外膜蛋白之一,它形成的离子通道是大肠杆菌与外界进行物质交换的重要通道,能够使分子量不超过600 Da的水溶性物质通过该离子通道穿越外膜。OmpF外膜蛋白与大肠杆菌的耐药性、抗酸性以及抗渗透压等生理活动密切相... OmpF是大肠杆菌最重要的外膜蛋白之一,它形成的离子通道是大肠杆菌与外界进行物质交换的重要通道,能够使分子量不超过600 Da的水溶性物质通过该离子通道穿越外膜。OmpF外膜蛋白与大肠杆菌的耐药性、抗酸性以及抗渗透压等生理活动密切相关。OmpF的功能与其结构特征密不可分。阐述了大肠杆菌外膜蛋白OmpF及其组成元件Loop 3环的结构特征。 展开更多
关键词 大肠杆菌 外膜蛋白 ompf LOOP 3
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鲁氏耶尔森氏菌外膜蛋白ompF基因的分子克隆、生物信息学与免疫原性分析 被引量:2
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作者 王二龙 秦振阳 +3 位作者 汪开毓 陈德芳 王均 贺扬 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期24-34,共11页
为筛选潜在的保护性抗原基因研制鲁氏耶尔森氏菌(Yersinia ruckeri)基因工程疫苗,实验利用特异性引物扩增分离自斑点叉尾(Ictalurus punctatus)的Y.ruckeri外膜蛋白omp F基因并对其进行分子克隆,应用相关软件和程序对其核苷酸及氨基... 为筛选潜在的保护性抗原基因研制鲁氏耶尔森氏菌(Yersinia ruckeri)基因工程疫苗,实验利用特异性引物扩增分离自斑点叉尾(Ictalurus punctatus)的Y.ruckeri外膜蛋白omp F基因并对其进行分子克隆,应用相关软件和程序对其核苷酸及氨基酸序列进行生物信息学分析,并进行了omp F蛋白的表达和免疫原性检测。结果显示,omp F基因全长1 095 bp(Gen Bank登录号KP159420),包含一个编码364个氨基酸的完整开放阅读框,其氨基酸序列具有极高保守性,与Y.ruckeri外膜穿孔蛋白omp F(Gen Bank登录号ADK27779.1)亲缘关系最近,序列一致性为99.2%,进化树聚为一支;具有1个革兰氏阴性菌穿孔蛋白保守结构域,存在1个信号肽和1个跨膜区,是一种跨膜蛋白;具有12个与免疫相关的抗原决定簇区域。SDS-PAGE分析发现该蛋白主要以包涵体形式表达在沉淀,经Western-bolt显示omp F蛋白具有较好的免疫原性。以上结果表明omp F基因可作为Y.ruckeri基因工程疫苗的候选抗原基因。 展开更多
关键词 鲁氏耶尔森氏菌 外膜蛋白 ompf基因 分子克隆 生物信息学 免疫原性
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Cloning and Sequence Analysis of Mutant OmpF from Antibiotic Resistant Escherichia coli 被引量:1
3
作者 Xin NIE Li ZHANG +3 位作者 Tingting LIU Yang ZHAO Zaixin LI Zhiping ZHAO 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2014年第3期50-52,共3页
[Objective]This study aimed to investigate the mutations of OmpF from an isolated antibiotic resistant Escherichia coli strain.[Methods]The mutant OmpF(mOmpF)from antibiotic resistant E.coli was amplified by PCR wit... [Objective]This study aimed to investigate the mutations of OmpF from an isolated antibiotic resistant Escherichia coli strain.[Methods]The mutant OmpF(mOmpF)from antibiotic resistant E.coli was amplified by PCR with Pfu DNA polymerase and ligated into the expression vector pET28a.Subsequently,the expression vector pET28-mOmpF was sequenced and analyzed by DNAMAN software and Swiss-Model online.