ESR、FSHβ及OPN基因多态性与母猪繁殖性状的关联分析

采用PCR-RFLP法对大白猪和长白猪猪群进行了雌激素受体基因(ESR)、卵泡促激素β亚基基因(FSHβ)和骨桥蛋白基因(OPN)等3个与繁殖性能相关的基因多态性检测,并对不同基因型的总产仔数、产活仔数及出生窝重进行了相关分析。结果表明:①在长白猪中,ESR和OPN基因的优势基因是A等位基因,FSHβ基因的优势基因是B等位基因;在初产母猪中,ESR基因BB型个体比AA型个体总产仔数、产活仔数及出生窝重高,FSHβ基因AA型个体比BB型个体总产仔数、产活仔数及出生窝重上高,OPN基因BB基因型个体比AA基因型个体总产仔数少1.20头,差异显著(P<0.05);在经产母猪中,OPN和FSHβ基因AA型个体比BB型个体总产仔数和产活仔数高,ESR基因总产仔数、产活仔数规律与初产母猪相反。②在大白猪群体中,ESR基因的优势基因是A等位基因,FSHβ和OPN基因的优势基因是B等位基因;在初产母猪中,ESR基因AA型比BB型个体产活仔数和出生窝重高,OPN和FSHβ基因AA型个体比BB型个体总产仔数和产活仔数高;在经产母猪中,ESR、OPN及FSHβ基因全都表现出BB型比AA型个体总产仔数和产活仔数高的趋势。

猪骨调素OPN基因多态性的研究

根据GenBank公布的猪OPN基因,设计3对引物,采用微卫星标记技术和PCR-SSCP技术检测猪OPN基因的多态性。结果显示,引物P1位点上检测到5个等位基因和4种基因型,引物P2和P3上分别存在2个等位基因和2个基因型。遗传多态性分析结果表明,P1位点上,小梅山猪的纯合度最高,为0.518,大白猪纯合度最低,为0.290。P2和P3位点上两个品种纯合度差异不大;大白猪的群体平均杂合度大于小梅山猪,其杂合度分别为0.481、0.388。

OPN基因多态性与猪繁殖性状相关分析

研究长白猪、大白猪、杜洛克猪及槐猪的骨调素(OPN)基因多态性及其与猪繁殖性状的关系.研究表明:OPN基因在6136 bp处发生同义突变(C→A),发现大白猪、长白猪和槐猪群体中存在3种OPN基因型(CC、CA和AA),而在杜洛克群体中仅发现AA型.在槐猪群体中,CC、AA型初产母猪个体的总产仔数(TNB)均显著高于CA型(P<0.05),不同基因型初产母猪的产活仔数(NBA)差异均不显著(P>0.05);CC、AA型经产母猪个体的TNB均极显著高于CA型(P<0.01),CC型经产母猪的NBA极显著高于CA型(P<0.01),AA型经产母猪的NBA显著高于CA型(P<0.05),但无论是初产母猪还是经产母猪,CC型和AA型的TNB和NBA差异均不显著(P>0.05).在大白猪、长白猪和杜洛克猪群体中,OPN基因对其TNB和NBA均无显著影响(P>0.05).

川中黑山羊OPN基因cDNA克隆及生物信息学分析

以川中黑山羊为研究对象,对OPN基因CDS区进行克隆测序及生物信息学分析,并与GenBank其他物种该基因进行序列比对,结果表明,川中黑山OPN基因全长952 bp,包含1个834 bp的完整的CDS编码区,编码278个氨基酸;OPN的CDS编码区核苷酸序列与绵羊、牛、猪、人、马、小鼠、鸡相应序列的同源性分别为98%、95%、79%、79%、70%、47%。

