OPA柱前衍生高效液相色谱法同时测定黄豆酱中氨基酸和生物胺的含量

本文采用OPA衍生黄豆酱中的组氨酸、酪氨酸、组胺和酪胺,再通过高效液相色谱进行分离测定。结果表明,该方法的相对标准偏差在0.04%~1.16%,回收率在93.4%~101.2%,检出限为6~9 mg·kg^(-1)。该方法能够满足黄豆酱组氨酸、酪氨酸、组胺和酪胺的检测需求。

OPA柱前衍生高效液相色谱法测定茶氨酸的研究

研究了OPA柱前自动衍生-紫外检测茶汁中茶氨酸的 HPLC法,色谱条件为:Hypeml ODS C18柱,洗脱液为醋 酸钠和甲醇混合液,采用梯度洗脱,流速为1.0mL／min. 检测波长为338nm。茶氨酸在0.05-1.00mg／mL范围内浓 度与峰面积线性关系良好,线性相关系数为0.9998,平均 回收率为98.85％,RSD小于1％(n=5)。

OPA柱前自动衍生-紫外检测米胚芽中的γ-氨基丁酸的HPLC法研究

研究了OPA柱前自动衍生 紫外检测米胚芽中的γ 氨基丁酸的HPLC法 ,在最适的条件下 ,γ 氨基丁酸的线性范围为 10～ 2 5 0mg/L ,r =0 9999,RSD小于 1 2 % ,回收率为98 7%～ 10 1 2 %。通过富集 ,米胚芽中的GABA含量由 0 3 0 1mg/g提高到 4 3 9mg/g。

OPA柱前衍生法测定饲料中的氨基酸含量

在ＫＮＡＵＥＲ－８３０型氨基酸全自动分析仪上，ＯＰＡ柱前衍生法能快速、准确地测定饲料中的氨基酸含量．色谱条件为：流量１ｍｌ／ｍｉｎ，反应时间５ｍｉｎ，柱温４５℃，洗脱液为醋酸钠和甲醇混合液，采用梯度洗脱．饲料中氨基酸含量的变异系数在０．３７％～７．０３％之间．氨基酸回收率除蛋氨酸外，其余都在９５％～１０５％之间．氨基酸含量与峰面积的相关系数在０．９３２９～０．９９９７之间．

OPA柱前衍生-反向高效液相色谱法测定水中游离氨基酸

采用邻苯二甲醛柱前衍生5种氨基酸,用反向高效液相色谱法测定衍生化产物,通过优化衍生化条件和色谱条件,使该方法在0.25μmol/L^25μmol/L范围内线性良好。方法检出限为0.08μmol/L^0.12μmol/L,标准溶液测定6次的RSD为0.1%~1.2%,空白加标样的回收率为80.3%~115%。用该方法测定实际水样,5种氨基酸测定值均低于0.514μmol/L,加标回收率在75.5%~120%之间。

OPA/FMOC柱前衍生高效液相色谱法检测东太湖原水中游离氨基酸含量

采用OPA/FMOC柱前衍生高效液相色谱法,检测东太湖原水中15种游离氨基酸含量。通过在线衍生与色谱分离,成功对天然水体中游离氨基酸进行液相色谱分离及精确定量分析,该方法平均回收率为82.5%~103.6%,相对标准偏差为0.11%~0.35%,准确度及精密度均良好,灵敏度高(方法最低检出浓度为2.4 pmol/μL),可快速并有效实现东太湖水体中游离氨基酸特别是产嗅氨基酸的痕量分析。

OPA/FMOC柱前衍生高效液相色谱法测定细胞培养基M199中氨基酸含量

目的:该实验建立了以OPA/FMOC作为柱前衍生化试剂,采用高效液相色谱法测定细胞培养基中氨基酸含量的方法。在10～180μg.mL-1范围内线性关系良好,相关系数在0.9953～1.000之间,平均回收率95.9%～102.4%,CV%<3.8%(n=5),重复性RSD为0.08%～3.82%(n=6)。结论:该方法准确、灵敏、简便快速,适用于细胞培养基中氨基酸的含量测定。

