hsa-miR-655靶向CLCF1基因对人成骨肉瘤MG63细胞OPG/RANKL系统表达的影响

目的探讨hsa-miR-655通过靶向调控心肌营养素样细胞因子1(cardiotrophin-like cytokine factor 1,CLCF1)基因表达,对人成骨肉MG63细胞系增殖、护骨素(osteoprotegerin,OPG)和核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)表达的影响。方法通过hsa-miR-655慢病毒转染MG63细胞进行功能获得实验。实验分阴性对照组(NC组)和hsa-miR-655过表达组(OE组),荧光显微镜和流式细胞术(flow cytometry analysis,FCM)评估转染效率,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测细胞增殖能力,FCM检测细胞周期分布,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa-miR-655、CLCF1、OPG和RANKL mRNA的水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测CLCF1、OPG及RANKL蛋白的变化。结果荧光显微镜和FCM显示对照组和miR-655过表达组感染效率为80%以上;qRT-PCR结果显示,相对于对照组,过表达组MG63细胞hsa-miR-655表达上调,差异有统计学意义(P=0.0004);CLCF1 mRNA水平未见明显变化(P=0.0986);过表达组OPG(P=0.0384)、RANKL(P=0.0007)mRNA均有所上调,差异具有统计学意义(P<0.05);Western blot结果显示,过表达组CLCF1蛋白水平表达下调(P=0.0053);与对照组比较,过表达组OPG(P=0.0021)、RANKL(P=0.0002)蛋白均上调,而OPG/RANKL比值却降低(P=0.0078),差异具有统计学意义(P<0.05);CCK-8细胞增殖实验结果显示,miR-655过表达后抑制MG63细胞增殖;FCM检测细胞周期结果显示,miR-655过表达后MG63细胞G0/G1期细胞比例增加,S期减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论hsa-miR-655通过负调控CLCF1基因的表达,抑制MG63细胞的增殖,下调OPG/RANKL的比值。

不同浓度补肾通络方对膝骨关节炎大鼠OPG/RANKL系统mRNA的影响

目的:观察不同浓度补肾通络方对膝骨关节炎大鼠模型膝关节软骨组织OPG/RANKL系统的影响,分析本方对KOA骨破坏/重建的作用机制。方法:采用膝关节腔内注射木瓜蛋白酶溶液法复制KOA模型,36只Wistar大鼠采用随机数字表法分为6组,分别为正常组、模型组、西药组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,观察不同浓度补肾通络方对KOA大鼠膝关节软骨组织OPG/RANKL系统mRNA表达水平的影响。结果:软骨OPG的mRNA水平是在模型组中含量最低(P<0.05),正常组中含量最高(P<0.05),中药中剂量组含量接近正常组,而在低剂量组中表达最少,且中剂量组与高剂量组之间差异无统计学意义(P>0.05)。RANKL的mRNA表达情况是模型组最高(P<0.05),正常组最低(P<0.05),不同浓度的中药对其影响不同,但中药高、中、低三个剂量组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。二者的比值变化趋势与OPG相类似,以模型组最小,正常组最大,随着中药浓度的升高,其比值逐渐增加,且中剂量组与高剂量组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:补肾通络方能够提高KOA大鼠软骨OPG的mRNA表达水平,降低RANKL水平,具有双向调节OPG/RANKL轴的作用。既可促进成骨,又可抑制或延缓破骨,维持KOA大鼠模型中OB/OC活动的平衡,改善骨质代谢水平,缓解KOA病情进一步进展。

