锦鲤疱疹病毒CJ株ORF27基因克隆及生物信息学分析

为了解锦鲤疱疹病毒中国吉林株(KHV-CJ)ORF27基因编码蛋白的结构特征和进化关系,采用镜鲤尾鳍原代细胞增殖KHV-CJ,提取其DNA,经PCR扩增,获得ORF27基因,将其克隆在pMD18-T载体中,构建重组质粒。应用生物信息学方法初步分析KHV-CJORF27基因的结构和功能,并与GenBank上公布的三株KHV构建系统进化树。结果显示:获得207bp的ORF27基因,编码69个氨基酸;预测ORF27编码蛋白的理论分子质量为7366.62Da,等电点为4.487;抗原表位预测显示抗原性良好;编码蛋白存在1个N-糖基化位点、4个O糖基化位点和5个磷酸化位点;系统进化树分析表明与锦鲤疱疹病毒美国株(KHV-U)属同一分支。

锦鲤疱疹病毒ORF27基因的原核表达及免疫原性研究

克隆锦鲤疱疹病毒(KHV)ORF27基因,构建重组质粒p ET32a-ORF27,并用IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测获得含his标签大小为27.3ku的蛋白条带。蛋白纯化浓缩后免疫小鼠,不同时间采血收集血清用间接ELISA检测抗体水平。结果显示:注射表达蛋白的小鼠血液中可检测到KHV的特异性抗体,在21 d左右抗体水平达到最大值,而对照组小鼠没有检测到抗体。