大鼠OSP-1启动子克隆与表达检测

[目的]克隆大鼠卵巢特异性启动子(OSP-1)片段,并在细胞水平检测该启动子调控标记基因的组织特异性表达。[方法]参考已知大鼠OSP-1序列设计特异性引物,PCR扩增大鼠OSP-1启动子片段并与已公布的大鼠OSP-1序列进行比较。将OSP-1启动子定向克隆到去除CMV的pEGFP-N1载体,构建真核表达载体pOSP-1-EGFP-N1;重组质粒在脂质体LipofectamineTM2000介导下,分别转染水牛的颗粒细胞、乳腺上皮细胞和胎儿成纤维细胞,并于转染后12,24和48h在荧光显微镜下观察EGFP表达情况。[结果]OSP-1启动子扩增片段长480bp,与已公布的大鼠OSP-1序列的相似性达96%;应用启动子预测软件对所得序列分析表明,该扩增片段含有类似于TA-TAbox和CAATbox的核心启动顺式元件,并含有多个C/EBPbeta转录因子的结合位点;在颗粒细胞转染后12h可观测到绿色荧光表达,转染后24h荧光细胞增多,细胞形态均呈圆形、体积较大,48h荧光细胞数量骤减,且死细胞增多;在乳腺上皮细胞和胎儿成纤维细胞均未检测到EGFP基因表达。[结论]大鼠OSP-1启动子控制下的EGFP基因可在水牛颗粒细胞中特异表达,为构建水牛卵巢特异性表达转基因载体奠定了基础。

OSP-1启动子在猪卵巢颗粒细胞中的转录活性研究

为获得能在猪卵巢颗粒细胞中高效表达的启动子,本文检测了大鼠卵巢特异性启动子OSP-1(Ovarian specific promoter)在猪卵巢颗粒细胞中的转录活性。参考大鼠OSP-1启动子序列扩增大鼠OSP-1片段,将其定向克隆到pc DNA3.1(+)中替代CMV启动子,并在其下游插入Zs GREEN基因片段,构建真核表达载体p OSP-1-Zs GREEN;重组质粒在脂质体LipofectamineTM2000的介导下转染不同细胞,在荧光显微镜下观察Zs GREEN表达情况,Realtime-RT-PCR方法检测该启动子在不同细胞中启动Zs GREEN基因表达的活性。结果表明:经克隆测序,得到了465bp OSP-1启动子序列,重组质粒转染卵巢颗粒细胞、Hela细胞可以观察到绿色荧光。Realtime-RT-PCR结果显示:Zs GREEN基因在卵巢颗粒细胞、Hela细胞中高表达,在肌细胞中表达量极低;说明OSP-1启动子可驱动外源基因在猪卵巢颗粒细胞中高效表达,可为构建可用于猪卵巢颗粒细胞的表达载体提供了启动子。

OSP-1启动子在奶山羊卵巢颗粒细胞中的转录活性

采用大鼠OSP-1启动子替换掉pcDNA3.1(+)中的CMV启动子,在其下游插入EGFP基因片段,构建载体pOSP-1-EGFP,脂质体转染不同细胞,利用荧光检测、RT-PCR以及相对定量PCR鉴定该启动子启动基因表达的活性。结果表明,在卵巢颗粒细胞、人卵巢癌细胞系HO-8910中可看到有绿色荧光;OSP-1片段只在卵巢颗粒细胞和人卵巢癌细胞系HO-8910有表达,并在人卵巢癌细胞系HO-8910中表达量较高,但是两者之间差异不显著。说明OSP-1启动子可调控外源基因在奶山羊卵巢颗粒细胞中特异性的表达。

THE SUPER-BIHAMILTONIAN REDUCTION ON C~∞(S^1, OSP(1|2))

In this article, we will show that the super-bihamiltonian structures of the Kuper- KdV equation in [3], the Kuper-CH equation in [17, 18] and the super-HS equation in [11, 16, 19] can be obtained by applying a super-bihamiltonian reduction of different super-Poisson pairs defined on the loop algebra of osp（1｜2）.