OPG/RANKL系统在类风湿关节炎中的变化及其对骨质疏松的影响

目的 探讨类风湿关节炎（RA）患者外周血核因子κB受体活化因子配体（RANKL）和护骨素（OPG）水平的变化及其对RA患者骨质疏松的影响.方法 采用ELISA测定64例RA患者和60例正常人外周血中RANKL和OPG水平,采用双能X线骨密度吸收仪测定骨密度,分析RA患者中RANKL和OPG水平的变化与RA患者骨密度、骨质疏松发生之间的相关性.结果 ①和正常组相比,RA组外周血OPG水矫飨越档停琑ANKL水平明显升高,OPG/RANKL比值明显降低（P〈0.0001）.②RA患者各测定部位的骨密度均明显低于正常组（P〈0.0001）,其骨质疏松症发生率为35.9%,明显高于正常组中的15.0%（P〈0.0001）.③RA患者外周血OPG水平与年龄呈负直线相关（P〈0.0001）,与各测定部位骨密度呈正直线相关（P〈0.05～0.0001）.RA患者外周血RANKL水平与年龄呈正直线相关（P〈0.0001）,与各测定部位骨密度呈负直线相关（P〈0.05～0.0001）.RA患者外周血OPG/RANKL水平与关节肿胀指数、关节压痛指数、HAQ积分呈正直线相关（P〈0.05～0.001）,与骨密度无相关（P〉0.05）.④Logistic Regression多元回归法分析显示：外周血RANKL水平为RA患者中骨质疏松发生的独立的、强烈的危险因素,OR=126.42,CI 95%：37.87～185.36.结论 RA患者外周血OPG水平明显降低,RANKL水平明显升高,它们的变化与骨密度密切相关.外周血RANKL水平升高为RA患者中骨质疏松发生的独立危险因素.

电针命门穴对去卵巢骨质疏松大鼠股骨OPG/RANKL系统的影响

目的：研究电针命门穴对去卵巢骨质疏松症模型大鼠股骨 OPG／RANKL系统中的关键信号分子骨保护素（OPG）、核因子Kappa B受体因子配体（RANKL）蛋白表达的影响。方法：将4～5月龄 SD 雌性大鼠随机分为假手术组（Sham）、模型组（Ovx）、电针命门组（GV4）、电针非经非穴组（Mock），每组各10只。除假手术组外，各组大鼠均切除双侧卵巢（ovariectomy ， OVx）制备绝经后骨质疏松症模型。命门组和非经非穴组每日电针1次，频率为2Hz，强度为1mA，每次持续20min，10d为一个疗程，治疗3个疗程；模型组和假手术组不进行干预，给予相同的套头、抓取、固定操作，疗程同针刺组。3个疗程后检测各组大鼠骨生物力学、骨密度以及大鼠股骨OPG、RANKL蛋白的表达情况。结果：和模型组相比较，电针命门穴能够显著改善 Ovx大鼠骨小梁结构松散、排列紊乱、密度降低的骨质疏松形态学改变，改善股骨最大载荷和断裂载荷，并提高骨密度，与模型组比较均有统计学意义（P＜0．01）；免疫组化结果表明电针命门穴能够激活OPG、RANKL的表达。然而电针非经非穴组不能显著改善上述生物学指标。结论：通过激活OPG／RANKL信号通路、提高骨代谢过程中的骨形成并增强骨强度可能是电针命门穴治疗绝经后骨质疏松症的机制之一。

督灸联合威伐光治疗原发性骨质疏松的临床观察及对OPG/RANKL系统的影响

目的探讨督灸联合光疗对原发性骨质疏松(POP)的临床疗效及对血清骨保护素(OPG)、核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响,从骨代谢的角度探讨其作用机制。方法72例POP患者随机分为对照组36例和治疗组36例。对照组给予口服碳酸钙和阿法骨化醇治疗,治疗组在对照组基础上使用督灸联合威伐光照射疗法。3个月后测量两组治疗前、治疗后中医证候评分、疼痛视觉模拟评分(VAS)、Oswestry功能障碍指数(ODI)评分及血清OPG、RANKL水平变化。结果治疗组临床总有效率(91.1%)显著高于对照组(80.0%,P<0.05)。与治疗前比较,两组治疗后中医证候评分、VAS、ODI评分及RANKL水平显著降低,血清OPG水平显著升高(均P<0.01);治疗后与对照组比较,治疗组中医证候评分、VAS、ODI评分及RANKL水平显著降低,血清OPG水平及OPG/RANKL比值显著升高(P<0.01,P<0.05)。结论督灸联合光疗可有效改善骨质疏松,其机制可能与调节血清OPG、RANKL的水平有关。