中国荷斯坦牛OPN基因对产奶性状的遗传效应分析

该试验以北京地区7个公牛家系共计1196头中国荷斯坦母牛为研究对象,利用荧光标记引物和ABI3730测序仪对OPN基因启动子上游1240bp处的T碱基插入/缺失突变(OPN3907)进行了基因型检测,共发现T9T9、T9T10和T10T10三种基因型,频率分别为0.0535、0.1957和0.7508;通过SAS软件(8.02)对3个产奶性状与OPN基因的关联程度进行了统计分析。结果表明,OPN基因不同基因型间的305d产奶量和乳蛋白量差异显著(P<0.05),乳脂量差异不显著(P>0.05);多重比较结果显示:T9T9和T9T10基因型的305d产奶量和乳蛋白量显著高于T10T10(P<0.05)。

OPN基因多态性对长白猪产仔数的影响

采用PCR-RFLP技术检测长白猪OPN基因的多态性,并分析各基因型与产仔数性状的相关性。结果表明:OPN基因A等位基因的频率为0.1851,B等位基因的频率为0.8149;不同基因型经产母猪和所有胎次母猪的总产仔数、产仔活数呈AA>AB>BB趋势,且AA型显著高于AB和BB型。

贵州黑白花奶牛OPN基因多态性及其与产奶性状的关联分析

为探讨贵州黑白花奶牛的产奶性状与OPN基因多态性的关联,试验以200头贵州黑白花奶牛为供试动物,采用PCR-SSCP技术和DNA测序技术,利用OPN基因的序列设计引物,对其多态性与奶牛产奶性状的相关性进行分析。结果表明,贵州黑白花奶牛OPN基因多态性有2种等位基因M和N,等位基因频率分别为0.62和0.38,群体多态信息含量为0.360,杂合度为0.689,M等位基因是群体中的优势等位基因;MM型个体的乳脂率和305 d产奶量显著或极显著优于NN型(P<0.05或P<0.01);MM型个体305 d产奶量显著优于MN型(P<0.05)。结果显示,OPN的MM基因型可作为选择高乳脂率和高产奶量的分析标记。

花鲈OPN5基因克隆及其在光周期处理下的表达特征

【目的】通过克隆花鲈视蛋白5(OPN5)基因(LmOPN5)序列,检测视网膜、血管囊、下丘脑和垂体中LmOPN5基因在不同光周期下的表达水平,探究光周期对LmOPN5基因表达的影响,为深入研究花鲈感知光周期信号提供参考依据。【方法】通过PCR和RACE克隆获得LmOPN5基因全长序列,并进行生物信息学分析;应用实时荧光定量PCR检测LmOPN5基因在各组织中的相对表达量;再比较不同光周期(常光周期组12 L∶12 D,短光周期组8 L∶16D,长光周期组16L∶8D;L:光照时间,D:黑暗时间)条件下,视网膜、血管囊、下丘脑和垂体中LmOPN5基因表达的变化。【结果】LmOPN5基因cDNA全长1732 bp,其中开放阅读框(ORF)长1056 bp,共编码351个氨基酸残基。Lm OPN5蛋白分子量为39.26 kD,理论等电点(pI)为9.17。LmOPN5蛋白二级结构中α-螺旋占40.17%、无规则卷曲占34.76%、延伸链占22.51%、β-转角占2.56%,以α-螺旋和无规则卷曲为主。氨基酸序列同源比对分析结果显示,LmOPN5氨基酸序列与其他硬骨鱼类的OPN5氨基酸序列相似性为82.7%~92.0%,与哺乳动物OPN5氨基酸序列相似性较低。LmOPN5基因在花鲈脑组织分布广泛,尤其在下丘脑、视叶、垂体、端脑和血管囊中的相对表达量较高;同时在视网膜的相对表达量也较高。在视网膜中,LmOPN5基因相对表达量在不同光周期处理下发生显著变化(P<0.05,下同),其中长光照周期促进LmOPN5基因表达,短光照周期抑制LmOPN5基因表达;在血管囊中,长光周期条件下LmOPN5基因相对表达量显著高于常光周期;在下丘脑中,LmOPN5基因相对表达量在3种光周期处理下无显著变化(P>0.05);在垂体中,短光周期条件下LmOPN5基因相对表达量显著高于长光周期和常光周期。【结论】LmOPN5基因序列在硬骨鱼中较保守;不同光周期处理影响视网膜、血管囊和垂体中LmOPN5基因表达,表明花鲈不同组织对光周期的反应不一致,花鲈对光周期的感应具有组织特异性。