[Result]Sequence analysis revealed that the open reading fragment of mOmpF was 903 bp long,which was mutated dramatically compared to that of the 1 020 bp long model OmpF.The DNA sequence shared only54.5%homology with OmpF.mOmpF was 44.6%identical to that of OmpF.Protein structure predication and analysis through Swiss-Model online suggested that the structure of mOmpF changed dramatically compared to OmpF.[Conclusion]The present study provided basis for further analyzing the relationships between the structure and functions of mOmpF from antibiotic resistant E.coli. 展开更多
关键词 mompf Outer membrane protein ompf Antibiotic resistance
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云南撒坝猪致病性大肠杆菌OmpF基因缺失株与β-内酰胺类抗生素耐药性关系的研究
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作者 王红丹 崔艳艳 +3 位作者 高洪 严玉霖 赵汝 吴程华 《上海畜牧兽医通讯》 2016年第1期9-11,共3页
通过测定大肠杆菌OmpF基因缺失株与亲本株的生长曲线,以及运用药敏实验和MIC实验比较大肠杆菌基因OmpF缺失株与亲本株对β-内酰胺类中几种抗生素的耐药性,从而了解OmpF基因缺失对菌株生长的影响及与β-内酰胺类抗生素耐药关系。结果表... 通过测定大肠杆菌OmpF基因缺失株与亲本株的生长曲线,以及运用药敏实验和MIC实验比较大肠杆菌基因OmpF缺失株与亲本株对β-内酰胺类中几种抗生素的耐药性,从而了解OmpF基因缺失对菌株生长的影响及与β-内酰胺类抗生素耐药关系。结果表明:在同样的正常培养条件下,基因缺失株F-M-2/OmpF~Δ相对于亲本株F-M-2生长较缓慢,稳定期OD_(600)值相对于亲本株较低。对于β-内酰胺类中几种抗生素,基因缺失株相对于亲本株耐药性明显增强。 展开更多
关键词 ompf基因 β-内酰胺类抗生素 耐药性 药敏实验
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伤寒沙门菌外膜孔道蛋白ompC、ompF缺陷株的制备及其耐药性 被引量:3
5
作者 汪伟伟 夏歆 +4 位作者 王静瑜 张桂红 陈龙 黄新祥 生秀梅 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2015年第6期532-535,542,共5页
目的:制备伤寒沙门菌omp C缺陷株及omp C-omp F双缺陷株,研究外膜孔道蛋白Omp C、Omp F在伤寒沙门菌耐药中的作用。方法:经自杀质粒介导的同源重组方法制备omp C缺陷株及omp C-omp F双缺陷株,比较伤寒沙门菌omp C缺陷株、omp F缺陷株及o... 目的:制备伤寒沙门菌omp C缺陷株及omp C-omp F双缺陷株,研究外膜孔道蛋白Omp C、Omp F在伤寒沙门菌耐药中的作用。方法:经自杀质粒介导的同源重组方法制备omp C缺陷株及omp C-omp F双缺陷株,比较伤寒沙门菌omp C缺陷株、omp F缺陷株及omp C-omp F双缺陷株与野生株在多黏菌素B、卡那霉素以及氨苄青霉素处理下的生存能力。结果:成功制备伤寒沙门菌omp C单缺陷以及omp C-omp F双缺陷株。各菌株在普通培养条件下生长情况无差异;多黏菌素B及氨青苄霉素处理条件下omp C缺陷株、omp C-omp F双缺陷株生存能力明显强于野生株,而omp F缺陷株生存能力则低于野生株;卡那霉素处理条件下,各缺陷株生存能力均明显低于野生株。结论:外膜孔道蛋白Omp C、Omp F参与伤寒沙门菌耐药,但对不同药物的耐药机制不尽相同,具体机制有待进一步研究。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 OMPC ompf 抗生素 耐药性
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嗜水气单胞菌孔蛋白OmpF重组表达及其免疫原性分析 被引量:6
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作者 高云山 刘丹丹 +4 位作者 徐俊林 桑雨浓 梁夏夏 刘建欣 王文彬 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期234-243,共10页
