荷斯坦奶牛与和牛活体采卵-体外受精(OPU/IVF)体系的建立及应用

[目的]研究牛活体采卵-体外受精(ovum pick-up and in vitro fertilization,OPU/IVF)体系,建立高效的牛体外胚胎生产系统。[方法]以从屠宰场采集的健康牛新鲜卵巢为试验材料,进行卵母细胞体外成熟、体外受精、体外胚胎培养相关条件的摸索,重点考查体外胚胎培养液中添加瘦素(leptin)对囊胚率的影响。选取13~15月龄健康荷斯坦奶牛及和牛各10头作为供体,进行活体采卵、卵母细胞体外成熟、体外胚胎生产,记录可用卵数及可用囊胚数,统计卵裂率、囊胚率;2个品种牛的体外冷冻胚胎解冻后,以荷斯坦奶牛为受体进行胚胎移植,移植后45 d统计妊娠率。[结果]添加30 U/mL的leptin可以显著(P<0.05)提高屠宰场来源牛体外胚胎的囊胚率。随机选择供体牛活体采卵,平均每头荷斯坦奶牛获得可用卵7.5枚,平均每头和牛获得可用卵8.1枚;荷斯坦奶牛及和牛的卵裂率分别为84.00%、82.71%,二者差异不显著(P>0.05)。体外培养条件下,平均每头荷斯坦奶牛获得可用囊胚4.3枚,平均每头和牛获得可用囊胚3.7枚;荷斯坦奶牛的囊胚率(57.33%)显著(P<0.05)高于和牛(45.68%)。体外胚胎解冻后移植,荷斯坦奶牛胚胎组的妊娠率为54.17%,和牛胚胎组的妊娠率为55.79%,二者差异不显著(P>0.05)。[结论]该研究建立的OPU/IVF体系可以有效提高优质母牛的利用效率,降低生产成本,为牛体外胚胎生产系统的优化提供了参考。

牛OPU卵子体外受精和早期胚胎培养的方法研究

为了提高牛OPU卵子来源的胚胎生产效率,本试验对牛活体采卵获得的卵子分别用不同系列的培养液培养,用不同精子离心方法及不同的脱颗粒细胞方法进行操作。通过卵裂率和桑囊率的结果,以确定培养液及各种操作方法的可行性。结果表明,进口成品培养液的桑囊率虽高于自配溶液(34.29±9.20%vs 26.45±20.01%),但差异不显著,不同的精子离心方法和扒卵方法也没有显著差异。通过本研究可以为源于牛OPU卵子的体外胚胎生产程序的优化提供参考。

西门塔尔牛体外胚胎生产效率分析

【目的】文章旨在分析西门塔尔牛活体采卵-体外受精(OPU-IVF)体外胚胎生产效率的影响因素,为提高西门塔尔牛体外胚胎生产效率、优化西门塔尔牛体外胚胎生产流程提供生产依据。【方法】本实验以未经激素处理的西门塔尔牛卵丘卵母细胞复合体(COCs)、进口肉牛冻精为实验材料,通过卵母细胞活体采集(OPU)、体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)、早期胚胎体外培养(IVC)等技术手段,对体外受精后第7 d囊胚率进行统计分析。【结果】不同公牛精液对囊胚发育有影响,不同供体母牛对囊胚发育率影响显著。【结论】相同卵母细胞利用率水平的供体母牛,回收COCs体外受精后,囊胚率与冻精有关(P<0.05);不同卵母细胞利用率水平的供体母牛,回收COCs体外受精后,囊胚率随卵母细胞利用率升高而升高(P<0.05)。

水牛活体采卵体外生产胚胎技术

本研究应用B超引导阴道穿刺法,对40头尼里-拉菲和摩拉水牛连续3次采卵,采卵间隔为3d,共采卵120头次。共穿刺卵泡935个,采集卵母细胞643枚,可用卵母细胞为456枚,卵母细胞回收率为68.77%(643/935),卵母细胞可用率为70.92%(456/643),头均可用卵母细胞为(3.80±0.23)个。第1、2、3次采卵头均回收可用卵母细胞数分别为(3.82±0.50)、(3.82±0.35)、(4.05±0.43)枚,差异不显著(P>0.05)。收集的卵母细胞经体外成熟、体外受精和受精卵与颗粒细胞单层体外共培养,受精后48h分裂率为56.36%(257/456),囊胚率为20.39%(93/456)。2个品种水牛的头均可采卵泡数、头均回收卵母细胞数和囊胚率均无显著差异。这表明,在B超引导下进行连续活体采卵,并利用卵母细胞进行体外受精生产胚胎是可行的。

异丙酚加芬太尼静脉麻醉在阴道取卵术中的临床应用

目的:探讨异丙酚加芬太尼静脉麻醉下取卵术的效果及对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结局的影响。方法:将IVF-ET患者分为麻醉组与对照组A和对照组B,观察3组取卵效果及其对IVF-ET结局的影响。结果:静脉麻醉效果好,无明显不良作用。麻醉组取卵率增高(P<0.05)而优胚率、妊娠率、流产率及胎儿畸形率等与对照组差异无显著性(P>0.05)。结论:静脉麻醉下取卵可获得满意的临床效果,且对IVF-ET结局无不良影响。

山羊活体采卵及卵母细胞体外受精研究

选择健康空怀山羊母羊,随机分组,分别用PMSG 1000 u和FSH 325～375 u超数排卵处理,研究利用外源激素进行超排对山羊活体采卵效果的影响,比较活体采集与屠宰场采集的卵母细胞体外受精效果.结果表明,经超排处理后,卵巢明显增大,同时提高了采集卵母细胞的数量和质量.用FSH超排,≥2 mm的卵泡数为23.00个±5.69个,采集卵母细胞数为12.67枚±4.06枚,极显著大于对照组（P＜0.01）.活体采集的卵母细胞的体外成熟率及受精率分别为44.44%和33.33%,均略高于从屠宰场获取卵巢采集的可用卵泡卵母细胞,但差异不显著（P＞0.05）.

活体采卵技术在荷斯坦奶牛繁殖中的应用

[目的]为提高优质奶牛的繁殖力,保证低成本的情况下大量生产优质胚胎,对荷斯坦奶牛采用活体采卵的方式采集卵母细胞。[方法]将4头荷斯坦奶牛分为超排组和非超排组2组,超排组对试验牛注射FSH,非超排组对对照牛不采取任何处理。对荷斯坦奶牛进行活体采卵,并对卵母细胞数进行统计。[结果]共采集到12枚卵母细胞,经过受精培养后有8枚受精卵发育良好。[结论]采用优化的活体采卵程序并配合超排技术,能够更好地利用良种奶牛,以达到动物胚胎生产和辅助生殖的目的。