ESR、OPN和RBP4基因多态性对大白猪繁殖性状的影响

为了探讨雌激素受体(estrogen receptor,ESR)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和视黄醇结合蛋白4(retinol binding proteins 4,RBP4)的多态性对大白猪繁殖性状的影响,本研究采用PCR-RFLP技术检测试验猪群ESR、OPN和RBP4基因的多态性,并分析其对大白猪总产仔数、产活仔数、健仔数、窝重、初生重、死胎、木乃伊、弱仔数和畸形数等性状的影响。结果显示,在大白经产母猪中,ESR和OPN基因的优势基因为A等位基因,RBP4基因的优势基因为B等位基因;ESR基因AB与BB基因型在总产仔数、产活仔数性状上均高于AA基因型;OPN基因在总产仔数性状上AA基因型最高,在产活仔数、健仔数、窝重性状上均为BB>AA>AB;RBP4基因在总产仔数、产活仔数、健仔数、窝重性状上均为AA>BB>AB;合并基因型分析发现ESR-RBP4最优的分子标记组合为ABAA;OPN-RBP4最优的分子标记组合为BBAA。因此,ESR、OPN和RBP4基因多态性与大白猪繁殖性状相关。

水牛FSHR、INHA、LHCGR、OPN基因多态性与超数排卵性状的关联分析

研究旨在根据基因多态性和超数排卵效果的关联分析,找到一种能预测水牛超数排卵反应的因子。以127头水牛(摩拉、尼里、地中海、本地、杂交水牛)为材料,采集血样,提取基因组DNA。采用PCR及DNA测序技术,以Gen Bank公布的牛FSHR(follicle stimulating hormone receptor)、INHA(inhibin alpha)、LHCGR(luteinizing hormone/choriogonadotropin receptor)、OPN(osteopontin)基因序列为参考序列,设计PCR引物,对FSHR的5'上游调控区、INHA第1外显子、LHCGR第11外显子和OPN3907启动子进行了基因型检测,并将基因多态性与45头水牛的超数排卵性状进行了关联分析。结果表明:FSHR、INHA、LHCGR的相应SNP位点都不存在多态性;OPN基因启动子上游存在T碱基插入/缺失突变,T9/T9、T10/T10、T9/T10的基因型频率分别为:0.4020、0.1275和0.4634。此外,T10/T10型水牛在第5次超数排卵时获得的可用卵母细胞数显著高于T9/T9型水牛(P<0.05)。以上结果预示,OPN可作为水牛超数排卵效果的一个预测因子。

京海黄鸡骨桥蛋白基因第七外显子多态性及其与生长繁殖和屠宰性状的关系

研究骨调素基因对京海黄鸡生长、繁殖及屠宰性状的效应。结果表明:该基因有2个位点出现多态,SSCP分析后出现3个基因型。3个基因型对初生重、12周龄重、16周龄重和成年体重影响达到显著水平(P<0.05)。AA型个体初生重、12周龄体重和16周龄体重最低,显著低于BB型和AB型的个体(P<0.05)。AA型个体的4周龄、8周龄体重最低,但与BB型和AB型个体差异不显著(P>0.05)。对成年体重而言,BB型与AB型个体之间差异达显著水平(P<0.05),但与AA型个体差异均不显著(P>0.05)。3个基因型与繁殖性状的相关分析表明,基因型对开产日龄、300日龄产蛋数、300日龄蛋重和66周龄产蛋数均无显著效应(P>0.05)。基因型与屠宰性状的相关分析表明,基因型与性别间的交互作用不显著(P>0.05)。AA型个体的胸肌重和腿肌重均低于BB型和AB型个体。值得注意的是AA型个体的腹脂重均低于BB和AB型个体,但其腹脂率均高于BB型和AB型个体(P>0.05)。推测OPN可能是影响鸡体重的候选基因,该基因可以作为遗传标记对鸡体重进行分子标记辅助选择。

