三七总皂苷通过阻断Notch1通路抑制U2OS骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和迁移并促进其凋亡

目的探讨三七总皂苷(PNS)对U2OS人骨肉瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭迁移生物学行为的影响及机制。方法培养U2OS人骨肉瘤细胞,采用(0、200、400、600、800、1000)μg/mL PNS处理细胞后,CCK-8法检测骨肉瘤细胞的增殖,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡,集落形成实验检测细胞的集落形成能力,TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭、TranswellTM迁移实验和划痕愈合实验检测细胞迁移;Western blot法检测U2OS细胞缺刻基因1(Notch1)、发状分裂增强子1(Hes1)的蛋白表达。结果与对照组相比,PNS可以呈剂量依赖性抑制U2OS细胞的增殖与集落形成,细胞凋亡率增加,细胞侵袭、迁移能力减弱,细胞Notch1及Hes1的蛋白水平降低。结论PNS通过阻断Notch1的信号通路抑制U2OS骨肉瘤细胞的增殖、侵袭、迁移并促进其凋亡。

HTLV-1病毒蛋白Tax对U-2 OS骨肉瘤细胞有丝分裂的影响

目的研究人1型T淋巴细胞白血病病毒(HTLV-1)所编码的病毒蛋白Tax对骨肉瘤细胞生长周期的影响。方法通过构建慢病毒表达载体在人骨肉瘤细胞株U-2 OS中表达Tax;荧光显微镜检测表达Tax所引起的骨肉瘤细胞形态和细胞分裂的变化;流式细胞方法分析表达Tax对骨肉瘤细胞周期产生的影响。结果与亲本骨肉瘤细胞比较,表达Tax的骨肉瘤细胞形态由正常的椭圆形转化为长梭形;出现了胞质分裂异常;有双核或多核细胞形成;细胞的生长周期在G2/M期发生了停滞。结论 Tax的表达破坏了骨肉瘤细胞有丝分裂的胞质分裂过程,造成异倍体现象的出现,使细胞停滞在有丝分裂的晚期。这或许是HTLV-1感染导致正常细胞转化为癌细胞的原因之一。

人参皂苷对人体骨肉瘤细胞U_2OS增殖的影响

目的 为寻找人参中抑制骨肉瘤细胞增殖的活性成分。方法 采用细胞计数法检测了 2 7种从人参中得到的单体化合物对体外培养的人体骨肉瘤细胞 U2 OS增殖的影响 ;以流式细胞术分析 DNA含量 ,选择有抑制肿瘤细胞增殖作用的化合物对肿瘤细胞的细胞增殖周期的变化进行研究 ;另外 ,以荧光染色法检测了人参皂苷对细胞死亡率变化的影响。结果 对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用研究表明 ,在 5 μmol/ L 浓度下 ,人参皂苷 - Ro,- Rh1 ,- Rh2 ,- F1 和 - L8较明显地抑制了肿瘤细胞的增殖 ,人参皂苷 - Rg1 ,- F3,- Rf,PPT和 PT显著地抑制了肿瘤细胞的增殖 ;进一步对骨肉瘤细胞有抑制作用的化合物检测其对细胞增殖周期影响发现 :人参皂苷 - Ro,- Rf,- Rg1 ,- F1 ,- Rh2 ,PPT和 PT使处于 G0 / G1 期的细胞数目明显增多 ,伴随着 S期和 G2 + M期的细胞明显减少 ,说明这些化合物抑制了肿瘤细胞增殖周期的进行 ;与对照相比人参皂苷 - Rf1 ,- Rg1 ,- F1 和 PPT显著地促进了肿瘤细胞的细胞死亡现象。结论人参皂苷是通过阻止细胞增殖周期的 G0 / G1 期或促使细胞死亡两种方式抑制了肿瘤细胞 U2

