牛结节性皮肤病病毒ORF141蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

为获得牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin diseasevirus,LSDV)ORF141蛋白及其多克隆抗体,本研究参照Gen Bank收录的LSDV ORF141基因序列,利用Snap Gene软件设计引物,以LSDV基因组为模板,利用PCR扩增ORF141基因,构建原核表达重组质粒p ET-30a(+)-ORF141,转化至Rosseta大肠杆菌表达细胞中,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,然后利用SDS-PAGE和Western-blot对目标蛋白进行鉴定,用该蛋白免疫新西兰大白兔,利用免疫荧光试验确定多克隆抗体的特性。结果表明,本研究成功构建了p ET-30a(+)-ORF141原核表达载体,在1 mmol/L IPTG、37℃条件下诱导表达目的蛋白,大小约25 ku,主要以包涵体的形式存在;制备的抗LSDV ORF141多克隆抗体的效价可达1∶409600,免疫荧光试验表明其能够识别LSDV病毒中ORF141编码的天然蛋白,这为后续明确LSDV ORF141基因编码蛋白的生物学功能研究奠定了基础。