CMS结球甘蓝剪接异构体BoKIN1-2的鉴定及其表达研究

为了探讨结球甘蓝Bo KIN1基因的pre-mRNA加工机制的特点,以细胞质雄性不育系(CMS)结球甘蓝为试验材料,使用特异引物进行RT-PCR和荧光定量PCR,分析抗冻蛋白Bo KIN1基因的剪接异构体Bo KIN1-2的特征特性。结果显示,Bo KIN1-2的PCR产物溶解曲线的Tm值为84.41℃。在第2个外显子和第2个内含子的连接处设计引物进行3'RACE分析,测序结果显示Bo KIN1-2包含第2个内含子和ploy(A)尾,证明Bo KIN1基因在pre-mRNA加工过程中保留了第2个内含子。荧光定量PCR结果显示,Bo KIN1-2在茎、叶、花、雄蕊和雌蕊中均有表达,在高温、低温和ABA处理后的叶片中表达上升。Bo KIN1基因的选择性剪接既参与了器官发育也参与了胁迫响应。本研究为后期分析KIN基因的转录后调控分子机制提供了科学依据。

威灵仙浸膏外敷联合电针齐刺法对膝关节骨性关节炎患者HA、IL-1β及MMP-1水平的影响

目的观察威灵仙浸膏外敷联合电针配穴齐刺手法治疗膝关节骨性关节炎的疗效及对患者HA、IL-1β及MMP-1水平的影响。方法将286例膝关节骨性关节炎住院患者随机分为治疗组和联合组,每组143例。治疗组给予电针配穴齐刺手法及超短波理疗+口服盐酸氨基葡萄糖胶囊治疗,联合组在此基础上外敷自制威灵仙浸膏,2组疗程均为21 d。检测2组治疗前后关节液透明质酸(HA)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量,病理检查软骨MMP-1细胞阳性表达率,对2组患者进行疼痛VAS评分,计算WOMAC骨关节炎指数,观察2组临床疗效及不良反应发生情况,随访6个月复发情况。结果治疗后2组HA含量均明显高于治疗前(P均<0.05),且联合组明显高于治疗组(P<0.05);2组IL-1β含量均较治疗前明显降低(P均<0.05),且联合组明显低于治疗组(P<0.05)。治疗组治疗前后MMP-1阳性表达率比较差异无统计学意义,联合组治疗后MMP-1阳性表达率明显低于治疗前及治疗组(P均<0.05)。2组治疗后WOMAC、VAS评分均较治疗前明显降低(P均<0.05),且联合组明显低于治疗组(P<0.05)。联合组总有效率明显高于治疗组(P<0.05),复发率明显低于治疗组(P<0.05)。结论自制威灵仙浸膏外敷联合电针配穴齐刺法治疗膝关节骨性关节炎疗效好,可明显降低复发率,是一种安全、可靠、有效的联合治疗方案。

脓毒症患者血清中TLR-4、TREM-1、sCD14和IL-18的变化

目的探讨脓毒症患者血清TLR-4、TREM-1、sCD14和IL-18含量的变化与脓毒症严重程度的相关性及用于诊断脓毒症的敏感度与特异度。方法选取60例脓毒症患者及30例正常体检者,分别抽血采用酶联免疫法(ELISA法)测TLR-4、TREM-1、sCD14和IL-18的含量。脓毒症患者根据当天进行APACHE-Ⅱ评分结果,按评分≥20分和<20分进入高评分及低评分脓毒症组。结果脓毒症患者上述各因子的含量治疗前均明显高于治疗后,并高于正常对照组(p值均<0.05),并且与APACHE-Ⅱ评分呈正相关(r=0.651、0.662、0.652、0.668,P均<0.05)。治疗前高评分脓毒症组血清中TLR-4、TREM-1、sCD14、IL-18的含量均明显高于低评分脓毒症组(P均<0.05);脓毒症患者治疗前血清中上述细胞因子的ROC曲线下面积分别为1.000、0.795、0.828、0.834及0.850,APACHE-Ⅱ、TLR4、TREM-1及sCD-14分别取20、25.8 ng/ml、89.6 ng/ml及75 ng/ml为截断点,评价预后敏感性分别为为99%、82%、82%及91%,特异性分别为为100%、52%、66%及72%。结论脓毒症患者血清中TLR-4、TREM-1、sCD14、IL-18的含量与脓毒症的发生发展关系密切;通过监测上述细胞因子的含量可以对脓毒症病情严重程度做出一定的判断;TREM-1有可能成为诊断脓毒症较好的实验室指标之一,sCDl4有望成为较为敏感的脓毒症诊断标志物之一。

