去泛素化酶OTUB2通过诱导DDX54活性增加中性粒细胞外诱捕网的形成以及促进结直肠癌细胞活力和侵袭能力

目的探讨含OTU结构域的泛素醛结合蛋白2(OTUB2)影响RNA解螺旋酶54(DDX54)的活性及其对中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)的形成和结直肠癌(CRC)细胞活力、侵袭的影响。方法分离CRC患者和健康对照组的外周血中性粒细胞,并使用佛波酯(PMA)或脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNaseⅠ)刺激中性粒细胞4 h;Western blot检测NETs标记物髓过氧化物酶(MPO)和瓜氨酸组蛋白H3(Cit-H3)的表达;干预SW480细胞中OTUB2或DDX54的表达并将其和中性粒细胞共培养,细胞分为如下组:对照组(不做任何处理),NETs组、vector组、OTUB2组、NETs+si-OTUB2组(SW480细胞、转染了vector、OTUB2过表达质粒和si-OTUB2的SW480细胞分别与PMA处理的中性粒细胞共培养),OTUB2+DNaseⅠ组(转染了OTUB2过表达质粒的SW480细胞与DNaseⅠ处理的中性粒细胞共培养),si-OTUB2组、OTUB2+si-NC组和OTUB2+si-DDX54组(转染了si-OTUB2、OTUB2过表达质粒和si-NC、OTUB2过表达质粒和si-DDX54的SW480细胞分别与中性粒细胞共培养)。ELISA检测SW480细胞上清液中MPO-DNA复合物相对表达量和Cit-H3的浓度;MTT和Transwell检测SW480细胞活力和侵袭能力;RNA测序筛选OTUB2调控的下游基因并使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫共沉淀(co-IP)和谷胱甘肽S-转移酶(GST)亲和纯化(GST-pull-down)、His-tag pull-down实验验证DDX54和OTUB2的相互作用。结果与健康对照相比,CRC患者外周血中NETs的形成增加。与对照组相比,NETs组CRC细胞活力和侵袭增加(P<0.05)。与vector组比较,OTUB2组MPO-DNA复合物相对表达量和Cit-H3的浓度增加,细胞活力和侵袭增加(P<0.05);而与OTUB2组比较,OTUB2+DNaseⅠ组MPO-DNA复合物相对表达量和Cit-H3的浓度减少,细胞活力和侵袭减少(P<0.05)。Co-IP实验、GST pull down实验和His-tag pull down实验表明OTUB2和DDX54之间存在相互作用。与OTUB2+si-NC组比较,OTUB2+si-DDX54组MPO-DNA复合物相对表达量和Cit-H3的浓度减少,细胞活力和侵袭减少(P<0.05)。结论去泛素化酶OTUB2可以通过上调DDX54的增加NETs的形成并促进CRC细胞活力和侵袭。

OTUB2、TAZ在食管鳞癌中的表达水平及其临床意义

目的探讨Otubain2(OTUB2)、TAZ(含有WW结构域的转录调节因子1)在食管鳞癌(ESCC)中的表达及其临床意义。方法收集新疆医科大学第一附属医院病理科2008-2018年诊断的272例ESCC患者石蜡标本及临床病理资料进行回顾性分析。利用生物信息数据库分析OTUB2在食管癌中的表达情况及与TAZ的相互作用关系;采用免疫组织化学(SP)法检测OTUB2、TAZ在ESCC组织和癌旁组织中的表达,分析其表达变化与ESCC患者临床病理参数及预后的相关性。结果TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库检索分析发现,OTUB2在食管癌中表达显著高于正常食管癌旁组织;STRING数据库检索发现,OTUB2与TAZ存在相互作用关系;免疫组化结果显示,OTUB2蛋白在ESCC组织和癌旁组织中的阳性表达率分别为87.9%、12.1%,TAZ蛋白在ESCC组织和癌旁组织中的阳性表达率分别为85.9%、14.1%,差异均具有统计学意义(P<0.05);OTUB2蛋白表达水平与肿瘤大小、分化程度有关(P<0.05);TAZ蛋白表达水平与肿瘤大小、分化程度、浸润深度、TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05);OTUB2与TAZ在ESCC中的表达水平呈正相关(P=0.000,r=0.216);预后因素分析结果显示,OTUB2与TAZ表达情况、肿瘤大小、浸润深度、有无淋巴转移、与患者的预后均具有统计学意义(P<0.05),OTUB2与ESCC患者中TAZ高表达组的位总生存时间(OS)较低表达组更短(P<0.05)。结论OTUB2与TAZ的表达与ESCC的发展密切相关,有望为ESCC的治疗靶点提供新的参考。