肺炎支原体ORF6区蛋白重组抗原制备及在血清学诊断中的初步应用

目的本文应用肺炎支原体ORF6区重组抗原建立酶联免疫吸附实验(ELISA),用于检测肺炎支原感染者IgM抗体。方法通过已构建的质粒表达重组蛋白,用电洗脱法纯化后建立ELISA试验,并检测临床标本224份,与国外2种商品化试剂盒检测结果对照,初步考核检测方法的敏感性和特异性。结果与进口试剂盒相比阳性率基本相符,统计分析无显著差异。结论研究建立的间接ELISA方法特性强、敏感度高,为试剂盒的研制与开发奠定了基础。

肺炎支原体ORF6区基因的克隆与表达

目的表达肺炎支原体ORF6区基因,探索其作为诊断抗原的可能性。方法采用PCR方法,从肺炎支原体FH株基因组中扩增ORF6区基因,用TA克隆的方法克隆该片断,并以该重组质粒为模板,扩增ORF6区基因,此扩增产物经过双酶切后克隆到表达载体pET-32a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后采用SDS-PAGE和Western-blotting检测重组质粒目的蛋白的表达结果。结果获得肺炎支原体ORF6区基因长为1003bp的DNA片段,SDS-PAGE检测表达产物,在相对分子量56.8kDa处有阳性表达条带。免疫印迹显示,该蛋白带能与肺炎支原体阳性血清反应。结论ORF6区基因在大肠杆菌中获得高效表达,重组蛋白具有免疫反应性。