中药片仔癀胶囊对骨肉瘤U-2OS细胞诱导凋亡的作用

目的:研究中药片仔癀对骨肉瘤U-2OS细胞的诱导凋亡作用。方法:①采用1月龄SD大鼠16只,雌雄各半,体重120g左右,随机分为2组(空白血清组和片仔癀治疗组),每组8只。空白血清组大鼠灌服PBS,片仔癀治疗组大鼠灌服中药片仔癀溶液。②人骨肉瘤U-2OS细胞培养于含10%胎牛血清,青霉素100IU/ml,链霉素100μg/ml的RPMI1640培养液中,置于37℃、5%CO2饱和湿度的细胞培养箱中培养。用MTT法检测不同含药血清浓度对骨肉瘤U-2OS细胞增殖的影响,筛选对骨肉瘤U-2OS细胞作用最佳的片仔癀含药血清浓度。③在倒置相差显微镜和电镜下观察骨肉瘤U-2OS细胞形态。④TUNEL原位末端标记法检测细胞的凋亡。⑤提取基因DNA,琼脂糖凝胶电泳,以DNA琼脂糖凝胶电泳和透射电镜检测细胞凋亡。结果:①20%片仔癀含药血清对骨肉瘤细胞的增殖抑制作用最佳。②倒置相差显微镜观察可见空白血清组细胞呈梭形贴壁生长,在20%片仔癀胶囊含药血清组,可见部分细胞体积变小、变圆,细胞膜完整但出现发泡现象,折光性增强。随作用时间延长,变圆细胞逐渐增多,部分贴壁细胞皱缩、变圆、脱落,可见坏死细胞及碎片。③20%片仔癀胶囊含药血清组TUNEL检测阳性。④DNALadder电泳结果:含药血清组细胞基因DNA凝胶电泳出现明显的梯状带。⑤透射电镜观察染色质沿皱缩的核膜下凝聚,细胞表面出现凋亡小体。结论:中药片仔癀胶囊对骨肉瘤U-2OS细胞有抑制增殖和诱导凋亡作用。

葡萄籽提取物对人骨肉瘤U2OS细胞抑制作用及机制的研究

目的探讨葡萄籽提取物(GSE)对人骨肉瘤U2OS细胞的抑制作用及其作用机制。方法选用不同浓度的GSE作用于骨肉瘤U2OS细胞,MTT法检测其生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Transwell迁移实验检测细胞迁移能力;实时RT-PCR和Western blot检测CDC20mRNA和蛋白的表达水平。结果 MTT结果显示GSE对人骨肉瘤U2OS细胞的生长抑制作用呈浓度依赖性;流式细胞术显示GSE具有诱导U2OS细胞凋亡的作用;Transwell实验显示GSE可以抑制U2OS细胞的迁移作用;RT-PCR和Western blot结果显示GSE可以下调CDC20mRNA和蛋白的表达水平。结论 GSE具有抑制骨肉瘤U2OS细胞生长及迁移、诱导细胞凋亡的作用。GSE对骨肉瘤细胞的抑制作用可能与下调CDC20表达有关。

八宝丹对骨肉瘤细胞U-2OS的抑制增殖和诱导凋亡实验研究

目的:探讨八宝丹(BBD)对骨肉瘤U-2OS细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法:应用形态学观察、Ki-67染色、MTT实验检测八宝丹对细胞增殖的抑制,原位末端标记、电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测细胞凋亡。结果:MTT实验显示八宝丹抑制U-2OS细胞的增殖呈时间、浓度依赖的方式,实验组Ki-67指数降低,TUNEL检测阳性,琼脂糖凝胶电泳出现DNA的片段化,流式细胞仪可以检测到凋亡峰,随着作用时间延长和浓度增加,凋亡率增高;电镜观察染色质沿皱缩的核膜下凝聚,细胞表面出现凋亡小体。结论:八宝丹对骨肉瘤细胞U-2OS有抑制增殖和诱导凋亡作用,其作用表现出时间和剂量依赖关系。

siRNA沉默ERK-1基因对骨肉瘤细胞U-2OS基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的研究ERK-1基因对骨肉瘤细胞U-2OS基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达及细胞迁移侵袭的影响,探讨ERK-1基因在骨肉瘤细胞侵袭过程中的作用机制。方法通过siRNA技术沉默骨肉瘤细胞U-2OS中ERK-1基因表达,采用RT-PCR和Western blot分别检测空白对照组、阴性对照组、siRNA沉默组中ERK-1、MMP-9的mRNA水平和蛋白水平,Transwell细胞迁移和侵袭能力实验,验证细胞迁移和侵袭能力。结果骨肉瘤细胞U-2OS转染ERK-1 siRNA后,ERK-1、MMP-9在mRNA和蛋白水平的表达受到明显抑制,细胞迁移和侵袭能力显著下降。结论 ERK-1可通过诱导细胞发生MMP-9的表达来促进骨肉瘤细胞U-2OS侵袭和转移。