HPLC柱前衍生法测定发芽糙米中γ-氨基丁酸的含量

利用基于OPA柱前衍生-紫外检测的HPLC方法测定糙米中γ-氨基丁酸（GABA）含量。结果表明：在最适的条件下，GABA的线性范围为10～250mg／L，R2=0．9996，RSD小于1．200％，回收率为101．3％～108．5％；用该方法验证测定原料糙米和发芽糙米的GABA含量分别为3．891～7．709mg／100g和12．77-24．89mg／100g，测定结果准确，重现性好。

邻苯二甲醛柱前衍生法测定海洋胶体中的水解氨基酸

用邻苯二甲醛（OPA）柱前衍生反相高效液相色谱法测定了厦门湾南部海域海洋胶体中氨基酸的组成和含量．该法的空白值为0～1．8×10^-3μmol／L，检出限为2×10^-3～9×10μmol／L．添加脲的回收率在99．5％～99．7％之间，相对偏差为3.4％～10．7％．结果表明，该海洋胶体中含有16种氨基酸。总量为150．83μmol／L，其中赖氨酸是含量最多的氨基酸，浓度为35-59μmol／L，占总水解氨基酸的23．6％．其次是天冬氨酸、谷氨酸、组氨酸、甘氨酸＋苏氨酸、甲硫氨酸和亮氟酸，它们的含量相当，浓度分别为12．40、10．48、17．77、16．60、17．22和15．88μmol／L．分别占总水解氨基酸的8．2％、7．0％、11．8%、11．0％、11．4％和10．5％．这8种氨基酸占了胶体中总水解氨基酸的83．5％．其余8种氨基酸只占16．5％．

一种测定亮氨酸脑啡肽(L-EK)药物的新型荧光衍生化方法

目的建立一种新型的氧化还原柱前衍生化荧光检测高效液相色谱法测定亮氨酸脑啡肽(leu-enkephalin,L-EK)药物。方法将肽类药物L-EK与0.012mol/L高碘酸钠、0.01mol/L儿茶酚、0.3mol/L硼酸按体积比2∶2∶1∶1混合,于120℃反应10min后,用反相柱分离,以0.25mol/L硼酸盐缓冲液(pH 7.6)和甲醇为流动相,采用梯度洗脱,荧光检测器检测。同时与高效液相色谱紫外法、邻苯二甲醛(O-phthalaldehyde,OPA)柱前衍生荧光检测高效液相色谱法比较,测定体外及血样中L-EK的含量。结果氧化还原柱前衍生化荧光检测高效液相色谱法检测含L-EK血样,线性范围0.5～50.0mg/L,线性良好(r=0.999 8),血浆中检测限为0.1mg/L,且较另外两种方法不受内源性物质的干扰。结论新型的氧化还原柱前衍生化荧光检测高效液相色谱法专属性好,灵敏度高,尤其适合生物样品中L-EK药物的测定。

邻苯二甲醛柱前衍生化法快速高效测定液体生物样品L-蛋氨酸含量

目的 拟建立一种快速、简单、灵敏的血浆等生物样品中L-蛋氨酸的含量测定方法.方法 用邻苯二甲醛（OPA）柱前衍生化法分离并定量C57小鼠血浆中L-蛋氨酸,采用反向色谱柱ODS （4.6 mm×250 mm）;pH 7.2 10 mmol/L NaH2PO4-Na2HPO4（PB）含0.2％ THF和PB-甲醇-乙腈（50：35：15）为流动相梯度洗脱;紫外检测器340 nm检测.结果 邻苯二甲醛柱前衍生化法的最低检出限浓度为0.5 μmol/L,8 min内分离测定了血浆L-蛋氨酸的含量,12 min内血浆所有氨基酸全部洗脱;在0.5-100 μmol/L进样浓度范围内,L-蛋氨酸的峰面积与浓度呈现良好的线性关系,相关系数0.999 8,对于L-蛋氨酸的标准加入回收率在94.63％和97.99％之间.结论 邻苯二甲醛柱前衍生化法是一种快速简便的紫外检测液体生物样品中L-蛋氨酸含量的方法.