骨桥蛋白第7外显子基因多态性与强直性脊柱炎遗传易感性相关性研究

目的:观察OPN基因(osteopontin,OPN)第7外显子多态性与强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)之间的相关性。方法:收集AS患者(病例组)和健康体检者(对照组)外周静脉血,提取白细胞DNA,根据GeneBank已发表OPN基因第7外显子序列,采用Primer 5.0软件设计引物,PCR扩增后测序,分析研究可能存在的突变多态性位点。结果:OPN第7外显子9175位点发现1例新型TC突变杂合子型,9250位点发现TT、TC、CC三种基因型。等位基因C频率为0.58%。结论:OPN基因第7外显子存在基因多态性现象,与强直性脊柱炎发病存在一定相关性。

骨桥蛋白基因多态性与母猪繁殖性状的关联分析

为探讨骨桥蛋白(OPN)基因多态性对母猪繁殖性状的影响,用直接测序法检测长白、大约克、杜洛克和金华母猪群体OPN基因的多态性,并对母猪的繁殖性能指标进行了关联分析。结果显示,OPN外显子6有一处T→A的突变,存在TT、AT、AA 3种基因型,等位基因T为优势等位基因;OPN基因多态性对初产和经产长白、大约克、杜洛克和金华母猪群体的总产仔数、产活仔数和初生窝重有显著影响(P<0.05)。试验结果表明,OPN基因多态性对母猪的繁殖性能存在影响,可作为潜在的遗传标记。

猪骨桥蛋白基因的组织差异表达

为了研究猪骨桥蛋白基因(Osteopontin,OPN)组织特异性的表达规律,采用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)分析方法,以β-actin基因为内参,对猪OPN基因在心、肝、脾、肺、肾、大脑、小脑、垂体、下丘脑和子宫内膜等10种组织中的mRNA表达水平进行了检测.结果表明,OPN基因在子宫内膜的表达量为最高,其次是在小脑,在心、肝、脾和肺也有不同程度的表达,而在肾、下丘脑和垂体的表达量很少,从而提示OPN基因在子宫内膜中可发挥重要作用.

肥羔型黑山羊骨调素基因部分序列克隆及生物信息学分析

为了研究山羊骨调素（OPN）基因的分子生物学特性，试验采集肥羔型黑山羊卵巢组织，提取总RNA，扩增OPN基因序列，并进行生物信息学分析。结果表明：通过PCR扩增得到肥羔型黑山羊OPN基因的部分基因片段，长度为949bp，其中编码区为840bp，共编码279个氨基酸；肥羔型黑山羊OPN蛋白的分子式为C1312H2054N372O499S5，相对分子质量为31．18，属于亲水性蛋白，其信号肽切割位点位于18—19个氨基酸之间。肥羔型黑山羊OPN基因与绵羊、牛相应序列的相似性分别为98％、94％。

骨桥蛋白及人附睾蛋白4基因在上皮性卵巢癌中的表达及临床价值

目的研究卵巢癌中骨桥蛋白(OPN)与人附睾蛋白4 (HE4)表达与临床病理因素之间的关系,并分析其对患者预后的影响。方法选择本院2015年1月至2016年7月收治的21例卵巢上皮交界性肿瘤患者、16例卵巢上皮性良性肿瘤患者以及55例上皮性卵巢癌患者作为本次研究对象,应用免疫组织化学S-P法分别对其肿瘤组织中的OPN与HE4蛋白的表达情况进行检测与分析,并观察蛋白表达与临床病理因素之间的相关性及预后影响。结果上皮性卵巢癌OPN、HE4的阳性表达率明显高于卵巢上皮交界性肿瘤及卵巢上皮性良性肿瘤(P<0.05),OPN、HE4的阳性表达率随着临床分期与病理分级的增高而增高,Ⅲ期、Ⅳ期明显高于Ⅰ期(P<0.05);病理分级3级明显高于1级(P<0.05);淋巴结转移者显著高于无淋巴结转移者(P<0.05)。结论 OPN、HE4基因蛋白高表达与上皮性卵巢癌浸润、侵袭与淋巴结转移存在明显相关性,且对患者预后有促进作用。