锦鲤疱疹病毒CJ株ORF27基因克隆及生物信息学分析

为了解锦鲤疱疹病毒中国吉林株(KHV-CJ)ORF27基因编码蛋白的结构特征和进化关系,采用镜鲤尾鳍原代细胞增殖KHV-CJ,提取其DNA,经PCR扩增,获得ORF27基因,将其克隆在pMD18-T载体中,构建重组质粒。应用生物信息学方法初步分析KHV-CJORF27基因的结构和功能,并与GenBank上公布的三株KHV构建系统进化树。结果显示:获得207bp的ORF27基因,编码69个氨基酸;预测ORF27编码蛋白的理论分子质量为7366.62Da,等电点为4.487;抗原表位预测显示抗原性良好;编码蛋白存在1个N-糖基化位点、4个O糖基化位点和5个磷酸化位点;系统进化树分析表明与锦鲤疱疹病毒美国株(KHV-U)属同一分支。

锦鲤疱疹病毒ORF126-ORF27融合蛋白的表达及免疫原性分析

根据锦鲤疱疹病毒（Koi herpesvirus,KHV）囊膜蛋白ORF27基因和糖蛋白ORF126基因序列设计特异性扩增引物,通过PCR成功克隆了锦鲤疱疹病毒（Koi herpesvirus,KHV）ORF27基因和ORF126基因片段,分别将ORF27基因、ORF126基因以及ORF126-ORF27融合基因与原核表达载体pMAL-c2x连接构建重组表达质粒pMAL-c2x-ORF126,pMAL-c2x-ORF27,pMAL-c2x-ORF126-ORF27,

棉铃虫核型多角体病毒泰国株ORF27全长基因序列分析及其截短型基因的原核表达

目的研究棉铃虫核型多角体病毒泰国株ORF27蛋白的功能,阐释其在传代效应中可能发挥的分子机制。方法用PCR方法从棉铃虫核型多角体病毒泰国株基因组中扩增ORF27基因;使用ProtParam、TMpred、SignalP、ScanProsite等生物信息学软件分析其理化特性、亚细胞定位、信号肽、跨膜结构、功能位点等;并将其氨基端截短型基因进行原核表达。结果ORF27基因序列全长768 nt,编码255 aa,分子质量约29.5 ku。生物信息学软件预测其具有多个功能基序。截短型重组载体表达出分子质量约35 ku的外源蛋白,主要以包涵体形式存在。结论棉铃虫核型多角体病毒ORF27蛋白可能具有非常广泛的生物学活性,调控多种细胞信号传导通路,调节细胞凋亡和细胞周期,参与传代效应的发生。

锦鲤疱疹病毒ORF27基因的原核表达及免疫原性研究

克隆锦鲤疱疹病毒(KHV)ORF27基因,构建重组质粒p ET32a-ORF27,并用IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测获得含his标签大小为27.3ku的蛋白条带。蛋白纯化浓缩后免疫小鼠,不同时间采血收集血清用间接ELISA检测抗体水平。结果显示:注射表达蛋白的小鼠血液中可检测到KHV的特异性抗体,在21 d左右抗体水平达到最大值,而对照组小鼠没有检测到抗体。