DATS通过p38MAPK通路抑制LPS诱导的小鼠MH-S细胞TNF-α及IL-1β表达

目的探讨p38MAPK在二烯丙基三硫(DATS)抑制脂多糖(LPS)诱导小鼠肺泡巨噬细胞促炎细胞因子表达中的作用。方法体外培养MH-S细胞,用DATS和(或)LPS进行干预,Western blot检测细胞p38及磷酸化p38(p-p38)的表达;用LPS和(或)SB203580孵育细胞,反转录PCR检测细胞中TNF-α、IL-1βmRNA表达,Western blot检测细胞磷酸化(p-IκB)及非磷酸化IκB的表达。结果 LPS刺激MH-S细胞可导致p-p38表达增加,呈时间依赖性;用DATS(0.1、0.5、2.5、5.0 mg.L-1)预处理细胞30 min后再给予LPS刺激,p-p38表达呈剂量依赖性下降;单独DATS对p-p38表达无明显影响。p38特异性抑制剂SB203580可剂量依赖性地抑制LPS诱导的p-IκB蛋白、TNF-α及IL-1βmR-NA表达。结论 DATS可通过抑制p38MAPK通路抑制IκB磷酸化及NF-κB活化,进而下调LPS诱导小鼠肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-1βmRNA表达。

恶性肿瘤患者胸腹水中巨噬细胞的功能观察——细胞毒性作用、白细胞介素1产生的能力

为探讨人肿瘤相关巨噬细胞(TAM)在肿瘤发展中的作用,在体外研究了20例癌性胸、腹水中巨噬细胞(Mφ)的功能,包括 IL-1的产生和对人肺癌细胞系PGT 的细胞毒作用,用12例结核性胸水中之 Mφ作为对照。实验表明:TAM 的IL-1产生能力及细胞毒作用均较结核性胸水 Mφ为低;LPS、IFN 或消炎痛可增强 TAM 的此等功能;患者自身胸、腹水于高浓度时(≥12.5%)抑制而于低浓度时(6.35%)增强此等 TAM 功能。实验提示 TAM 中抑制性 Mφ增多、一些 TAM 处于未活化状态和癌性积液中存在的某些其它抑制因子均可能与 TAM 功能降低有关.

TNF-α对糖尿病肾病大鼠髓袢升支粗段管周膜KCNJ10(Kir4.1)的调控

目的:探讨TNF-α对糖尿病肾病形成中髓袢升支粗段管周膜KCNJ10(Kir4.1)的调控。方法:取SD雄性大鼠随机分成4组,正常对照组(NC)、糖尿病模型组(DM)、NC+TNFR:Fc组和DM+TNFR:Fc组,20天后用Western blot方法检测髓袢升支粗段中TNF-α、KCNJ10、PLA2和PTK的蛋白表达情况。结果:DM组TNF-α蛋白表达显著增加;DM组KCNJ10蛋白表达降低,而PLA2和PTK蛋白表达增加;DM+TNFR:Fc组KCNJ10蛋白表达增加,而PLA2和PTK蛋白表达降低。结论:在糖尿病肾病形成中,TNF-α通过激活PLA2和PTK依赖途径抑制髓袢升支粗段管周膜KCNJ10(Kir4.1)的活性。

血清中MCP-1、sIL-2R和INF-γ联合检测对儿童急性白血病的诊断意义

目的探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、可溶性白细胞介素-2受体(s IL-2R)和干扰素-γ(IFN-γ)含量在儿童急性白血病不同分型中的变化规律及联合检测的诊断意义。方法选取2014年1月至2017年5月恩施土家族苗族自治州中心医院收治的儿童急性白血病患者80例为观察组,其中急性淋巴细胞白血病(ALL组)40例,急性髓细胞白血病40例(AML组),同期体检健康者40例为对照组,检测并比较各组受检者血清中MCP-1、s IL-2R和IFN-γ的含量。结果 ALL组和AML组患者血清中MCP-1和s IL-2R含量分别为MCP-1(18.43±1.12)ug/L、(694.54±17.52)U/m L,(15.62±1.07)μg/L、s IL-2R(525.78±14.59)U/m L,明显高于对照组的(6.12±0.55)μg/L、(175.48±12.46)U/m L,差异均具有统计学意义(P<0.05);AML组患者血清中MCP-1和s IL-2R含量明显低于ALL组,差异均有统计学意义(P<0.05);ALL组和AML组患者血清中IFN-γ含量分别为(3.72±0.85)pg/m L和(8.37±0.76)pg/m L,明显低于对照组的(11.19±0.84)pg/m L,差异均具有统计学意义(P<0.05);AML组患者血清中IFN-γ含量明显高于ALL组,差异具有统计学意义(P<0.05);ALL组和AML组患者血清中MCP-1、s IL-2R和IFN-γ的联合检出率、灵敏度和特异性均明显高于各指标单独检出率,差异均具有统计学意义(P<0.05)。。结论儿童急性白血病患者血液中MCP-1、s IL-2R和IFN-γ呈异常表达状态;且MCP-1、s IL-2R和IFN-γ联合检测在儿童急性白血病不同分型的诊断中具有重要临床意义。

