HBV相关分泌蛋白c18orf54的克隆表达及初步功能研究

目的体外原核表达C18ORF54的重组蛋白,对其进行纯化,制备兔抗C18ORF54蛋白多克隆抗体,并对该重组蛋白对HepG2细胞可能的生物学作用进行初步研究。方法应用反转录聚合酶链反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术,以HepG2细胞总RNA为模板,反转录并扩增c18orf54目的基因片段,构建原核表达载体pET-32a(+)-c18orf54。转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基β-D-硫代吡喃半乳糖(isopropylβD thiogalacttpy ranoside,IPTG)诱导并通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium lauryl sulfate-polyacrylamide gol electrophoresis,SDS-PAGE)分析、免疫印迹(Western blotting)、生物质谱技术分析证实c18orf54重组蛋白表达正确。用Ni+亲和柱纯化表达蛋白。C18ORF54重组蛋白免疫新西兰兔,获得抗c18orf54蛋白的多克隆抗体。以纯化的C18ORF54蛋白为抗原,分别以免疫前后的新西兰兔血清作为第一抗体,利用Western blotting和酶联免疫吸附(enzyine linked immunosorbent assay,ELISA)法对多克隆抗体进行特异性分析及效价检测。将不同浓度范围的C18ORF54重组蛋白与培养的HepG2细胞共孵育,初步了解该重组蛋白对HepG2细胞可能的生物学作用。结果 PCR法扩增获得c18orf54基因片段,成功表达了C18ORF54重组蛋白,经SDS-PAGE和Western blotting分析得到证实。成功获得重组蛋白及抗C18ORF54多克隆抗体。ELISA检测证实多克隆抗体效价>1∶320 000。结论利用大肠埃希菌BL21(DE3)能够成功表达C18ORF54蛋白,获得高特异性、高效价兔抗C18ORF54重组蛋白的多克隆抗体,为今后研究C18ORF54蛋白的生物学特性奠定了基础。

C20orf54抑制食管癌细胞增殖并促进其凋亡

目的观察过表达C20orf54对食管癌细胞周期和凋亡的影响,探讨C20orf54基因在食管癌发生、发展中的作用。方法应用免疫组织化学染色方法检测C20orf54蛋白在食管癌组织和癌旁正常组织中的表达;应用MTT法和流式细胞术检测过表达C20orf54对食管癌细胞系EC9706细胞增殖能力、细胞凋亡与细胞周期的影响。结果 C20orf54在食管癌组织中免疫反应性显著低于癌旁正常组织。稳定转染表达C20orf54的EC9706细胞生长明显受抑制,且G0/G1期细胞积聚,周期阻滞,细胞凋亡增多。结论 C20orf54基因可能参与食管癌的生长调控,食管癌的发生与C20orf54基因的表达有关。

食管鳞状细胞癌C20orf54基因多态性与吸烟、饮酒及体质量指数的相关性研究

目的探讨食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)C20orf54基因多态性rs13042395位点与吸烟、饮酒、体质量指数的相关性。方法选取7 673例患者和11 013例正常者C20orf54基因多态性rs13042395位点基因分型资料(基因分型采用sequenom芯片)。比较各组间基因型和等位基因频率的分布。结果病例组与对照组间C20orf54基因多态性rs13042395位点基因型和等位基因频率分布,差异具有统计学意义(P<0.05),C20orf54T等位基因降低ESCC患病风险(P=1.21E-11,OR=0.86,95%CI=0.82～0.90)。C20orf54基因多态性位点rs13042395在吸烟/不吸烟、饮酒/不饮酒及各级BMI人群中未观察到与ESCC的相关性。结论 C20orf54基因多态性、rs13042395遗传多态性与ESCC的易感性相关,与吸烟、饮酒、体质量指数无明显相关性。

