乳腺癌手术切除患者放疗前后外周血单个核细胞中Survivin、OTUD3 mRNA变化及与预后的关系

目的研究乳腺癌手术切除患者放疗前后外周血单个核细胞中生存素(Survivin)和去泛素化酶3(OUT domain-containing protein 3,OTUD3)mRNA的表达情况及与预后的关系。方法选取79例乳腺癌并行扩大根治术的患者作为观察组,在切除手术后对观察组患者行为期2个月的放射治疗,另选取同期健康体检志愿者55例作为对照组。检测观察组放疗前后及对照组的外周血单个细胞核中Survivin-mRNA和OTUD3-mRNA表达情况,并且分析其变化及其与疾病预后的关系。结果观察组放疗前后外周血单个核细胞中Survivin-mRNA和OTUD3-mRNA的表达量均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组放疗后外周血单个核细胞中Survivin-mRNA和OTUD3-mRNA低于放疗前,差异具有统计学意义(P<0.05);检测放疗前后外周血单个核细胞中Survivin-mRNA和OTUD3-mRNA的表达情况与年龄、肿瘤大小对比差异无统计学意义(P>0.05),与肿瘤分期、肿瘤分化和淋巴结转移情况对比差异具统计学关系;放疗前后外周血单个核细胞中Survivin-mRNA和OTUD3-mRNA的表达量与肿瘤分期都呈现显著正相关关系(γ=0.622,γ=0.684,γ=0.705,γ=0.714;P<0.001);与肿瘤分化呈现显著负相关关系(γ=-0.548,γ=-0.629,γ=-0.574,γ=-0.596;P<0.001);与淋巴结转移呈现显著正相关关系(γ=0.685,γ=0.711,γ=0.697,γ=0.688;P<0.001)。根据ROC曲线获得,最佳界限以Survivin-mRNA(1.67)、OTUD3-mRNA(0.49)可获得ROC曲线下最大面积,两项联合检测结果阳性,表明乳腺癌术后放疗与Survivin-mRNA、OTUD3-mRNA密切相关,且两项联合检测的敏感度(81.0%)、特异度(83.6%)均高于单项检测(P<0.05)。结论监测乳腺癌患者术后体内Survivin-mRNA和OTUD3-mRNA表达情况对术后放疗短期预后存在一定评估价值。因此Survivin-mRNA和OTUD3-mRNA也许能够作为癌症术后放疗评估预后的重要生物指标。

OTUD3和PTEN在乳腺癌组织中的表达及与临床病理特征和预后的关系

目的:检测乳腺癌组织中OTUD3与PTEN表达,分析其与临床病理特征及预后的关系。方法:选取2014年1月至2014年12月于我院行手术治疗的79例乳腺癌患者癌组织及其对应癌旁正常组织标本。采用免疫组化染色法、Western blot检测、RT-PCR法分别检测癌组织及癌旁正常组织中OTUD3与PTEN表达,并分析两者表达相关性;探究OTUD3、PTEN与乳腺癌临床病理特征及预后的关系。结果:乳腺癌组织中PTEN阳性主要定位于细胞核,OTUD3阳性主要定位于细胞质。乳腺癌组织中OTUD3和PTEN阳性率、蛋白表达量及mRNA水平显著低于癌旁正常组织(P均<0.05)。乳腺癌组织中OTUD3、PTEN表达呈正相关(r=0.580,P=0.000)。PTEN与肿瘤直径、组织学分级、TNM分期、淋巴结转移、分子分型及ER/PR/HER-2/p53状态显著相关(P<0.05);OTUD3与组织学分级、TNM分期、淋巴结转移及p53显著相关(P<0.05)。OTUD3及PTEN阴性表达组患者生存率显著低于阳性表达组(Log-rank检验P<0.05),两者不同表达是影响乳腺癌预后生存的独立危险因素之一(P<0.05)。结论:乳腺癌组织中OTUD3、PTEN低表达,两者表达呈正相关,与组织学分级、TNM分期、淋巴结转移及p53等临床病理特征及预后显著相关,有望成为临床预后预测的有效因子。

