猪圆环病毒2型ORF9蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备

为了鉴定并深入研究ORF9蛋白在猪圆环病毒2型感染中的作用,本研究制备了小鼠抗ORF9蛋白多克隆抗体并进行了初步应用。首先通过扩增克隆ORF9基因,构建原核表达质粒pET-32a(+)-PCV2-ORF9并转化至BL21(DE3)感受态细胞中,再利用SDS-PAGE对可能影响ORF9蛋白表达效果的因素(温度、IPTG浓度、时间)进行优化研究,随后将重组蛋白经纯化复性后免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,用ELISA测定小鼠多抗效价,并用IFA和Western-blot方法对抗ORF9多克隆抗体特异性进行研究。结果显示,重组质粒p ET-32a(+)-PCV2-ORF9构建成功;ORF9重组蛋白在IPTG浓度为0.1 mmol/L、37℃条件下诱导4 h表达量最高,且主要以包涵体形式表达,分子量大小约24.2 ku;经ELISA检测制备的多抗效价为1∶6 400;IFA和Western-blot试验结果均证明ORF9蛋白能被PCV2阳性血清和小鼠多克隆抗体特异性识别。本研究成功表达并纯化了具备抗原性的PCV2 ORF9重组蛋白,制备的特异性抗PCV2 ORF9多克隆抗体为探究ORF9蛋白在PCV2感染中的作用奠定了基础材料。

C9orf72蛋白介导的自噬在脑缺血预处理诱导脑缺血耐受中的作用

缺血性卒中是一种高发病率的多因素疾病,致死率和致残率较高。脑缺血预处理(cerebral ischemic preconditioning, CIP)可以通过激活内源性保护效应来保护神经元免受后续的严重缺血性损伤,建立脑缺血耐受。自噬是衰老损伤细胞自我降解和回收细胞内成分的过程。适度激活自噬有利于促进细胞生存和维持细胞稳态,适当地激活溶酶体-自噬功能对建立脑缺血耐受至关重要,适度上调自噬可以改善缺血性损伤,提示自噬-溶酶体系统是缺血性脑卒中的潜在治疗靶点。C9orf72是一种与膜转运和细胞自噬有关的基因,研究揭示,C9orf72蛋白可作为Rab1a效应子与起始复合物ULK1相互作用参与自噬起始的调节,或与 Smith-Magenis 综合征染色体区域 8 (SMCR8) 和含有 WD 重复序列的蛋白 41 (WDR41) 构成一种蛋白复合体调节自噬。本文探讨了C9orf72蛋白可能通过影响自噬参与脑缺血耐受的建立和脑缺血损伤的修复。