Notch-1下调对双氢青蒿素抗人骨肉瘤细胞株U-2OS存活率的影响

目的:探讨Notch-1下调对双氢青蒿素抗人骨肉瘤细胞株U-2OS细胞存活率的影响及其作用机制。方法:双氢青蒿素(5、10、15和20μmol/L)孵育U-2OS细胞后,采用免疫印迹和实时荧光定量聚合酶链反应检测骨肉瘤细胞中Notch-1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和Notch-1通路下游基因Hes-1的蛋白和mRNA的表达水平。下调Notch-1表达后,采用MTT法、免疫印迹法和细胞迁移实验检测在双氢青蒿素作用下U-2OS细胞的存活率,MMP-2、MMP-9和Hes-1的蛋白表达以及U-2OS细胞的迁移能力。结果:免疫印迹法与逆转录聚合酶链反应结果显示双氢青蒿素呈剂量依赖性降低U-2OS细胞中Notch-1、MMP-2、MMP-9和Hes-1的蛋白和mRNA的表达水平(P<0.05);下调Notch-1表达后,增强了双氢青蒿素抑制U-2OS细胞生长的作用,MMP-2、MMP-9和Hes-1的蛋白表达及细胞迁移能力进一步降低,显著低于加药组(P<0.05)。结论:双氢青蒿素可抑制U-2OS细胞中Notch-1通路的活性;下调Notch-1的表达可增强双氢青蒿素抗骨肉瘤的作用。

硫化氢抑制骨肉瘤U2OS细胞的体外生长

【目的】探讨硫化氢单独及与顺铂联用对骨肉瘤细胞生长的影响及其可能机制。【方法】分别用0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mmol/L NaHS(硫化氢载体)单独或与20 mg/L顺铂共同作用骨肉瘤U2OS细胞24 h,CCK-8比色法法检测细胞存活率;分别用0.4及1.0 mmol/L NaHS作用骨肉瘤U2OS细胞24 h,1.0 mmol/L NaHS单独或与20 mg/L顺铂联用作用骨肉瘤U2OS细胞24 h,细胞单克隆形成法检测各组单克隆数;1.0 mmol/L NaHS与20 mg/L顺铂共同作用骨肉瘤U2OS细胞24 h,Western-Blot法检测Bcl-2、Bax、NFκB蛋白的表达。【结果】硫化氢对U2OS细胞生长的影响:0.2、0.4、0.6、0.8 mmol/L NaHS作用U2OS细胞24 h,细胞存活率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);1、2、3、4、5 mmol/L NaHS作用U2OS细胞24 h,细胞存活率分别为(90.01±7.49)%、(88.00±4.12)%、(87.26±4.05)%、(85.40±4.39)%和(82.99±4.65)%,与对照组比较,能不同程度抑制U2OS细胞的生长(P<0.05)。0.4 mmol/L NaHS组、1 mmol/L NaHS组细胞单克隆数分别为445.00±25.00、306.00±17.69,与对照组(464.33±8.32)比较,1 mmol/L NaHS组细胞单克隆数减少(P<0.01);0.4mmol/L NaHS组差异无统计学意义(P>0.05)。NaHS与顺铂联用对骨肉瘤细胞的影响:分别用0.8、1、2、3、4、5 mmol/L NaHS联合20 mg/L顺铂共同作用U2OS细胞24 h,细胞存活率分别为(54.13±4.03)%、(54.09±1.13)%、(50.37±4.56)%、(41.44±3.95)%、(40.00±4.34)%和(36.35±3.90)%,与单用顺铂组(59.76±3.15%)比较,存活率下降(P<0.05)。NaHS+顺铂组细胞单克隆数为231.00±13.52,与顺铂组(285.67±11.59)比较,细胞单克隆数下降(P<0.01);NaHS+顺铂组NFκB蛋白表达及Bcl-2/Bax蛋白表达比值较顺铂组下降。【结论】1 mmol/L浓度以上的NaHS能抑制骨肉瘤细胞的生长,0.8 mol/L浓度以上的NaHS通过减少NFκB入核,增加细胞的凋亡,从而增强顺铂对骨肉瘤细胞的抑制作用。

