2020年黑河市某规模化牛场BAstV检测及ORF1a基因遗传变异分析

为调查2020年黑河市某规模化奶牛养殖场中牛星状病毒(bovine astrovirus,BAstV)的感染及遗传进化情况,应用RT-PCR方法对该牛场的腹泻样品进行检测,并对BAstV ORF1a基因进行扩增、测序以及遗传进化分析。结果表明,15份腹泻粪便样品中,BAstV的检测阳性率为20%(3/15),对测序成功的2株BAstV毒株进行序列分析显示,鉴定的2株BAstV毒株的核苷酸与氨基酸同源性分别为99.3%和99.4%。2株毒株都与我国BAstV四川流行毒株,登录号NC_037655.1核苷酸同源性较高,分别为96.6%和97.3%,而其与嗜神经型BAstV欧洲毒株,KX266908.1差异较大,核苷酸同源性分别为36.7%和37.4%。系统发育进化树结果显示,试验鉴定的2株BAstV与已报道的其他中国BAstV流行参考毒株关系密切。

牛星状病毒EvaGreen实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

牛星状病毒(BAstV)是我国新发的犊牛腹泻病原,本试验的目的是建立检测BAstV的Real-time PCR方法。根据BAstV流行株的ORF1a基因序列设计引物,通过优化反应条件和体系,成功建立基于EvaGreen检测BAstV的Real-time PCR方法。结果表明,该检测方法的Ct值与标准品模板在1.36×10^(1)~1.36×10^(8)拷贝/μL线性关系良好,相关系数R^(2)=0.999,扩增效率为93.79%;该方法可特异性检出BAstV,对犊牛腹泻其他相关病原呈阴性;最低检测下限为13.6拷贝/μL;批间和批内的变异系数均小于2%,重复性好。对2017年9月至2019年5月采自河南省的221份犊牛腹泻样本进行检测,BAstV的检出率为18.1%(40/221),采样场阳性率为100.0%(14/14)。本试验所建方法灵敏度高、特异性强、稳定性好,为BAstV的检测和流行病学调查提供了有力手段。

一种基于荧光qPCR检测新型冠状病毒核酸的优化反应体系的建立及相关测试

为实时并快速地检出SARS-CoV-2冠状病毒RNA,对基于荧光定量聚合酶链式反应(Polymerasechain reaction,PCR)的反应体系进行了优化。结果表明,按照本实验提供的方法操作后,检测SARS-CoV-2冠状病毒所用的RNA样本的最小浓度稀释度可调至1/10000(初始值设为10ng/μL)。且用于检测COVID-19临床阳性样本所测得循环值(Cycle threshold,Ct)均低于35或40。其灵敏性测试结果也表明该方法的敏感性较好。同时在同等条件下,与目前市场上的COVID-19试剂盒的检测结果基本一致,并且检测循环数缩短2个单位。因此,本实验所建立的体系适用于前期临床诊断的筛查工作,为在医学上实现快速诊断提供了工具。