气单胞菌外膜蛋白 OmpF 是β-桶状结构的孔蛋白,参与渗透压环境适应调控,在人鱼共患病原气单胞菌属中保守性较高,作为免疫检测靶点具有较高的研究价值。通过人工合成得到了 GenBank 已发表的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)OmpF 基... 气单胞菌外膜蛋白 OmpF 是β-桶状结构的孔蛋白,参与渗透压环境适应调控,在人鱼共患病原气单胞菌属中保守性较高,作为免疫检测靶点具有较高的研究价值。通过人工合成得到了 GenBank 已发表的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)OmpF 基因片段,将其插入质粒 pET-28a(+)后转入大肠杆菌 BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后表达出分子量为 40 kD 左右的重组蛋白。经过优化表达温度和 IPTG 诱导浓度等后,重组蛋白主要以包涵体的形式表达。采用纯化的包涵体免疫BALB / c 小鼠,ELISA 结果表明小鼠血清与煮沸灭活的 11 株气单胞菌中的 10 株(10/11)均有特异性交叉反应,效价在 1∶81 000,与副溶血性弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌、鳗弧菌、哈维氏弧菌及地衣芽孢杆菌无交叉反应。上述结果表明重组蛋白 OmpF 具有较好的免疫原性和气单胞菌保守性,可以用于制备气单胞菌交叉型抗体。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 外膜蛋白ompf 重组表达 免疫原性
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大肠杆菌外膜蛋白ompF基因与Ⅰ类整合酶基因在生物被膜状态下表达相关性的研究 被引量:1
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作者 王艺凝 周建华 +2 位作者 马丽娜 李学瑞 刘永生 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期109-115,161,共8页
本试验拟研究生物被膜状态下外膜蛋白ompF基因与大肠杆菌Ⅰ类整合酶基因表达的相关性,初步探讨外膜蛋白对Ⅰ类整合酶基因的调控作用。利用Red同源重组系统构建大肠杆菌野生株的ompF基因缺失株和回复株,分别检测它们的生长曲线,并通过实... 本试验拟研究生物被膜状态下外膜蛋白ompF基因与大肠杆菌Ⅰ类整合酶基因表达的相关性,初步探讨外膜蛋白对Ⅰ类整合酶基因的调控作用。利用Red同源重组系统构建大肠杆菌野生株的ompF基因缺失株和回复株,分别检测它们的生长曲线,并通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测生物被膜状态下亲本株,ompF基因缺失株和回复株的Ⅰ类整合酶基因mRNA的表达水平,分析它们的表达相关性。生长曲线检测发现ompF基因虽然不是大肠杆菌生长繁殖所必需的功能性基因,敲除后不会导致大肠杆菌的死亡,但会对大肠杆菌的生长有一定的影响。生物被膜状态下ompF基因缺失株Ⅰ类整合酶基因的表达水平比野生株明显降低,回复株Ⅰ类整合酶基因的表达水平有所升高,但未回复到野生株的表达水平。初步确定在生物被膜状态下,ompF基因对大肠杆菌Ⅰ类整合酶基因的表达有影响,此结果可为进一步研究生物被膜状态下大肠杆菌的耐药机制开拓新的研究方向。 展开更多
关键词 大肠杆菌 ompf基因 Ⅰ类整合酶 耐药基因
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富营养化对大肠杆菌耐药性及外膜蛋白OmpF表达水平的影响 被引量:1
8
作者 黄启发 陈秀萍 +4 位作者 陈玉红 肖正润 丘建龙 徐超 俞道进 《畜牧与兽医》 北大核心 2015年第5期88-92,共5页
为了研究水体富营养化对大肠杆菌耐药性与外膜蛋白Omp F表达水平之间的相关性,通过建立模型生态系统,分离纯化大肠杆菌进行药敏试验,并采用Western-Blot蛋白印迹法对耐药大肠杆菌Omp F的表达水平进行定量研究。结果显示:从低剂量组中不... 为了研究水体富营养化对大肠杆菌耐药性与外膜蛋白Omp F表达水平之间的相关性,通过建立模型生态系统,分离纯化大肠杆菌进行药敏试验,并采用Western-Blot蛋白印迹法对耐药大肠杆菌Omp F的表达水平进行定量研究。结果显示:从低剂量组中不同时期分离的多株大肠杆菌对AMP、CF、TEL和CHL 4种抗生素同时表现为高水平耐药,表明大肠杆菌多重耐药的出现与系统环境富营养化有关;对5株耐药大肠杆菌及3株敏感大肠杆菌的Omp F表达水平定量分析显示,与空白组相比,耐药大肠杆菌的Omp F在第16天后显著下调并且维持到第68天,表明轻度富营养化导致大肠杆菌耐药的出现和维持可能与Omp F的减量表达有关。本研究结果为进一步开展富营养状态下大肠杆菌耐药性的形成和维持的研究提供了理论基础。 展开更多