食管癌易感基因C20orf54的生物信息学分析

目的利用生物信息学方法对食管癌易感新基因C20orf54进行特征分析和功能预测,以获得该基因及其编码蛋白更多的功能提示。方法应用Blat、Blast、ProtParam、SOPMA、ScanProsite、SignalP4.1、TMHMM、PSORT和UniGene等软件或数据库,进行染色体定位、序列的相似性比较、理化性质、二级结构、亚细胞定位、功能位点识别。采用逆转录-聚合酶链反应(RTPCR),验证C20orf54基因在食管癌细胞和鼻咽癌细胞中的表达情况。结果 C20orf54基因进化保守,蛋白质不稳定,具有疏水性,定位于细胞膜的可能性最高,序列中预测有蛋白激酶C、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和N-糖基化位点及N-豆蔻酰化位点。二级结构主要是α螺旋和无规则卷曲。C20orf54基因可在食管癌细胞和鼻咽癌细胞中表达。结论人类C20orf54蛋白是定位于细胞膜上的不稳定疏水蛋白,可能在体内参与多种生物学过程,但可能并不是在食管癌组织特异表达的分子标志。

贲门腺癌组织中C20orf54的表达

目的:探讨C20orf54在贲门腺癌(GCA)组织中的表达和意义。方法:采用RT-PCR、Western blot和免疫组化SP法检测60例GCA组织及癌旁正常黏膜组织中C20orf54的表达。对C20orf54高、低表达的GCA患者进行生存分析比较。结果:GCA组织中C20orf54 mRNA及蛋白的表达低于癌旁正常黏膜组织(P<0.001);GCA和癌旁正常黏膜组织中C20orf54蛋白的高表达率,差异有统计学意义(P<0.001)。中、低分化,有淋巴结转移,浸润深度T3、T4和临床分期Ⅲ、Ⅳa期的GCA组织中C20orf54蛋白高表达率低于高分化,无淋巴结转移,浸润深度T1、T2和临床分期Ⅰ、Ⅱ期者(P<0.05)。C20orf54高表达和低表达GCA患者Kaplan-Meier生存曲线差异有统计学意义(P<0.001),中位生存期分别是40.2和23.1个月。结论:C20orf54表达下调可能与GCA发生发展、侵袭及不良预后有关。

C20orf54基因多态性与我国食管癌遗传易感性的Meta分析

目的:分析C20orf54基因(rs3746804)多态性与食管癌易感性的关系。方法:在Pubmed、Web of Science、CNKI数据库、万方数据库及维普数据库中全面搜索C20orf54基因多态性与食管癌的病例对照的文献,使用OR值与95%CI作为评价指标,采用随机或固定效应模型进行合并,并进行偏倚估计。使用Review Manager 5.0进行数据分析。结果:共纳入文献4篇。分析结果显示,等位基因T/C、基因型CC/CT、CT+TT/CC分布的OR值及95%CI分别为0.88(0.77,0.99),1.39(1.01,1.92)和0.75(0.64,0.88)。结论:C20orf54基因(rs3746804)多态性与食管癌的易感性密切相关,带有等位基因T、基因型CT+TT的个体可能对食管癌更不易感,而携带基因型CC的个体相较携带CT的个体可能更易发生食管癌。

PLCE1及C20orf54与食管鳞状细胞癌发生的相关性研究进展

0引言食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）是世界上常见的癌症之一,在中国居癌症死因的第四位[1-2]。食管鳞癌恶性程度高,病程进展迅速,易复发和转移,预后极差。早期食管癌无明显特异性症状,确诊时大多数已经发展为中晚期,手术效果差,5年生存率极低,

肝纤维化相关基因C16orf54的克隆及表达

目的制备人类功能未知基因C16orf54重组蛋白的多克隆抗体,为该基因功能研究奠定基础。方法分离纯化LX2细胞的总RNA,逆转录为cDNA,PCR扩增C16orf54基因的目的片段,构建重组蛋白表达质粒,转化大肠杆菌BL21,制备C16orf54重组蛋白。鉴定表达正确后,利用纯化的C16orf54重组蛋白免疫新西兰大白兔,获得抗C16orf54重组蛋白的多克隆抗体。利用制备的多克隆抗体,采用免疫组织化学技术观察该蛋白在肝细胞内的表达特征。结果 Western blot及生物质谱技术分析证实,重组蛋白表达正确。所制备的多克隆抗体效价>1:320 000,Western blot分析显示,多克隆抗体的特异性良好。免疫组织化学分析显示,该蛋白主要表达于肝实质细胞周围,呈膜型和浆型分布;胃黏膜下组织细胞弱表达。结论 C16orf54多克隆抗体被成功制备。C16orf54主要表达于肝实质细胞周围及胃黏膜下基底层细胞。