OTUD3与p53在乳腺癌中表达及对DNA损伤应答的研究

目的:研究去泛素化酶OTUD3与肿瘤抑制因子p53蛋白在乳腺癌组织中表达相关性及对DNA损伤应答的意义。方法:免疫组化检测80对乳腺癌组织及癌旁正常乳腺组织中去泛素化酶OTUD3蛋白表达情况;Western Blot检测其中10对新鲜组织标本中OTUD3与p53及其下游p21蛋白的表达;紫外线照射损伤乳腺癌MCF7细胞DNA,并用CHX处理细胞,Western Blot检测OTUD3与p53蛋白水平变化;在ATM野生型(ATM+/+)与ATM敲除(ATM-/-)细胞中重复DNA损伤实验,Western Blot检测OTUD3与p53蛋白水平变化。结果:乳腺癌组织中OTUD3的阳性表达率(42.5%)显著低于癌旁正常组织阳性表达率(83.8%,P<0.05);OTUD3与p53在乳腺癌组织中表达低于癌旁组织,且两者表达一致;OTUD3和p53能够响应DNA损伤并且OTUD3对损伤的应答可能与其泛素化酶活性有关。结论:OTUD3是一个潜在的抑癌分子,其表达下降参与乳腺癌的发生,并且在DNA损伤情况下,OTUD3可能通过去泛素化作用对p53蛋白产生影响。

高表达OTUD3对C6星形胶质瘤细胞增殖的影响

目的探究高表达OTUD3对C6星形胶质瘤细胞增殖的影响。方法C6胶质瘤细胞转染Myc-OTUD3质粒载体48 h后,采用Western Blot方法检测OTUD3蛋白表达变化;采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)细胞增殖试剂盒和细胞克隆形成实验检测高表达OTUD3的C6胶质瘤细胞增殖改变情况。结果转染Myc-OTUD3质粒载体48 h后,C6胶质瘤细胞OTUD3蛋白表达升高(t=3.472,P<0.01)。CCK-8和细胞克隆形成实验结果显示,高表达OTUD3的C6胶质瘤细胞增殖水平降低(F=17.326、70.345,t=3.646,P<0.05)。结论高表达OTUD3可抑制C6星形胶质瘤细胞的增殖。

去泛素化酶OTUD3调控PTEN肿瘤相关突变体蛋白稳定性的研究

目的 探索去泛素化酶含OTU结构域蛋白3(OTUD3)在乳腺癌中对抑癌蛋白PTEN肿瘤相关突变体蛋白稳定性的调控。方法 收集50例乳腺癌患者样本,提取癌与癌旁组织的RNA后进行逆转录,对PTEN C2结构域进行PCR扩增后测序分析,鉴定乳腺癌PTEN C2结构域的肿瘤相关突变。结合现有数据库中PTEN基因的突变位点信息,将PTEN突变体的编码序列扩增后插入哺乳动物表达载体pCMV-Myc中,构建含有PTEN C2结构域肿瘤相关突变体基因的质粒载体。将上述含PTEN点突变体或截短体基因的质粒载体分别与含OTUD3基因的质粒载体共转染MCF-7细胞,通过免疫共沉淀实验、半衰期实验、泛素化实验及Western印迹实验分别检测PTEN所有突变体与OTUD3结合能力、OTUD3对部分PTEN突变体蛋白稳定性的维持能力及去泛素化修饰能力。结果 从50例乳腺癌病例中鉴定出PTEN C2结构域有3种突变,即I224M、E307K与F341V,其中F341V是本研究在乳腺癌病例中首次鉴定出的PTEN突变体。△M199、F341V以及1-319丧失了与OTUD3结合的能力,从而失去了OTUD3对其的稳定作用。结论 在乳腺癌中,PTEN的一些突变体丧失了与OTUD3结合的能力,不能对其去泛素化修饰,使得蛋白稳定性降低。

去泛素化酶OTUD3通过稳定PTEN抑制癌症发生发展

PTEN(phosphatase and tension homology,deleted in chromosome 10)是重要的抑癌分子,其蛋白剂量水平的精细变化与肿瘤的发生发展密切相关。PTEN的蛋白水平调控研究一直是该领域的研究热点,虽然已经发现了数个PTEN的泛素连接酶,但能调控PTEN蛋白稳定性的去泛素化酶却一直不明确。该文介绍了PTEN泛素化修饰的最新进展,去泛素化酶OTUD3(OTU domaincontaining protein 3)通过去除PTEN的多聚泛素化维持其蛋白水平,并发挥抑癌功能。这一研究进展弥补了通过拮抗泛素化降解从而稳定PTEN这一长期未被阐释的调控机制。