OPG-RANKL-RANK轴介导P38 MAPK信号通路调控破骨细胞在糖尿病性骨质疏松症中的作用研究进展

糖尿病性骨质疏松症(DOP)是糖尿病在骨骼系统中最常见的慢性并发症。DOP起病隐匿,症状不典型,在疾病早期容易被忽视,致残率和致死率较高。已有研究发现OPG-RANKL-RANK轴是调节破骨细胞分化成熟和骨吸收的关键因子,可通过介导不同的信号通路调节骨代谢,如调控破骨细胞生成分化的P38 MAPK信号通路,因此,进一步研究了解OPG-RANKL-RANK轴与P38 MAPK信号通路的关系可为DOP的防治提供新思路。该文综述OPG-RANKL-RANK轴介导P38 MAPK信号通路调控破骨细胞在DOP中的作用机制,为临床治疗DOP提供新的研究方向。

强骨康疏方通过RANKL/RANK/OPG信号通路调控破骨细胞分化而抑制类风湿关节炎骨破坏

目的:基于网络药理学及分子对接技术探讨强骨康疏方(Qianggu-Kangshu formula,QGKSF)治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)骨破坏的作用机制并利用细胞实验进行验证。方法:通过TCMSP数据库及文献检索获取QGKSF的主要活性成分及潜在靶点;使用OMIM数据库和GeneCards数据库检索与RA骨破坏相关的靶点,利用Venny 2.1.0筛选QGKSF抗RA骨破坏的靶点和靶点数量;通过STRING数据库构建潜在作用靶点的蛋白质-蛋白质相互作用网络,并利用Cytoscape软件进行拓扑分析筛选核心靶点;通过Metascape系统将筛选的QGKSF抗RA骨破坏的靶点进行进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)和基因本体(Gene Ontology,GO)富集分析;使用AutoDock和PyMOL软件对药物的核心成分与核心蛋白进行分子对接验证。体外培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,使用CCK-8法检测细胞活力;抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrateresistant acid phosphatase,TRAP)染色观察各组TRAP阳性多核细胞的数量;测定TRAP酶活性以反映细胞酶活性;鬼笔环肽染色检测F-肌动蛋白环形成情况;Western blot检测活化T细胞核因子1(nuclear factor of activated T cells 1,NFATc1)、TRAP、组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)、c-Fos、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factorκB,RANK)、RANK配体(RANK ligand,RANKL)和磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-AKT)蛋白水平。结果:从QGKSF中共筛选出136种有效活性成分及126个有效成分靶点;QGKSF抗RA骨破坏的靶点有207个,其中175个核心靶点。GO富集得到199条通路,筛选出与破骨细胞相关的通路共20条,主要有磷脂酰肌醇3-激酶/AKT信号通路和破骨细胞分化等。TRAP染色、酶活性测定及鬼笔环肽染色结果显示,与model组相比,QGKSF和氨甲蝶呤(methotrexate,MTX)组的阳性细胞形成减少,酶活性降低,F-肌动蛋白环形成减少;Western blot结果显示,与model组相比,QGKSF和MTX组的NFATc1、TRAP、CTSK、c-Fos、MMP9、p-AKT、RANK和RANKL蛋白水平显著降低(P<0.05),OPG蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论:QGKSF可抑制RANKL诱导的RAW264.7细胞向破骨细胞分化,其机制可能是通过RANKL/RANK/OPG信号通路的调控作用而抑制破骨细胞过度分化,从而起到减轻RA骨破坏的作用。