华蟾素联合紫杉醇对骨肉瘤U_(2)OS细胞抑制作用的研究

目的:探讨华蟾素联合紫杉醇对人骨肉瘤细胞增殖的抑制作用及机理。方法:体外培养人骨肉瘤U_(2)OS细胞,按照实验设计分为对照组、华蟾素组、紫杉醇组、华蟾素联合化疗药组,每组在不同实验条件下按不同时间点(24,48,72h)进行检测。MTT法检测各组骨肉瘤细胞生长的抑制率,TUNEL染色观察细胞凋亡程度并计算其凋亡率,免疫荧光染色检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的含量并计算其比值,RT-PCR、Western Blot法检测凋亡相关及Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达。结果:MTT结果显示,华蟾素联合化疗药组细胞生存率明显降低,该组细胞被药物作用48h后生存率是(24.58±1.65)%,相当于紫杉醇组同期(40.85±1.34)%的1/2(P<0.01)。TUNEL染色显示,与作用于细胞24,48h相比,作用72h后凋亡率达到(60.35±1.57)%,凋亡率明显增加(P<0.01)。免疫荧光、RT-PCR及Western Blot法结果提示,随着药物作用时间的延长,华蟾素联合化疗药组Bax的表达逐渐增加,而Bcl-2的表达逐渐减少,Bax/Bcl-2含量的比值也逐渐增加。同时,Wnt/β-catenin通路关键蛋白β-catenin、caspase-3的表达也逐渐增加。结论:华蟾素具有抑制骨肉瘤U2OS细胞增殖和诱导其凋亡的作用,其联合化疗药在疗效上呈时间依赖性,而其机制可能与激活Wnt/β-catenin通路相关。

含锌镁合金对人成骨肉瘤U2OS细胞株体外增殖的影响

背景:合金化可提高纯镁的抗腐蚀性能,延缓其降解速率;大量文献表明锌具有良好的抗肿瘤效果。目的:评价含锌镁合金对人成骨肉瘤U2OS细胞体外增殖及凋亡的影响。方法:检测纯镁及不同含锌量镁合金(质量分数2%、4%、6%)在Hank’s液中的氢气释放速率。取人成骨肉瘤U2OS细胞(或MC3T3-E1细胞),分别与不同含锌量镁合金浸提液、纯镁浸提液及钛合金浸提液共培养1,3,5 d,MTT法检测细胞增殖。取人成骨肉瘤U2OS细胞,分别与不同含锌量镁合金浸提液、纯镁浸提液及钛合金浸提液共培养24 h,流式细胞仪分析细胞凋亡,Western Blotting检测凋亡相关蛋白的表达水平。结果与结论:①在初始的100 h内,纯镁组氢气释放速率明显高于含锌镁合金组;在不同含锌量镁合金组中,以含锌量4%镁合金组氢气释放速率最慢;②不同含锌量镁合金均可明显抑制人成骨肉瘤U2OS细胞的增殖,且与锌含量呈正相关;不同含锌量镁合金对MC3T3-E1细胞的毒性在0至1级之间;③不同含锌量的镁合金可明显促进人成骨肉瘤U2OS细胞的凋亡,且与锌含量呈正相关;④不同含锌量镁合金可上调人成骨肉瘤U2OS细胞p53、Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,改变Bcl-2/Bax比例,其中以含锌量4%镁合金效果最显著;⑤结果表明:含锌镁合金可抑制人成骨肉瘤U2OS细胞的体外增殖,诱导其凋亡。

蜂毒素对人成骨肉瘤细胞体外增殖抑制作用的机制探讨

目的:探讨蜂毒素对人成骨肉瘤U2OS细胞体外增殖抑制作用的机制。方法:通过MTT法检测蜂毒素对骨肉瘤U2OS细胞的增殖抑制率,倒置显微镜下观察细胞生长状态,免疫细胞化学法检测PCNA表达变化,流式细胞仪检测细胞周期,透射电镜观察细胞超微结构变化。结果:蜂毒素能明显抑制U2OS细胞增殖,下调PCNA表达,造成S期细胞堆积。经蜂毒素处理后的U2OS细胞,在透射电镜下见染色质边集,有凋亡小体出现。结论:蜂毒素能够抑制骨肉瘤U2OS细胞增殖,其作用机制可能与其下调PCNA表达,将细胞周期阻滞于S期以及诱导细胞凋亡的作用有关。