祛腐生肌液熏洗坐浴联合红光照射改善老年低位单纯性肛瘘患者术后创面的临床观察

目的 探讨祛腐生肌液熏洗坐浴联合红光照射对低位单纯性肛瘘创面愈合的治疗效果,以及对血清PGE2、 SP、 IL-1水平的影响。方法 选取2020年1月—2022年8月黄石市中医医院肛肠科收治的老年肛瘘患者80例,采取数字表法随机分为试验组和对照组,每组40例。对照组应用复方黄柏液熏洗坐浴治疗,试验组应用祛腐生肌液熏洗坐浴联合红光照射治疗。观察并比较2组治疗前(即术后第1天)、治疗后5、10 d各症状(创缘水肿、创面渗出、瘙痒、疼痛、肉芽组织生长)评分、创面愈合时间、不良反应发生率;评估并比较2组治疗前、治疗后10 d血清学炎症因子(PGE2、 SP、 IL-1)水平;比较2组临床疗效和不良反应。结果 治疗10 d后,试验组总有效率(100%)高于对照组(95%),但差异无统计学意义(P>0.05);治疗前,2组各症状评分及各血清学炎症因子水平差异均无统计学意义(P>0.05);经组内比较,2组各症状评分(治疗后5、 10 d)及各血清学炎症因子水平(治疗后10 d)均低于同组治疗前(P<0.05);经组间比较,试验组症状评分(治疗后5、 10 d)及血清炎症因子水平(治疗后10 d)改善情况均优于对照组(P<0.05);2组创面愈合时间比较,试验组少于对照组(P<0.05);试验组不良反应发生率低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 应用祛腐生肌液熏洗坐浴联合红光照射可显著促进老年低位单纯性肛瘘患者术后创面愈合,促进肉芽生长,减轻术后水肿、渗出、瘙痒、疼痛不适症状,降低血清学炎症因子表达水平,不良反应发生率低,且临床效果优于复方黄柏液熏洗坐浴治疗。

外周血中TLR4、TIRAP表达与脓毒症相关性研究

目的探讨外周血中TOLL样受体4(TLR4)及TOLL/白介素-1受体相关蛋白(TIRAP)水平与脓毒症严重程度的相关性。方法 30例正常健康体检者为正常组,53例脓毒症患者,进行APACHEⅡ评分,APACHEⅡ≤20患者40例为脓毒症低评分组,APACHEⅡ>20患者13例为脓毒症高评分组。所有研究对象应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测静脉血清总TLR4、TIRAP浓度。结果血清中TLR4及TIRAP浓度:正常组为0.886±0.058 ng/ml及5.216±0.410 ng/ml、脓毒症低评分组为2.253±0.379 ng/ml及9.540±2.294ng/ml、脓毒症高评分组为4.494±0.709 ng/ml及19.206±1.755 ng/ml,脓毒症低评分组及脓毒症高评分组与正常组相比均有显著性差异(P均=0.000),脓毒症低评分组与脓毒症高评分组相比存在显著性差异(P均=0.000)。以APACHEⅡ评分等于20分为界,即脓毒症低评分组为低危患者,脓毒症高评分组为高危患者,来区分脓毒症严重程度。经Pearson相关分析,TLR4浓度与脓毒症严重程度呈正相关(r=0.931,P<0.05),TIRAP浓度与脓毒症严重程度也呈正相关(r=0.972,P<0.05),TLR4浓度与TIRAP浓度呈正相关(r=0.936,P<0.05)。结论脓毒症患者血清总TLR4、TIRAP水平可以预测及判断脓毒症严重程度。

