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有机磷农药降解菌YC-YH1中mpd和ophc2的克隆及酶学性质分析 被引量:2
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作者 贾阳 史延华 +3 位作者 任磊 乔铖 王俊欢 闫艳春 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期228-235,共8页
从一株有机磷农药降解菌施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri YC-YH1中克隆到两个有机磷水解酶基因mpd和ophc2。将两个基因分别连接到表达载体p ET-32a并克隆到大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达;利用Ni亲和层析柱纯化甲基对硫磷水解酶(MPH)和... 从一株有机磷农药降解菌施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri YC-YH1中克隆到两个有机磷水解酶基因mpd和ophc2。将两个基因分别连接到表达载体p ET-32a并克隆到大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达;利用Ni亲和层析柱纯化甲基对硫磷水解酶(MPH)和有机磷水解酶(OPHC2),并进行了酶学性质分析。MPH最高活力的反应温度为40℃,在p H8-12范围内,酶表现出较高的活力。OPHC2酶的最适反应温度为30℃,在p H 8-12的范围内酶活力较高。两种酶按1?1比例混合组成的混合酶在30-40℃范围内酶活力很高,达95%以上,混合酶在p H范围为8-12内仍具有较高的活力。多种金属离子会对酶的活性产生一定影响,酶对SDS和EDTA都有很高的敏感度,混合酶能够降低对金属离子的敏感性。 展开更多
关键词 有机磷水解酶基因 MPH ophc2 纯化 酶学性质
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一种新的有机磷降解酶基因ophc2的克隆与表达 被引量:26
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作者 邓敏捷 伍宁丰 +3 位作者 梁果义 初晓宇 姚斌 范云六 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第11期1068-1072,共5页
将来源于假产碱假单胞菌(Pseudomonas pseudoalcaligenes)的有机磷降解酶OPHC2进行了N端及内肽的氨基酸序列测定, 根据得到的氨基酸序列设计合成了简并引物, 通过PCR和反向PCR从Pseudomonas pseudoalcaligenes中克隆出有机磷降解酶基因o... 将来源于假产碱假单胞菌(Pseudomonas pseudoalcaligenes)的有机磷降解酶OPHC2进行了N端及内肽的氨基酸序列测定, 根据得到的氨基酸序列设计合成了简并引物, 通过PCR和反向PCR从Pseudomonas pseudoalcaligenes中克隆出有机磷降解酶基因ophc2. 编码基因全长975 bp, (G+C)含量为63%, 有一个可读框, 编码324个氨基酸, 酶蛋白理论分子量为36 kD. 编码基因的核苷酸序列分析表 明,与目前发表的有机磷降解酶基因相比同源性很低, 最高的只有46.4%, 说明这是一个新的有机磷降解酶基因. 将克隆得到的带有信号肽编码序列的和不带信号肽编码序列的有机磷降解酶基因, 分别与载体pET-30a构建重组表达质粒, 得到的表达产物具有正常的生物学活性. 展开更多
关键词 有机磷降解酶 ophc2 克隆 基因表达 假单胞菌属假产碱杆菌属 有机磷农药 杀虫剂
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Cloning and expression of ophc2,a new organphosphorus hydrolase gene 被引量:3
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作者 WUNingfeng DENGMinjie LIANGGuoyi CHUXiaoyu YAOBin FANYunliu 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2004年第12期1245-1249,共5页
The amino acid sequences of N-terminal and internal peptide of OPHC2,purified from Pseudomonas pseudoalcaligenes strain C2-1 in our lab,are determined.The full-length organphosphorus hydrolase gene ophc2 is cloned by ... The amino acid sequences of N-terminal and internal peptide of OPHC2,purified from Pseudomonas pseudoalcaligenes strain C2-1 in our lab,are determined.The full-length organphosphorus hydrolase gene ophc2 is cloned by PCR using the degenerate primers designed according to the sequences and future inverse PCR.The ophc2 gene is 975 bp long with G+C content of 63%,comprising one open reading frame encoding a polypeptide of 324 amino acids with a molecular weight of 36 kD.The nucleotide sequence of ophc2 shows low homolo- gies with those organphosphorus hydrolase genes deposited in Gen- Bank,one of which exhibits the highest homology of 46.4% with ophc2.The organphosphorus hydrolase protein expressed in E.coli bears normal bioactivity. 展开更多
关键词 有机磷水解酶 基因克隆 基因表达 假单胞菌拟等位基因 氨基酸 ophc2 环境污染
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