关键词 大肠杆菌 富营养化 模型生态系统 ompf 耐药
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膜孔蛋白在产AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的作用 被引量:4
9
作者 李俐 蒋燕群 《检验医学》 CAS 北大核心 2010年第11期864-868,共5页
目的调查产头孢菌素β-内酰胺酶(AmpC酶)的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌膜孔蛋白的表达情况,分析其耐药机制。方法收集2003至2009年间产AmpC酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌65株,三维试验确定细菌AmpC酶的产生情况,多重聚合酶链反应(PCR)扩增... 目的调查产头孢菌素β-内酰胺酶(AmpC酶)的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌膜孔蛋白的表达情况,分析其耐药机制。方法收集2003至2009年间产AmpC酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌65株,三维试验确定细菌AmpC酶的产生情况,多重聚合酶链反应(PCR)扩增ampC基因和膜孔蛋白ompF、ompK35、ompK36基因,实时定量逆转录RT-PCR检测膜孔蛋白的相对表达量,纸片扩散法检测抗菌药物的敏感性。结果 32株大肠埃希菌中,14株(43.75%)膜孔蛋白ompF转录水平下调;33株肺炎克雷伯菌中,17株(51.52%)膜孔蛋白ompK35、ompK36转录水平下调。结论在产AmpC酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中膜孔蛋白的低表达是造成耐药不可忽视的因素之一。 展开更多
关键词 膜孔蛋白 头孢菌素β-内酰胺酶 ompf ompK35 ompK36
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大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药机制检测 被引量:5
10
作者 范爱民 田秀红 《山西医药杂志(上半月)》 CAS 2011年第9期877-879,共3页
目的筛查大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌膜孔蛋白基因情况,分析其与耐药的关系。方法随机抽取2008—2010年耐3代头孢菌素(头孢他啶)的大肠埃希菌72株和肺炎克雷伯菌57株,56株头孢他啶敏感的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌为对照组;三维试验确定细... 目的筛查大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌膜孔蛋白基因情况,分析其与耐药的关系。方法随机抽取2008—2010年耐3代头孢菌素(头孢他啶)的大肠埃希菌72株和肺炎克雷伯菌57株,56株头孢他啶敏感的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌为对照组;三维试验确定细菌头孢菌素β-内酰胺酶(AmpC酶)的产生情况;超广谱β-内酰胺酶(ESBL)确证试验检测细菌产ESBL的情况;多重聚合酶链反应(PCR)扩增AmpC基因和膜孔蛋白ompF、ompk35、ompk36基因;纸片扩散法检测抗菌药物的敏感性。结果 72株大肠埃希菌中,14株产AmpC酶,23株产ESBL,3株膜孔蛋白基因缺失;57株肺炎克雷伯菌中,13株产AmpC酶,19株产ESBL,5株膜孔蛋白缺失,膜孔蛋白缺失株4代头孢均出现耐药。结论我院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对头孢类抗生素的耐药机制主要是产AmpC酶和ESBLs,同时膜孔蛋白基因的缺失会造成耐药程度增高。 展开更多
关键词 孔蛋白类 头孢菌素酶 ompf ompK35 ompK36
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大肠杆菌外膜蛋白F的原核表达、多克隆抗体制备及生物信息学分析 被引量:9
11
作者 伍娜娜 康超 +5 位作者 荣娜 刘祥 陈春琳 陈琛 丁锐 吴三桥 《河南农业科学》 北大核心 2019年第3期145-152,共8页
