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猪圆环病毒2型ORF2基因在昆虫细胞中的表达及其特性
被引量:
12
1
作者
樊惠英
陈焕春
+3 位作者
佟铁铸
琚春梅
吕建强
黄红亮
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第6期975-978,共4页
利用BactoBac杆状病毒表达系统将圆环病毒2型的ORF2全基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBacTM1中,获得重组转移载体pFastOFR2,再将其转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,发生转座作用,经蓝白菌落筛选得到含ORF2基因的重组穿梭...
利用BactoBac杆状病毒表达系统将圆环病毒2型的ORF2全基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBacTM1中,获得重组转移载体pFastOFR2,再将其转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,发生转座作用,经蓝白菌落筛选得到含ORF2基因的重组穿梭载体Bac.ORF2,以脂质体介导的方法将重组穿梭载体转染sf9细胞,获得重组病毒,命名为Ac.ORF2。间接免疫荧光分析表明,PCV2阳性血清能使Ac.ORF2感染的sf9昆虫细胞呈强的荧光着色;SDSPAGE与Westernblotting分析可见大小约为28kD的特异性带,表明Ac.ORF2在sf9细胞中成功表达了PCV2ORF2蛋白。将该表达蛋白纯化并经磷钨酸负染后,通过电镜观察可见形态与PCV2病毒粒子相似的病毒样颗粒(VLPs),其中某些颗粒由于中心浓染而似空衣壳,其直径也为17nm左右。
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关键词
猪圆环病毒
2
型
orp2蛋白
昆虫细胞表达
病毒样颗粒
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职称材料
题名
猪圆环病毒2型ORF2基因在昆虫细胞中的表达及其特性
被引量:
12
1
作者
樊惠英
陈焕春
佟铁铸
琚春梅
吕建强
黄红亮
机构
华中农业大学动物医学院动物病毒室
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第6期975-978,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30170701)。~~
文摘
利用BactoBac杆状病毒表达系统将圆环病毒2型的ORF2全基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBacTM1中,获得重组转移载体pFastOFR2,再将其转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,发生转座作用,经蓝白菌落筛选得到含ORF2基因的重组穿梭载体Bac.ORF2,以脂质体介导的方法将重组穿梭载体转染sf9细胞,获得重组病毒,命名为Ac.ORF2。间接免疫荧光分析表明,PCV2阳性血清能使Ac.ORF2感染的sf9昆虫细胞呈强的荧光着色;SDSPAGE与Westernblotting分析可见大小约为28kD的特异性带,表明Ac.ORF2在sf9细胞中成功表达了PCV2ORF2蛋白。将该表达蛋白纯化并经磷钨酸负染后,通过电镜观察可见形态与PCV2病毒粒子相似的病毒样颗粒(VLPs),其中某些颗粒由于中心浓染而似空衣壳,其直径也为17nm左右。
关键词
猪圆环病毒
2
型
orp2蛋白
昆虫细胞表达
病毒样颗粒
Keywords
porcine circovirus type
2
, ORF
2
protein, expression in insect cell, VLPs
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪圆环病毒2型ORF2基因在昆虫细胞中的表达及其特性
樊惠英
陈焕春
佟铁铸
琚春梅
吕建强
黄红亮
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005
12
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