胰岛素滴定法对多发伤伴应激性高血糖患者血浆炎性因子的影响

目的探讨胰岛素滴定法对多发伤伴应激性高血糖患者外周血炎性因子水平的影响。方法选择2010年6月至2013年1月来璧山县人民医院就诊的发病时间≤24 h的多发伤伴应激性高血糖患者75例,将患者按照随机数字表法分为胰岛素滴定组(39例)和常规治疗组(36例)。胰岛素滴定组采用诺和灵R生物合成胰岛素微量泵持续泵注,常规治疗组采用精蛋白生物合成人胰岛素注射液皮下注射,每12小时1次,均定时监测血糖,调整胰岛素量使目标血糖值为4.4~10.0 mmol/L。比较两组患者治疗后血糖控制情况,并于入院后第1、3、7日动态监测两组患者外周血肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)1、IL-10、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)的水平,比较院内感染、全身炎症反应综合征(SIRS)、多器官功能障碍综合征(MODS)的发生率。结果治疗后,胰岛素滴定组患者的血糖值显著低于常规治疗组[(6.1±2.9)mmol/L比(7.9±2.3)mmol/L],胰岛素滴定组SIRS和MODS的发生率显著低于常规治疗组(19.4%比51.3%,17.9%比36.1%,均P<0.05),但两组患者低血糖发生率比较差异无统计学意义(P>0.05);胰岛素滴定组患者血清第3、7日TNF-α、IL-1及CRP的水平均显著低于常规治疗组(P<0.05);胰岛素滴定组血清IL-10及PCT的水平与常规治疗组在不同时间点比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论胰岛素滴定法通过定量控制多发伤伴应激性高血糖患者的血糖,降低血浆TNF-α、IL-1、CRP等炎性因子的水平,降低SIRS和MODS的发生率,改善多发伤患者预后。

Status of the Evaluation of the Cosmological Inquiry “What Is It All About?”

In general,members of all different cultures are concerned about the cosmological query“What it is all about”.In the literature,many commentaries are available to us on the question.Nevertheless,a comprehensive,brief summary,as below,of the state of this inquiry on the subject may be helpful.

IL-6、IL-17、IL-18及MCP-1联合检测B型柯萨奇病

目的探讨B型柯萨奇病毒性心肌炎（CoxB-VMC）患者血清白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-17（IL-17）、白细胞介素-18（IL-18）及单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）水平的变化及联合检测对CoxB-VMC临床诊断的价值。方法选取VMC患者158例为实验组，健康体检者94例为对照组。采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定两组患者血清IL-6、IL-17、IL-18、MCP-1的含量及B型柯萨奇病毒（CoxB）IgM抗体，电化学发光法检测两组血清中肌酸激酶同工酶（CK-MB）及心肌肌钙蛋白T（cTnT）的水平，分析各指标的水平与CoxB-VMC的关系，评价IL-6、IL-17、IL-18及MCP-1联合检测对CoxB-VMC诊断的价值。结果AVMC急性期血清CK-MB、cTnT、IL-6、IL-17、IL-18及MCP-1水平分别为（27.90±4.72）、（0.37±0.02）、（361.60±45.39）、（445.70±67.97）、（168.60±35.87）、（376.20±49.50）ng/L，显著高于对照组（P〈0.01）；VMC患者CoxB病毒感染与心脏功能分级、IL-6、IL-17、IL-18及MCP-1水平呈正相关（P〈0.05）。IL-6、IL-17、IL-18及MCP-1联合检测可显著提高CoxB-VMC检测的敏感性（97.30%）、特异性（94.60%）及准确率（96.70%）。结论VMC急性期IL-6、IL-17、IL-18及MCP-1水平变化在一定程度上可反映CoxB-VMC的心脏功能状态，该4种指标的联合检测可增强CoxB-VMC的临床诊断和病情评估。

心肺复苏患者血中高迁移率族蛋白B1的表达与预后的关系

目的探讨实施心肺复苏(CPR)后血液中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达水平与病人预后的关系。方法收集心脏骤停后实施CPR患者90例,根据CPR救治结果分组:P1组(CPR 30 min无效死亡)30例;P2组(复苏成功,自主循环建立≥2 h,但最终出现死亡)30例;H组(复苏成功,预后较好)30例。同时选择暨南大学第一附属医院体检健康者30例为C组。采用酶链免疫吸附法(ELISA)检测患者血清白细胞介素(IL)-1β,IL-4,IL-10和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。采用Western-bolt方法,检测患者血液样本中HMGB1蛋白相对表达量。结果 IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10四组间差异具有统计学意义(P均<0.05),其中H组、P1组、P2组IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10水平均高于C组,P1组和P2组高于H组,差异均具有统计学意义(P均<0.05),说明随着患者预后不良程度的增加,血清的炎性因子的水平逐渐增加。C组、H组、P2组、P1组HMGB1蛋白相对表达量分别为101.23±14.67、175.45±8.89、213.23±10.12、298.48±11.48,各组差异具有统计学意义(F=23.561,P=0.000),其中C组、H组、P2组HMGB1蛋白水平均低于P1组,C组和H组低于P2组,C组低于H组,差异均具有统计学意义(P均<0.05),说明随着进行CPR病人预后的不良程度的增加,HMGB1的表达逐渐升高。结论患者经过CPR后,外周血中促炎/抗炎因子的释放与病人的预后密切相关。