唑来膦酸对慢性阻塞性肺疾病患者骨质疏松症的临床疗效及对OPG/RANK/RANKL系统的影响

目的 探讨唑来膦酸对慢性阻塞性肺疾病患者骨质疏松症的临床疗效及对OPG/RANK/RANKL系统的影响。方法 选取2019年5月~2022年9月在本院就诊的慢性阻塞性肺疾病合并骨质疏松症患者86例,在慢阻肺规范化治疗基础上,予以钙尔奇D,同时采用静脉注射的方式予以唑来膦酸注射液。统计患者治疗前后视觉模拟评分法(visual analogue scale,VAS)评分、骨密度、肺功能、骨代谢指标及相关性分析骨代谢指标关系。结果 治疗后VAS评分显著低于治疗前,腰椎BMD、股骨颈BMD均显著高于治疗前,差异均具有统计学意义(t=57.527,P<0.001;t=3.039,P=0.004;t=8.012,P<0.001)。治疗后肺功能FEV1、FEV1/FVC均优于治疗前,差异具有统计学意义(t=3.009,P=0.004;t=2.321,P=0.025)。治疗后骨代谢指标RANKL、RANKL/OPG、PINP、S-CTX、血磷均低于治疗前,差异均具有统计学意义(P<0.05),治疗前后OPG、血钙水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。相关性分析显示,OPG均与PINP、S-CTX呈负相关,但无显著差异(P>0.05),RANKL、RANKL/OPG均与PINP呈正相关,但无显著差异(P>0.05),但与S-CTX呈正相关,具有统计学意义(P<0.05)。结论 唑来膦酸用于治疗慢性阻塞性肺疾病合并骨质疏松症患者,可改善患者骨代谢,提高骨密度,其治疗机制与介导OPG/RANK/RANKL系统有关。

OPG/RANKL/RANK系统在成骨细胞和破骨细胞相互调节中的作用

骨组织平衡由行使骨形成和骨吸收的成骨细胞(osteoblast,OB)和破骨细胞(osteoclast,OC)共同维持。在骨重建中两种细胞之间相互调节,一方面,OB、前体细胞、基质细胞调节OC的数量和活性;另一方面,OC反过来也可以调节OB的功能,从而形成一个反馈通路。OB和OC之间的相互调节有助于骨重建过程中骨吸收和骨形成的偶联。近年来,OB对OC骨吸收的调节已有较多研究,尤其是,OPG/RANKL/RANK信号系统的发现对于理解OB对OC骨吸收的调节是一个巨大的飞跃。但OC对OB的调节研究相对较少。本综述讨论了OB和OC之间的相互调节作用,综述了RANKL/RANK/OPG系统在骨形成和骨重建中的作用。

OPG/RANK/RANKL系统与原发性骨质疏松症的关联性及补肾活血法的调节作用研究进展

随着我国社会人口老龄化的到来,罹患原发性骨质疏松症的人将越来越多,加之该病起病隐匿,早期症状不典型,往往到出现严重疼痛甚至发生骨折才得以明确诊断,因此已成为一个全社会性的问题,给个人、家庭以及社会造成严重负担,研究原发性骨质疏松症的治疗意义重大。目前西药治疗该疾病存在很多毒副作用,而中医药对其防治积累了丰富的经验,形成了一套成熟的理论。本文通过中国知网检索2005年至2016年关于现代医学OPG/RANK/RANKL系统与原发性骨质疏松症的关系及中医补肾活血法治疗原发性骨质疏松症作用的现代研究文献,从中挖掘出OPG/RANK/RANKL系统与原发性骨质疏松症的关联性,以期探讨补肾活血法治疗原发性骨质疏松症的作用途径,为临床提供客观的实验室依据,促进补肾活血法治疗原发性骨质疏松症的临床推广应用。

从“虚”论治激素性股骨头坏死与OPG/RANK/RANKL系统相关性研究进展

近年研究表明,中医药治疗骨代谢疾病如激素性股骨头坏死疗效确切,受到广泛关注,但由于缺乏药效机制的分子生物学依据,尚未达到科学标准化治疗水平。OPG/RANK/RANKL系统的发现成为骨代谢疾病防治及研究的新切入点,激素性股骨头坏死"脾肾亏虚-由痰致瘀-因瘀致痹"的病机演变与该系统密切相关,从"虚"论治的效应最终可通过该系统轴向调控的微观信息来表达。本文初步探讨激素性股骨头坏死的中医辨治,并结合OPG/RANK/RANKL系统对骨代谢的调控机制阐述其相关性,为该病的防治及后续研究提供依据。