高效液相色谱分析土壤氨基糖的质量控制方法

利用邻苯二甲醛(OPA)柱前在线衍生–高效液相色谱法测定了土壤中4种氨基糖,即胞壁酸(MurN)、甘露糖(ManN)、氨基半乳糖(GalN)和氨基葡萄糖(GluN)的含量,并从样品出峰、理论塔板数、信噪比、检出限、定量限、样品的重复性、标准样品的线性和加标回收率方面评估了检测过程中仪器和方法的灵敏度、精密度和准确度。结果表明:检测过程中,4种氨基糖的出峰先后顺序为胞壁酸、甘露糖、氨基半乳糖和氨基葡萄糖;4种氨基糖的色谱峰峰形好,相邻两峰的分离度>1.5,相邻两峰能够完全分离;理论塔板数>2000,色谱柱的柱效高;胞壁酸、甘露糖、氨基半乳糖和氨基葡萄糖的仪器检出限分别为0.030、0.300、0.150和0.150μmol/L,仪器定量限分别为0.100、1.000、0.500和0.500μmol/L,方法检出限分别为0.010、1.500、0.100和0.100μmol/L,方法定量限分别为0.030、5.000、0.300和0.300μmol/L;除0~10 cm以下土层中的甘露糖外,其他土壤样品中氨基糖的信噪比均>10,仪器和方法的灵敏度高;氨基糖样品含量的重复性(标准样品平行样、土壤样品平行样和土壤样品重复样的相对标准偏差均<5%)较好,仪器和方法的精密度较高;标准样品的线性(R^(2)>0.9970)良好,空白加标回收率和土壤基质加标回收率为80%~94%,仪器和方法的准确度较高。总之,利用OPA柱前在线衍生–高效液相色谱法测定土壤氨基糖含量的分析方法操作简单、灵敏度高,能够精确地测定土壤中的氨基糖含量。

HPLC法测定tremor大鼠脑组织中谷氨酸和GABA含量

目的建立测定tremor大鼠(tm)脑内海马组织中GLU及GABA浓度的高效液相色谱(HPLC)方法。方法冰上剥离13wk的tm/Wistar大鼠海马组织,低温匀浆处理,利用邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生HPLC法结合荧光检测器测定GLU和GABA的含量。0.1mol·L-1醋酸钾和甲醇进行二元梯度洗脱,峰面积定量。结果GLU的线性方程为Y^=1E+06X(r2=0.9937),线性范围为0.15～5.88mg·L-1,具有良好的线性关系,在0.74、1.47、3.68mg.L-13个浓度下样本回收率分别为97.7%、98.9%、100.5%;样品中GLU日内变异系数为3.8%,隔日测定后,日间变异系数为5.9%;GABA的线性方程为Y^=4E+06X(r2=0.998),线性范围为0.10～2.15mg·L-1,具有良好的线性关系,在0.2、0.5、1.0mg·L-13个浓度下样本回收率分别为98.3%、101.0%、102.7%;样品GABA日内变异系数为2.3%,隔日测定后,日间变异系数为3.9%。结论该方法较简便、快速且干扰相对较小,满足测定要求,可用于氨基酸的含量测定研究。

江苏栽培明党参中γ-氨基丁酸累积规律研究

目的用OPA柱前衍生HPLC法测定明党参中γ-氨基丁酸的含量，探寻γ-氨基丁酸含量与明党参生长时间的关系。方法取样品试液1mL，OPA衍生试剂1mL，硼酸缓冲液（0．2mol／L，pH8．5）5mL，定容至10mL，反应时间45min；流动相：流动相A为1．35％醋酸钠缓冲液（pH7．3），流动相B为135％醋酸钠（pH7．2）：甲醇（100：400），洗脱梯度及流速：0-20minB相30％，20—25minB相增至100％，维持8min；检测波长：336nm。柱温：40℃。结果在10-50μg／mL范围内对不同月份采收的样品在实验条件下测定，其平均含量为0．034％-0．116％。结论γ-氨基丁酸含量在1月、5月、8月相对较高，9月、10月和次年3月相对较低。

Evaluation of Baishao(Radix Paeoniae Alba)and Chishao(Radix Paeoniae Rubra)from different origins based on characteristic spectra of amino acids

Objective To evaluate the difference between Baishao(Paeoniae Radix Alba,PRA)and Chishao(Paeoniae Radix Rubra,PRR)from different regions based on the characteristic spectra of amino acids(AAs).Methods Fingerprints of the 21 standard AAs were established using O-phthalaldehyde-9-fluorenylmethyl chloroformate(OPA-FMOC)pre-column derivation method.The AA components in PRA and PRR were characterized qualitatively and quantitatively,and different AAs were screened using pattern recognition technology.Results Twelve AAs were identified in both PRA and PRR.Meanwhile,aspartic acid,glutamic acid,arginine,alanine,and gamma-aminobutyric acid were screened as characteristic components,and their concentrations could effectively distinguish PRA from PRR.Conclusion The established characterization method,which is based on the characteristic spectra of AAs,is accurate,efficient,and sensitive and can effectively distinguish between PRA and PRR from different producing areas,thus providing a reference for the overall characterization and evaluation of Chinese medicinal materials.