华蟾酥毒基诱导人骨肉瘤细胞U-2OS凋亡的实验研究

目的:观察华蟾酥毒基对人骨肉瘤细胞U-2OS增殖和凋亡的影响,从而探讨华蟾酥毒基诱导骨肉瘤凋亡的可能机制。方法:应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测华蟾酥毒基对人骨肉瘤细胞U-2OS增殖的影响;应用流式细胞术检测华蟾酥毒基及华蟾酥毒基联合泛Caspase抑制剂Z-VAD-FMK对人骨肉瘤细胞U-2OS细胞凋亡的影响;应用蛋白质印迹法检测华蟾酥毒基对凋亡通路相关蛋白表达的影响。结果:四甲基偶氮唑蓝比色法实验结果表明,华蟾酥毒基以时间和浓度依赖的方式抑制U-2OS细胞生长。流式细胞术结果显示,100 n M华蟾酥毒基干预后,U-2OS细胞凋亡率为(46.87±11.23)%,但当华蟾酥毒基与泛Caspase抑制剂Z-VAD-FMK共同干预后,细胞凋亡率仅为(2.34±0.98)%,与空白对照组及华蟾酥毒基联合Z-VADFMK组相比,华蟾酥毒基能显著提高细胞凋亡率(P<0.01)。蛋白质印迹法结果显示,华蟾酥毒基能够显著提高促凋亡蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-8、Cleaved Caspase-9的表达。结论:华蟾酥毒基对人骨肉瘤细胞U-2OS的生长有显著抑制作用,并能够促使肿瘤细胞凋亡,其作用机制可能与激活Caspase依赖的凋亡途径有关。

华蟾酥毒基对人骨肉瘤细胞U-2OS凋亡的影响及作用机制研究

目的通过观察华蟾酥毒基对人骨肉瘤细胞U-2OS凋亡的影响,探讨其诱导细胞凋亡的可能机制。方法以人骨肉瘤细胞株U-2OS作为实验细胞,MTT法检测采用10、20、50、100、200、400 nmol/L华蟾酥毒基培养24、48、72 h后细胞增殖情况,以单纯U-2OS细胞作为对照组;流式细胞仪检测分别采用100 nmol/L华蟾酥毒基(实验组)及100 nmol/L华蟾酥毒基联合泛半胱氨酸蛋白酶(Caspase)抑制剂Z-VAD-FMK(对照组)培养48 h后细胞凋亡情况,以单纯U-2OS细胞作为空白对照组;用Caspase-3活性检测试剂盒检测20、50、100 nmol/L华蟾酥毒基培养48 h后对细胞Caspase-3活性的影响,以单纯U-2OS细胞作为对照组;Western blot法检测20、50、100 nmol/L华蟾酥毒基培养48 h后对细胞凋亡通路相关蛋白(cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、Bcl-2、Bax)表达的影响,以单纯U-2OS细胞作为对照组。结果 MTT法检测示,同一时间点细胞存活率随华蟾酥毒基浓度增加而显著降低,同一浓度组细胞存活率随时间延长亦显著下降,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测显示,实验组细胞凋亡率为46.87%±11.23%,显著高于对照组的2.34%±0.98%及空白对照组的1.04%±0.25%(P<0.05)。20、50、100 nmol/L组Caspase-3活性分别为1.14±0.32、1.31±0.41、1.92±0.54,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);100 nmol/L组与20、50 nmol/L组比较,差异亦有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测结果显示,与对照组相比,各浓度组促凋亡蛋白cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、Bax均显著上调,抗凋亡蛋白Bcl-2下调,Bax/Bcl-2提高,差异均有统计学意义(P<0.05);各浓度组随浓度增加也呈相同变化趋势,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论华蟾酥毒基可抑制人骨肉瘤细胞U-2OS的增殖,促使细胞凋亡;其作用机制可能与线粒体介导的凋亡途径有关。

肌醇六磷酸对人骨肉瘤U2OS细胞的体外抑制作用

目的探讨肌醇六磷酸体外对人骨肉瘤U2OS细胞的影响及其机制。方法通过检测细胞增殖活性、超微扫描电镜观察、荧光染色法检测细胞凋亡及c-myc蛋白表达来研究肌醇六磷酸对U2OS细胞的影响。结果肌醇六磷酸能够抑制人骨肉瘤细胞U2OS的增殖,扫描电镜观察可见细胞表面超微结构发生凋亡改变,荧光显色证实肌醇六磷酸能够促细胞凋亡,c-myc蛋白的表达降低。结论肌醇六磷酸在体外对人骨肉瘤U2OS细胞增殖的抑制机制可能与诱导细胞凋亡及调控c-myc蛋白表达相关。