为获得大肠杆菌外膜蛋白OmpF并对其耐药性功能进行研究,通过分子克隆技术构建OmpF蛋白重组表达菌株,利用正交试验法获得OmpF菌株的最佳培养条件和表达条件,采用SDS-PAGE电泳切胶纯化方法获得OmpF蛋白,免疫小鼠获得OmpF蛋白多克隆抗体,We... 为获得大肠杆菌外膜蛋白OmpF并对其耐药性功能进行研究,通过分子克隆技术构建OmpF蛋白重组表达菌株,利用正交试验法获得OmpF菌株的最佳培养条件和表达条件,采用SDS-PAGE电泳切胶纯化方法获得OmpF蛋白,免疫小鼠获得OmpF蛋白多克隆抗体,Western blotting方法检测多克隆抗体的特异性,使用DNAMAN 8.0与MEGA 5.0软件对OmpF蛋白进行同源性和系统发生分析。结果显示,PCR扩增获得1 089 bp的ompF基因,成功构建pET-32a-ompF载体,其诱导表达产物分子质量为38 ku,与预期大小一致。正交试验获得OmpF菌株的最佳培养条件为葡萄糖浓度为0,转速为230 r/min,装液量为50 mL;最佳表达条件为诱导时菌液OD_(600)为0.5,IPTG终浓度为0.1 mmol/L,诱导时间为8 h,温度为28℃。SDS-PAGE切胶纯化获得高纯度的OmpF蛋白后,利用Western blotting证实OmpF蛋白抗血清具有较好的特异性。OmpF蛋白序列系统发生分析发现,OmpF蛋白在不同种类的细菌中具有较高的同源性,OmpF蛋白产生的抗体可能为不同种细菌的感染提供交叉免疫保护作用,并且不同种类细菌中OmpF蛋白可能具有相似的分子功能。 展开更多
关键词 大肠杆菌 外膜蛋白ompf 原核表达 正交试验 诱导条件 生物信息学分析
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鸡肠炎沙门氏菌外膜蛋白F的原核表达及免疫原性分析
12
作者 徐静怡 高瑶 +1 位作者 周铁忠 李冰 《现代畜牧兽医》 2020年第3期7-12,共6页
根据GenBank中收录的鸡肠炎沙门氏菌OmpF基因序列设计1对引物,以鸡肠炎沙门氏菌辽宁分离株基因组为模板,扩增鸡肠炎沙门氏菌OmpF基因,用IEDB Analysis Resource在线预测分析,该基因可能存在15个线性B细胞抗原表位;同时将该基因克隆至原... 根据GenBank中收录的鸡肠炎沙门氏菌OmpF基因序列设计1对引物,以鸡肠炎沙门氏菌辽宁分离株基因组为模板,扩增鸡肠炎沙门氏菌OmpF基因,用IEDB Analysis Resource在线预测分析,该基因可能存在15个线性B细胞抗原表位;同时将该基因克隆至原核表达载体PGEX-4T-1中,构建重组表达质粒PGEX-4T-1-OmpF,转入大肠杆菌BL21中,获得OmpF重组蛋白。Western-blot检测结果表明,该重组蛋白的分子质量约为66 kD(含标签蛋白),能被鸡沙门氏菌阳性血清识别,初步证实该蛋白具有免疫原性,为鸡肠炎沙门氏菌亚单位疫苗的进一步研究和开发奠定了理论基础。 展开更多
关键词 肠炎沙门氏菌 ompf基因 原核表达 免疫原性
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奇异变形杆菌疫苗候选抗原的鉴定及其免疫保护效果评价
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作者 郑华 白云川 +4 位作者 杨睿 付利芝 王孝友 张素辉 沈克飞 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第4期391-396,共6页
目的 鉴定奇异变形杆菌疫苗候选抗原,并评价其在小鼠体内的免疫保护效果。方法 采用细菌膜蛋白提取试剂盒提取奇异变形杆菌膜蛋白,进行Western blot检测及质谱分析。化学法合成外膜蛋白F(outer membrane protein F,OmpF)及丝氨酸水解酶(... 目的 鉴定奇异变形杆菌疫苗候选抗原,并评价其在小鼠体内的免疫保护效果。方法 采用细菌膜蛋白提取试剂盒提取奇异变形杆菌膜蛋白,进行Western blot检测及质谱分析。化学法合成外膜蛋白F(outer membrane protein F,OmpF)及丝氨酸水解酶(serine hydrolase,SH)两种膜蛋白的编码基因,克隆至载体pET-28a,于E.coli BL21(DE3)诱导表达重组蛋白,进行Western blot检测。重组蛋白通过Ni Sepharose High Performance纯化后,经腿部肌内注射15只雌性昆明小鼠,100μg/(0.2 mL·只),共免疫3次,间隔2周。末次免疫后15 d,经眶前静脉窦采血,分离血清,间接ELISA法检测特异性抗体水平;经小鼠腹腔接种致死剂量的奇异变形杆菌,接种1个月,观察小鼠存活情况,并计算抗原的免疫保护率。结果 提取的膜蛋白可与奇异变形杆菌免疫小鼠抗血清发生特异性结合,经质谱鉴定与奇异变形杆菌APB87305(OmpF)、WP_004247605(SH)的同源性为100%。原核表达的重组蛋白OmpF及SH可与奇异变形杆菌免疫小鼠抗血清发生特异性结合,免疫小鼠后均可诱导较高水平的特异性抗体,对致死性奇异变形杆菌感染的保护率分别为100%和86.67%。结论 OmpF和SH是宿主免疫保护性抗原,有望成为制备奇异变形杆菌疫苗的新靶点。 展开更多
关键词 奇异变形杆菌 抗原 外膜蛋白F 丝氨酸水解酶 免疫保护
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