OPG/RANK/RANKL系统与骨质疏松研究最新进展

骨质疏松是严重威胁中老年人健康的骨科常见病,OPG/RANK/RANKL是参与调节骨重建的最重要的分子系统之一,与骨疾病相关的骨质疏松有密切联系,并已成为药物设计的新靶点.因此,对该系统的深入研究将为骨生理、病理机制阐明及骨疾病防治带来积极影响.

基于AMPK/sirt1/RANKL/OPG通路研究补阳还五汤促进骨质疏松性骨折大鼠愈合的机制

目的基于AMP活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子(sirt)1/核转录因子(NF)-κB受体活化蛋白配体(RANKL)/骨保护素(OPG)信号通路,探究补阳还五汤促进骨质疏松性骨折大鼠骨折愈合的机制。方法将大鼠随机分成假手术组、模型组、补阳还五汤低剂量组(6.25 g/kg)、补阳还五汤中剂量组(12.50 g/kg)和补阳还五汤高剂量组(25.00 g/kg)。除假手术组外,其余组均构建骨质疏松性骨折模型,并给予相应剂量药物干预。检测大鼠骨密度(BMD)值、骨折愈合评分及骨痂体积;自动生化分析仪测定血清碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素、钙和磷水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测股骨组织中的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠骨痂组织的病理形态;Western印迹检测股骨组织中AMPK/sirt1/RANKL/OPG通路蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组骨痂骨小梁分布稀疏,成骨细胞大量减少且有纤维组织生成,骨痂体积、血清中ALP、骨钙素、钙和磷水平及股骨组织中MDA水平、RANKL蛋白水平显著升高(P<0.05),BMD值、骨折愈合评分、骨组织中SOD和GSH-Px水平和AMPK、sirt1、OPG蛋白水平显著降低(P<0.05)。与模型组相比,补阳还五汤低、中、高剂量组骨痂骨小梁分布较为密集,成骨细胞增加,骨痂体积、血清中ALP、骨钙素、钙和磷水平及股骨组织中MDA水平、RANKL蛋白水平显著降低(P<0.05),BMD值、骨折愈合评分、骨组织中SOD和GSH-Px水平和AMPK、sirt1、OPG蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论补阳还五汤可能通过抑制氧化应激反应,调节AMPK/sirt1/RANKL/OPG通路,发挥对骨质疏松骨折大鼠的治疗作用。

肝脾失调型早期类风湿关节炎影像学征象与RANK/RANKL/OPG系统相关性研究

目的 :探讨肝脾失调型早期类风湿关节炎(RA)影像学征象与细胞核因子κB受体活化因子(RANK)/细胞核因子κB受体活化因子配基(RANKL)/护骨素(OPG)系统的相关性,寻找一种更完善的识别早期RA骨破坏的预警指标。方法:将符合诊断标准的90例RA早期患者进行辨证分型,分别行双手/腕和双下肢前后位平片影像学检查,并进行分期及影像学评估。按其骨侵蚀程度分为骨侵蚀组和非骨侵蚀组,观察2组中医症候量化与28个关节疾病活动度(DAS28)评分、实验室指标与影像学征象,并进行统计学分析。结果:非骨侵蚀组占70.0%(63/90),骨侵蚀组占30.0%(27/90)。骨侵蚀组Sharp总评分为(3.5±5.6)分,关节狭窄评分为(14.0±7.3)分,关节侵蚀评分为(17.5±6.5)分。骨侵蚀组Sharp评分与风湿指标、骨代谢指标均有明显相关性(均P<0.05),尤其是与RANKL、OPG明显相关(均P<0.01);与TRAP显著相关(均P<0.05);与抗CCP抗体明显相关(均P<0.01)。结论:RA发病早期,肝脾失调的功能表现大多早于关节局部症状,且RANKL、OPG、RANKL/OPG、TRAP、抗CCP抗体水平比其影像学变化能够更早预示RA出现骨质破坏的可能,抗体水平越高,预示将来进展性骨质破坏可能愈严重。