局部亚低温对脑出血后血清细胞间粘附分子-1和白细胞介素-1β的影响

目的研究局部亚低温治疗对脑出血患者血清细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)的影响。方法随机将70例脑出血患者分为局部亚低温组(35例)和常规治疗组(35例),同时设健康对照组19例;常规治疗组应用药物治疗,局部亚低温组在药物治疗基础上加用局部亚低温治疗,观察两组患者发病第1、3、7天血清ICAM-1和IL-1β水平的变化。结果两组患者发病第1天血清ICAM-1和IL-1β水平均高于健康对照组(P<0.01);第3天常规治疗组ICAM-1和IL-1β水平达高峰,局部亚低温组下降,明显低于常规治疗组(P<0.05);在发病第7天,局部亚低温组血清ICAM-1和IL-1β仍明显低于常规治疗组(P<0.05)。结论颅脑局部亚低温治疗可显著降低脑出血后患者血清ICAM-1和IL-1β的浓度,减轻脑出血后的炎症反应,发挥其脑保护作用。

全段成纤维细胞生长因子-23、-klotho蛋白、单核细胞趋化蛋白1和白细胞介素-18在糖尿病肾病中的变化及其意义

目的探讨血清全段成纤维细胞生长因子-23（full-length fibroblast growth factor，iFGF-23）、-klotho蛋白、单核细胞趋化蛋白1（monocyte chemoattractant protein 1，MCP-1）和白细胞介素（interleukin，IL）-18的水平在糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）中的变化及其临床意义。方法选取湖北省中西医结合医院确诊的DN患者162例（DN组），收治时间2014年8月至2016年10月，根据尿微量白蛋白排泄率（urinary albumin ejection rate, UAER），将DN患者分为三个亚组：UAER〈20 g/min为A组（52例）、UAER 20～200 g/min为B组（81例）和UAER〉20 g/min为C组（29例）。另选80例健康体检患者作为对照组，采用酶联免疫吸附法（enyme-linked immunosorbent asscy，ELISA）测定血清中iFGF-23、MCP-1和IL-18含量，采用胶体金法检测-klotho蛋白水平，采用全自动生化仪检测血中的尿微量白蛋白、血肌酐（serum creatinine, Scr）和尿素氮（blood urea nitrogen, BUN），肾小球率过滤估计值（estimated glomerular filtration rate, EGFR）采用中国人改良的肾脏膳食实验进行计算。比较分析三组患者各指标变化情况。结果DN组患者的血清iFGF-23、MCP-1和IL-18高于对照组（P〈0.05）；-klotho蛋白低于对照组（P〈0.05）；且-klotho蛋白水平在A、B和C三组间逐渐降低（P〈0.05），iFGF-23、MCP-1和IL-18水平在A、B和C三组间组间依次增高（P〈0.05）。结论血清iFGF-23、MCP-1和IL-18在DN患者中增高，klotho蛋白降低，与患者UAER变化水平有关。

检测糖尿病肾病患者血清细胞因子的意义

目的探讨2型糖尿病肾病患者血清可溶性细胞间粘附分子（sICAM-1）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平的变化及意义。方法选择2型糖尿病患者90例，根据尿白蛋白排泄率（UAER）分组：其中无白蛋白尿患者（DM组）24例，早期糖尿病肾病患者31例（DN1组），临床糖尿病肾病患者35例（DN2组），另外选择30例健康体检者作为对照（对照组）。采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组血清sICAM-1、IL-6、IL-8和TNF-α水平并进行统计学分析。结果2型糖尿病肾病患者血清中sICAM-1、IL-6、IL-8和TNF-α水平高于正常对照组及DM组（t=5．68，5．12，4．87，4．96P〈0．05），DN2组血清中sICAM-1、IL-6、IL-8和TNF-α水平高于DN1组，组间比较差异有统计学意义（t=4．62，4．23，4．35，4．38，P〈0．05）。结论炎症因子sI-CAM-1、IL-6、IL-8和TNF-α可能参与了DN的病理生理过程，检测sICAM-1、IL-6、IL-8和TNF-α有助于DN患者病情及预后的判断。