水稻半胱氨酸蛋白酶OsCP2的特征分析及其原核表达与纯化

半胱氨酸蛋白酶是植物体中重要的蛋白水解酶,广泛参与种子萌发、幼苗发育、胁迫响应和组织分化衰老等生理过程。我们对水稻中半胱氨酸蛋白酶基因OsCP2(Oryza sativa cysteine protease 2)序列进行分析。该基因cDNA全长2279bp,由2个外显子和1个内含子组成;包含1个1089bp的开放读码框,编码1个含362个氨基酸残基的蛋白,在蛋白氨基端有一36个氨基酸组成的信号肽。生物信息学分析表明,OsCP2与大麦半胱氨酸蛋白酶HvCP同源性最高,同属木瓜蛋白酶亚家族。另外,我们构建了pET32a/CP2原核表达载体,通过转化大肠杆菌BL21DE3,成功表达了OsCP2重组蛋白,分子量约为58kD;通过纯化包涵体获得了纯度高达90%以上的重组OsCP2蛋白,这为进一步研究该基因的功能提供了基础。

鼻咽癌下调新基因 NOR1相互作用蛋白的筛选和鉴定

NOR1基因是新的鼻咽癌相关基因,该基因在鼻咽癌细胞系HNE1和鼻咽癌组织中表达下调.在鼻咽癌细胞HNE1中恢复NOR1基因表达抑制了鼻咽癌细胞的生长和增殖能力.为了探讨NOR1基因的生物学功能,以NOR1基因为诱饵运用酵母双杂交技术在人胎脑文库中筛选其交互作用蛋白,挑选阳性克隆,进行DNA序列分析和同源检索,阳性克隆编码7个不同的蛋白质,其中一个阳性克隆编码线粒体ATP合成酶亚基OSCP蛋白.瞬时转染pCMV-myc-NOR1质粒进入鼻咽癌5-8F细胞,通过密度梯度离心法分离线粒体蛋白,Western blot检测表明myc-NOR1蛋白分布于线粒体与胞浆.免疫荧光检测表明在鼻咽正常上皮细胞NP69中内源性NOR1蛋白与线粒体存在明显共定位.随后采用特异性酵母双杂交、免疫荧光共定位、免疫共沉淀技术证实了NOR1与OSCP在线粒体内存在交互作用.提示,NOR1是一个新的线粒体蛋白,可能通过结合OSCP蛋白调控细胞能量代谢,为深入探讨其功能提供了重要线索.

水稻极矮突变体s2-47对赤霉素的响应及基因定位研究

通过EMS诱变日本晴获得1个极端矮化突变体s2-47,其表型为极度矮化、叶色深绿、不能抽穗结实。对水稻胚乳的α-淀粉酶诱导实验表明,s2-47突变体与GA的信号传导途径无关,外源活性GA3对水稻幼苗株高的促进实验显示s2-47应与赤霉素的生物合成有关。利用s2-47和Dular构建F2群体并精细定位表明,s2-47的表型与水稻OsCPS1基因紧密连锁,其编码的柯巴焦磷酸合成酶是赤霉素生物合成途径的第一个关键酶。序列分析发现,s2-47突变体的OsCPS1基因编码区发生了单个碱基缺失导致移码突变。OsCPS1基因在植株地上部都有表达,在节中表达最高。OsCPS1基因的表达受外源GA3抑制,但在s2-47突变体中表达上调。

一种开放式电子政务身份认证模型的研究

为解决传统电子政务身份认证模型所存在的诸如可实施性差、验证结果缺乏证明、低可信度等问题,设计一种开放式的电子政务身份认证模型,该模型中CA(Certificate Authority)中心独立进行2个验证服务,把传统的OCSP(Online Certificate Status Protocol)应答机制更改成提供身份证明文件的方式,能够较好地解决上述缺陷。利用云信任评估模型,量化评估这2种认证模型,验证提出的开放式身份认证模型的信任度有了较大提升。此外,对该模型进行原型实现,重点优化了其性能,实验表明该模型具备较好的实用价值。

Mg^（2＋）促进线粒体H~＋－ATP酶的重建机理──H~＋－ATP酶复合体亚基水平的研究

用专一性标记蛋白质巯基（－ＳＨ）的荧光探剂ａｃｒｙｌｏｄａｎ测定含Ｍｇ２＋的Ｆ０－ＡＴＰ酶或Ｆ０－ＯＳＣＰ－Ｆ１－ＡＴＰ酶的脂酶体的构象与无Ｍｇ２＋者明显不同，前者的蛋白质的－ＳＨ基团处于疏水性更强的微环境中；在有Ｍｇ２＋和ＯＳＣＰ同时存在下重建的Ｆ０－Ｆ１－ＡＴＰ酶脂酶体较无ＯＳＣＰ者表现更高的水解活力或膜电位，表明ＯＳＣＰ增强Ｍｇ２＋的促进作用，这进一步提示Ｍｇ２＋通过改变膜脂的物理状态促进线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶重建的间接作用。这些实验结果，从线粒体Ｈ＋－ＡＴＰ酶复合体的亚基水平的相关性上，对于我们提出的Ｍｇ２＋通过改变膜脂的物理状态使之具有合适的流动性，诱导嵌入脂双层的Ｈ＋－ＡＴＰ酶复合体的Ｆ０的构象发生变化并传递至复合体的催化中心Ｆ１，从而使重建Ｆ１－Ｆ０－ＡＴＰ酶具有较适合的蛋白构象，表现较高的重建酶活性的假设提供了直接的实验证据，精确地阐明了Ｍｇ２＋促进线粒体Ｆ０－Ｆ１－ＡＴＰ酶重建作用的分子机理。

颈部血管彩超结果与急性脑梗死OCSP分型的相关性研究

目的:探讨急性脑梗死患者牛津郡社区卒中研究(OCSP)分型结果与颈动脉彩超结果之间的相关性。方法:选取2017年1月-2020年1月本院所收治的急性脑梗死患者120例,按照OCSP分型标准将其分为不同亚型组,对不同亚型患者的颈动脉彩超结果进行对比分析,包括颈动脉狭窄情况、斑块大小、性质等。结果:完全前循环梗死(TACI)组患者的颈动脉狭窄程度≥91%所占比例明显高于部分前循环梗死(PACI)组、后循环梗死(POCI)组和腔隙性梗死(LACI)组,差异具有统计学意义(P<0.05);TACI组、PACI组患者斑块低、混合回声所占比例明显高于POCI组、LACI组,中等回声所占比例明显低于POCI组、LACI组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:颈部彩超检查可有效反映急性脑梗死患者的颈动脉狭窄程度和斑块性质,其中患者的动脉狭窄程度、斑块性质分布与OCSP亚型之间存在明显的相关性,可作为OCSP分型结果合理性的重要支撑。

8098单片机控制的普通示波器存储接口

介绍一种8098单片机控制的存储接口，配以普通示波器，即可实现超低频信号的存储和显示，并具有分析功能。

基于OCSP中间件的PKI/PMI时钟同步

PKI/PMI体系如果缺乏规范的时钟机制可能产生时钟不同步现象,因此,在可用性和安全性方面存在隐患。该文通过对在线证书状态协议(OCSP)及PMI认证特性的分析,提出一种基于OCSP中间件的时钟同步技术。应用该技术构建的身份认证与访问控制系统可以消除上述隐患,不会明显加重系统负担,或引入额外风险,适用于多数一般性的数字证书应用。