OPG-RANKL-RANK系统对绝经后女性类风湿关节炎患者骨代谢的影响

目的探讨绝经女性类风湿关节炎(RA)患者外周血核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)与炎症因子及骨代谢指标之间的相关性。方法收集绝经女性RA患者45例和健康对照组25例。采用双能X射线骨密度测量仪(DEXA)测骨密度,酶联免疫吸附法(ELISA)测定人外周血清RANKL、OPG、IL-6水平,并详细记录临床、实验室资料。两组间计量资料比较采用t检验,相关分析采用Pearson积差相关法。结果 1与健康对照组相比,绝经女性RA组的骨密度、OPG/RANKL低于对照组,RANKL、IL-6水平高于对照组(P<0.05),OPG在两组间并无统计学差异(P>0.05)。2绝经女性RA患者OP组较非OP组有更高的抗CCP抗体水平(P<0.05),RANKL、OPG、DAS28评分等并无差异(P>0.05)。3绝经女性RA患者外周血中RANKL与DAS28评分、PINP、β-CTX、IL-6正相关(r=0.357,0.381,0.370,0.330,P<0.05),OPG与PINP、β-CTX、IL-6正相关(r=0.561,0.511,0.328,P<0.05)。结论绝经女性RA患者RANKL水平与炎症因子IL-6的诱导密切相关,但作为动态变化指标,仅反映近期骨代谢状况,并不能反映长期骨密度的变化。

骨碎补总黄酮作用于OPG/RANKL/RANK轴系统的相关研究

目前虽未见骨碎补总黄酮直接作用于OPG/RANKL/RANK轴系统的研究报告,关于骨碎补总黄酮的多项临床及动物实验表明,其检验指标与OPG/RANKL/RANK轴系统互为联系,进而提示骨碎补总黄酮可能会影响OPG/RANKL/RANK轴系统的表达,本文现将相关研究做一综述。

红景天苷调节OPG/RANKL通路对阻塞性睡眠呼吸暂停综合征大鼠骨质流失的影响

目的探究红景天苷(Sal)调节骨保护素(osteoprotegerin,OPG)/核因子κB受体激活剂配体(receptor activator of nuclear factorKB ligand,RANKL)通路对阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)大鼠骨质流失的影响。方法将大鼠随机分为control组、OSAS组、Sal-L、Sal-M、Sal-H组(分别灌胃Sal 17.5、35、70 mg/kg),每组12只。除control组,其余组均采用缺氧和复氧循环复制OSAS大鼠模型。分别利用骨密度仪、三点弯曲实验、Micro CT测定大鼠股骨骨密度、生物力学及微结构变化;ELISA法检测血清骨钙素(osteocalcin,BGP)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Ⅰ型胶原交联C-末端肽(cross linked C-telopeptide of type I collagen,CTX-I)水平;RT-PCR检测股骨中OPG、RANKL mRNA水平;Western blot检测股骨OPG/RANKL通路蛋白表达。结果与control组比较,OSAS组大鼠骨密度、最大强度、最大负荷、骨小梁骨体积分数(Tb.BV/TV)、骨小梁数(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、BGP、ALP、OPG mRNA及蛋白表达、OPG/RANKL比值降低,CTX-I、RANKL mRNA及蛋白表达升高(P<0.05);与OSAS组比较,Sal-L、Sal-M、Sal-H组大鼠骨密度、最大强度、最大负荷、Tb.BV/TV、Tb.N、Tb.Th以及BGP、ALP、OPG mRNA和蛋白表达、OPG/RANKL比值依次升高,CTX-I、RANKL mRNA及蛋白表达依次降低,其中Sal-H组上述变化最为显著(P<0.05)。结论Sal通过升高OPG表达,降低RANKL表达,促进骨形成,抑制骨吸收,从而减少OSAS大鼠骨质流失。