食管癌rs13042395位点SNP与C20orf54基因启动子甲基化相关性分析

目的探讨食管鳞状细胞癌患者C20orf54基因rs13042395位点单核苷酸多态性(SNP)与基因启动子甲基化及其蛋白表达之间的关系。方法收集40例食管鳞状细胞癌患者癌组织及配对癌旁组织,利用亚硫酸氢盐PCR测序法(Bisulfite genomie sequencing PCR,BSP)检测组织中C20orf54基因甲基化水平,免疫组织化学法检测蛋白表达水平;同时收集上述40例患者及40例健康对照人群静脉血,运用基质辅助激光解析电离时间飞行质谱(MALDI-TOF-MS)技术检测C20orf54单核苷酸多态性。结果 C20orf54基因启动子区12个CpG位点中7个呈现出甲基化改变,甲基化率为58.33%。食管癌组织C20orf54蛋白低表达组甲基化阳性率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。C20orf54基因rs13042395位点C/T多肽中CC、CT、TT基因型及等位基因在食管癌和对照人群中分布差异无统计学意义(P>0.05)。食管癌患者C20orf54基因rs13042395位点携带C等位基因的CC基因型患者甲基化水平(69.6%)明显高于携带T等位基因的CT/TT基因型(35.3%),差异有统计学意义(P<0.05)。CC基因型患者C20orf54蛋白表达水平低于CT/TT基因型患者,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论食管鳞状细胞癌患者中C20orf54基因启动子区甲基化水平明显升高,rs13042395位点SNP与基因甲基化有相关性,携带C等位基因可能是食管癌患者C20orf54基因发生甲基化的危险因素。

核黄素对食管癌预防和治疗作用的研究

核黄素缺乏是导致食管癌发生的主要危险因素之一,补充核黄素可以有效降低食管癌发病风险,但这一作用存在明显个体差异,从而限制了核黄素补给在食管癌变预防和治疗中的应用。食管癌全基因组关联分析发现核黄素转运基因C20orf54是食管癌的重要易感基因之一,后者对核黄素有效转入细胞内起重要作用,提示C20orf54基因变异可能是导致补充核黄素预防食管癌存在个体差异的主要原因,对补充核黄素预防和治疗食管癌变提供理论指导。核黄素缺乏(环境因素)和基因变异(遗传因素)对食管癌发生的影响进一步揭示食管癌的发生是内因和外因交互作用的结果。

国产水痘减毒活疫苗关键基因的序列分析和比较

目的从基因水平分析国产水痘减毒活疫苗的安全性和一致性。方法对国内4家企业生产的水痘减毒活疫苗的关键基因(ORF38、ORF54和ORF62)进行PCR扩增和序列测定,并与Genbank公布的Dumas、P-Oka、V-Oka及国外上市疫苗Varilrix(GSK)、Varivax(Merck)的序列进行比对。结果 4家国产水痘减毒活疫苗的ORF38和ORF54区基因序列一致,并且同V-Oka、Varilrix完全一致,与Varivax(Merck)有1处差异。4家国产水痘减毒活疫苗的ORF62区基因序列基本一致,与V-Oka、Varilrix(GSK)和Varivax(Merck)均存在个别核苷酸差异。结论 4家国产水痘减毒活疫苗的ORF38、ORF54和ORF62区基因序列基本一致,稳定性较好,与V-Oka、Varilrix(GSK)和Varivax(Merck)存在较小差异,没有引入新的突变位点。