邻苯二甲醛衍生高效液相色谱法分析葡萄糖脑苷脂与半乳糖脑苷脂的含量

目的在原有邻苯二甲醛（OPA）衍生高效液相色谱法基础上进行优化,探究最优条件,建立同时分离和定量生物组织中的葡萄糖脑苷脂和半乳糖脑苷脂的方法,用此方法测定海参和鼠脑的脑苷脂含量。方法从生物组织中粗提的脑苷脂,在37℃,12 h,p H=5条件下被SCDase酶解,再通过OPA衍生,经过HPLC分离在荧光检测器下检测,以Intersil SIL-100A色谱柱为分离柱确定最佳的色谱洗脱体系为正己烷/异丙醇/100 mmol/L氯化铵溶液（64.3/35/0.7,v/v）,选定不同种海参和鼠脑为研究对象同时测定葡萄糖脑苷脂和半乳糖脑苷脂的含量。结果在优化条件下,葡萄糖脑苷脂和半乳糖脑苷脂在10 min内完成分离,Glc Cer和Gal Cer线性范围均为5~2400 ng,定量限为5ng,相关系数〉0.99,方法稳定性良好,在所测样品中,海参葡萄糖脑苷脂含量在0.5~3μg/mg,鼠脑海马体和皮质半乳糖脑苷脂含量差别不大,在4μg/mg左右。该方法可快速、简便、准确地分析生物组织中Glc Cer和Gal Cer的含量,为鞘脂的分析增加了新的途径。

水产品中生物胺的两种衍生测定方法比较

分别采用邻苯二甲醛柱前衍生高效液相色谱（HPLC）荧光检测法（简称OPA法）和丹磺酰氟柱前衍生HPLC紫外检测法（简称DNS—Cl法）测定水产品中生物胺含量。比较这两种方法对水产品中多种生物胺检测的差异。结果表明。两种方法对生物胺的检测质量浓度范围在1～100mg／L，OPA法的检出限（0．03-0．35mg／kg）略优于DNS—CI法（0．15～0．90mg／kg）。方法的精确度试验表明：0PA法的加标回收率（76．2％～107％）略优于DNS—Cl法（62.2—118％），然而两种方法的测量精密度均小于lO％（OPA法13％-6．7％，DNS—CI法2．6％～9．9％，n=6）。OPA法操作简便、快速，然而其衍生产物不太稳定，对亚精胺和精胺的检测灵敏度低；而DNS—Cl法操作相对繁琐，其衍生产物稳定，可同时测定包括亚精胺和精胺在内的多种生物胺。用这两种衍生方法检测水产品中组胺、腐胺、酪胺和色胺存在显著性差异（P〈0．05）。

江苏产不同采收期明党参中L-天门冬酰胺的动态累积变化

目的:探讨不同采收月份明党参根中L-天门冬酰胺的动态累积规律。方法:采用邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生HPLC测定明党参中L-天门冬酰胺的含量。取供试品溶液1 mL,OPA衍生试剂1 mL,硼酸缓冲液(0.2 mol.L-1,pH 10.5)5 mL,定容至10 mL,反应时间20 min;流动相:A为1.35%醋酸钠缓冲液(pH 7.3),B为1.35%醋酸钠(pH 7.2)-乙腈-甲醇(100∶175∶225)。洗脱梯度(0～20 min,7%B);20～25 min,100%B,维持8 min),柱温40℃,检测波长333 nm。结果:在质量浓度100～1 000 mg·L-1对不同采收期的样品在实验条件下测定,L-天门冬酰胺平均含量为0.26%～1.87%。结论:L-天门冬酰胺含量在5～8月及1月较高,9月至次年4月较低。