OPG/RANK/RANKL系统与祖国传统医药

OPG/RANK/RANKL系统是近年来发现的在维持骨吸收和骨形成平衡方面起着重要调节作用的细胞因子系统。目前,随着对中医中药研究的深入,已经可以通过对中药单体成分的提取分析,研究其在细胞、分子水平的作用机制。本文主要阐述中药在OPG/RANK/RANKL系统的作用。

基于RANK/RANKL/OPG系统探讨阳和汤对阳虚证乳腺癌骨转移裸鼠模型的影响

目的探讨阳和汤对阳虚证乳腺癌骨转移裸鼠模型的影响及其相关机制。方法将70只裸鼠随机分为空白对照组(NS组),阳虚骨转移组(YG组),阳虚骨转移+唑来膦酸组(YGZ组),阳虚骨转移+阳和汤等临床剂量组(YGY组),阳虚骨转移+阳和汤2倍临床剂量组(YG2Y组),骨转移+唑来膦酸组(GZ组),骨转移+阳和汤等临床剂量组(GY组)7组。肌注氢化可的松建立阳虚证裸鼠模型;再将NS组以外的所有裸鼠左心室注射乳腺癌细胞MDA-MB-231悬液建立裸鼠骨转移模型;YGY、YG2Y、GY组造模后第5天开始中药煎剂灌胃干预,YGZ、GZ组于造模后第5、7、9、12、14、16、19天腹腔注射唑来膦酸,YG组造模1周后灌胃蒸馏水。用药20天后对裸鼠进行X线摄像、影像学评分、病理组织观察,取骨转移组织进行RT-PCR和Western-blot检测骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)的基因及蛋白表达量。结果阳和汤能在一定程度上改善裸鼠模型的生存质量(P<0.05),抑制骨转移,治疗骨转移引起的溶骨性骨质破坏(P<0.05),并能明显增加裸鼠OPG的表达(P<0.01)、抑制RANKL的表达(P<0.01)。结论阳和汤等临床剂量能有效治疗阳虚证乳腺癌骨转移,其可能机制是通过增加OPG的表达、抑制RANKL的表达,从而抑制乳腺癌骨转移的发展。

人成骨样细胞和前破骨样细胞ER亚型、OPG/RANKL/RANK系统、IL-6及其受体以及破骨细胞标志基因表达的研究

目的分析比较两种人成骨样细胞系(U2-OS、MG-63)和两种人前破骨样细胞系(U937、HL-60)ER亚型、OPG/RANKL/RANK系统、IL-6及其受体以及破骨细胞标志基因表达的差异,为今后研究雌激素与IL-6等细胞因子在骨组织中相互关系提供适宜的细胞模型。方法RT-PCR和免疫印迹法检测ERα、ERβ的表达,ELISA法测定IL-6的分泌,OPG、RANKL、RANK及IL-6受体的表达采用免疫印迹法进行检测,TRAP、MMP-9则采用RT-PCR技术进行分析。结果(1)转录水平及蛋白水平证实四种细胞均表达ERα和ERβ;(2)四种细胞不同程度地表达OPG和RANKL,而RANK则仅见于U937细胞表达;(3)四种细胞均表达IL-6受体(IL-6Rα、gp130),除U2-OS细胞外其余三种细胞均组成型分泌IL-6;(4)破骨细胞标志基因TRAP在两种人前破骨样细胞U937、HL-60中均表达,且表达水平相近;而MMP-9仅在U937细胞中弱表达;两种人成骨样细胞U2-OS、MG-63未见有这两种基因表达。结论筛选出用于研究雌激素与IL-6等细胞因子在骨组织中相互关系的细胞模型,同时也为今后深入阐明骨靶向和其他新型抗骨质疏松雌激素的分子机制研究奠定基础。