白芦藜醇对骨肉瘤细胞U-2OS增殖和凋亡的影响及其分子机制

目的观察白芦藜醇(resveratrol,Res)对骨肉瘤细胞U-2OS增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞U-2OS,用不同浓度的Res(5、10、20、40、80μmol/L)作用不同时间(24、48、72 h)后,MTT法检测Res对U-2OS细胞增殖活力的影响;流式细胞术检测Res对细胞周期和凋亡的影响;应用Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3酶活性;Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2和Caspase 3蛋白的表达水平。结果 Res作用24 h时,与空白对照组及DMSO组比较,20和40μmol/L Res组的细胞增殖抑制率、G0/G1和G2/M期的细胞比例、细胞凋亡率、Caspase-3酶活性显著升高(P<0.05),S期细胞比例显著降低(P<0.05);20μmol/L Res组U-2OS细胞中Bax和Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论 Res通过诱导提高Caspase-3酶活性,上调促凋亡基因Bax、Caspase-3及下调抗凋亡基因Bcl-2蛋白的表达水平,从而抑制U-2OS细胞的增殖,促进其凋亡,为Res治疗骨肉瘤提供了实验依据。

骨肉瘤细胞中Plk1的表达和定位

目的构建真核表达载体GFP-hPlk1并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法以pcDNA3.1-hPlk1为模板,利用聚合酶链反应扩增hPlk1基因的cDNA全长,并将其克隆至pEGFP-C1真核表达载体中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到U2OS骨肉瘤细胞中,提取细胞总蛋白进行Western blot检测。同时利用激光共聚焦扫描显微镜观察GFP-hPlk1在U2OS细胞中的定位,免疫沉淀的方法纯化hPlk1蛋白。结果 hPlk1基因cDNA全长成功构建到真核表达载体pEGFP-C1中,Western blot检测到了GFP-hPlk1融合蛋白表达,分子质量Mr约为93 000Da。GFP-hPlk1在骨肉瘤细胞U2OS中主要定位于细胞质和核周,并成功纯化hPlk1蛋白。结论成功地构建了GFP-hPlk1真核表达质粒,并在骨肉瘤细胞U2OS中表达。

槲皮素对人骨肉瘤细胞放射增敏作用研究

目的:探讨槲皮素联合X射线对人骨肉瘤U-2OS细胞增殖及细胞凋亡的影响,了解槲皮素对人骨肉瘤U-2OS细胞是否具有放射增敏作用。方法:选取人骨肉瘤U-2OS细胞作为研究对象,将细胞分为对照组、单独槲皮素处理组、单独放射处理组、槲皮素与放射联合处理组。CCK-8法检测了不同浓度槲皮素处理细胞不同时间对细胞活性的影响,并检测了槲皮素结合不同放射剂量对细胞活性的影响;利用倒置显微镜观察每组细胞的形态变化;应用hoechst33258染色技术和流式细胞仪检测槲皮素结合射线对细胞凋亡的影响。结果:槲皮素能显著抑制人骨肉瘤细胞的活性,且浓度越大、作用时间越长抑制作用越强;细胞形态观察发现单独放射处理组细胞形态与空白对照组相似,单独14u M槲皮素处理组和14u M槲皮素与4Gy放射线联合处理组均引起细胞皱缩变圆,但14u M槲皮素与4Gy放射线联合处理组更加明显;细胞核染色结果和流式细胞仪检测发现14u M槲皮素与4Gy放射线联合作用引起细胞凋亡。结论:槲皮素联合射线对人骨肉瘤细胞增殖有抑制作用,且具有浓度依赖性。槲皮素能够作为一种有效的放射增敏药物提高人骨肉瘤细胞的放射敏感性,其杀伤细胞的方式为凋亡。

黄芩素与黄芩苷的体外抗骨肉瘤作用的比较

目的探讨黄芩素与黄芩苷对骨肉瘤细胞系U2OS和U2OS/MTX300生长抑制和诱导凋亡的作用,并比较两者间的差别。方法应用MTT比色法,测定黄芩素与黄芩苷对U2OS和U2OS/MTX300细胞株增殖的影响,检测其抑制骨肉瘤细胞的时间、剂量效应;应用形态学观察,测定黄芩素对U2OS和U2OS/MTX300细胞的凋亡作用,并进行细胞周期的分析。结果黄芩素对U2OS和U2OS/MTX300细胞的生长抑制及诱导凋亡的作用明显比黄芩苷强,且呈时间依赖和剂量依赖性。结论黄芩素在体外对骨肉瘤U2OS和U2OS/MTX300的抑制作用明显比黄芩苷强。