OTX2基因表达下调对MC3T3-E1细胞增殖分化和自噬的影响

目的研究OTX2基因对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1增殖分化及自噬水平的影响。方法应用OTX2基因小干扰RNA(siRNA)转染MC3T3-E1细胞,采用MTT法测定细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡水平,化学比色法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)合成情况,单丹磺酰尸胺(MDC)荧光染色观察各组自噬体表达情况。结果与对照组比较,实验组细胞增殖抑制率明显升高(P <0.05),S期细胞百分比减少,S期细胞比例以及细胞的增殖指数显著降低(P <0.05),凋亡率无统计学差异(P>0.05);ALP活性明显低于对照组(P <0.05);实验组可见少量MDC点状荧光,荧光细胞比例降低,阴性对照组点状荧光较多,实验组与阴性对照组荧光细胞比例有统计学差异(P <0.05)。结论 OTX2基因表达下调可以抑制MC3T3-E1细胞增殖,降低细胞分化水平,引起MC3T3-E1细胞自噬水平降低。

七彩神仙鱼OTX2基因克隆及其表达分析

为探讨otx2基因在七彩神仙鱼(Symphysodon haraldi)亲代抚育过程中的作用,本试验采用RT-PCR法克隆得到了七彩神仙鱼otx2基因,otx2基因的cDNA序列的CDS区序列长度为873 bp,共编码290个氨基酸,预测分子质量为31771.55 Da,理论等电点为9.40。运用SMART、Swiss-model和MEGA软件对基因的结构及物种进化关系进行分析。氨基酸序列预测显示,该基因具有otx保守结构域,在进化关系上与尼罗罗非鱼和白边锯鳞鱼亲缘关系相近,同源性分析发现,其氨基酸序列与尼罗罗非鱼、长、西瓜刨、牙鲆和白边锯鳞鱼的同源性都在75%以上。荧光定量PCR分析显示,otx2基因在雌性七彩神仙鱼的脑、心脏、肝脏、肾脏等组织中都有表达,并且在脑组织中显著高表达。荧光原位杂交结果显示,otx2基因在七彩神仙鱼脑组织中的小球周灰质带、纵枕、顶盖室等区域均有表达。

山羊DCT基因启动子活性区及其转录因子调控探究

旨在探究山羊DCT基因启动子活性区及相关转录因子对该基因的调控作用,为山羊DCT基因的表达调控提供理论依据。通过对山羊DCT基因5′侧翼区序列及第一外显子区序列进行生物信息学分析,并与人和小鼠DCT基因启动子序列进行比对,同时结合在线启动子预测结果,采用快速克隆的方法构建5个5′系列缺失序列的启动子报告基因载体,以此为基础构建3′缺失序列的6个报告基因载体,并构建SOX10、MITF和OTX2转录因子结合位点点突变的6个报告基因载体,以瞬时转染的方法转染A375细胞,双荧光素酶检测试剂盒检测缺失片段和点突变片段的启动子活性。结果表明,成功构建了山羊DCT基因11个不同长度的启动子报告基因载体,-990^+232bp的P3片段荧光素酶活性极显著高于其他片段(P<0.01),基于P3构建的3′系列缺失片段中-881^-154bp的P8片段荧光素酶活性极显著高于其他片段(P<0.01)。转录因子SOX10结合位点突变的载体荧光素酶活性极显著降低(P<0.01),MITF和OTX2结合位点突变的载体荧光素酶活性极显著增强(P<0.01)。山羊DCT基因启动子核心调控区位于-881^-154bp区域,转录因子SOX10对山羊DCT基因发挥正调控作用,而转录因子MITF和OTX2对山羊DCT基因的调控作用尚需深入研究。

一个先天性小眼畸形家系的全外显子组测序分析及产前诊断

目的分析1个先天性小眼畸形家系的临床表型及遗传学病因。方法应用高通量测序技术对先证者及其父母进行全外显子组测序,筛选候选致病位点,对其家系进行Sanger测序验证,并通过羊水穿刺和Sanger测序为先证者母亲提供产前诊断。结果全外显子组测序和Sanger测序发现家系中的3例患者均携带OTX2基因c.289C>T(p.R97*)杂合变异,先证者母亲亦携带该变异,但无小眼畸形。先证者的父亲、舅母和胎儿未携带上述变异。结论OTX2基因c.289C>T(p.R97*)杂合变异很可能是该家系的发病原因。上述诊断将有助于该家系的遗传咨询和产前诊断。