定喘颗粒对OVA诱导豚鼠急性哮喘的作用研究

目的探讨定喘颗粒对于卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)诱导的豚鼠急性哮喘模型的影响。方法通过腹腔注射OVA溶液并进行行为学评分后,随机分为模型组、硫酸特布他林组、喘嗽宁片组、定喘颗粒低剂量组、定喘颗粒中剂量组、定喘颗粒高剂量组,并从未处理豚鼠中随机选取8只作为空白组。在给药2周后通过OVA喷雾进行刺激,检测模型组及各给药组中豚鼠的引喘潜伏期,利用酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测豚鼠血清和支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中白细胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)和白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)的水平,并借助嗜酸粒细胞直接计数液检测全血和BALF中嗜酸性粒细胞(Eosinophil,EOS)的数量,苏木素-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色检测豚鼠肺部组织的病理变化情况并评估。结果与空白组相比,模型组炎症相关指标出现明显异常,指示造模成功。与模型组相比,阳性药组尤其是硫酸特布他林片组,以及定喘颗粒高剂量组给药均可延长OVA诱发急性支气管哮喘豚鼠的引喘潜伏期,降低血液及BALF中IL-4和IL-10的水平和EOS的数量,并缓解肺部组织的病理变化。结论定喘颗粒可以有效缓解急性哮喘时出现的炎症情况,并减少哮喘相关炎症导致的肺部病理损伤。

树突状细胞免疫受体是治疗哮喘的新靶点

目的探讨树突状细胞(dendritic cells,DCs)表面表达的Ⅱ型膜蛋白——树突状细胞免疫受体(dendritic cells immunal receptor,Dcir)在哮喘中的作用。方法使用卵清蛋白(OV-albumin,OVA)同时诱导Dcir-/-小鼠和野生型小鼠发生哮喘,通过对比2种小鼠模型气管中嗜酸性粒细胞的浸润、血清中抗体的产生、肺的病理表现和淋巴结细胞中Th2细胞因子的释放,来阐明Dcir在哮喘中的作用。为了证明Dcir在哮喘中的作用是通过DC细胞介导的免疫应答而非直接影响T细胞免疫实现的,我们使用含有OVA特异性T细胞受体的转基因小鼠DO11.10与DO11.10×Dcir-/-小鼠进行对比;并通过体外实验验证了Dcir缺失对na觙ve T细胞产生Th2细胞因子以及conventional DC(cDC)和plasmacytoid DC(pDC)增殖速度的影响。结果在OVA诱导的小鼠哮喘模型中,Dcir-/-小鼠气管内嗜酸性粒细胞的浸润较野生型小鼠亢进;Dcir-/-小鼠血清中抗体的产生较野生型小鼠增加;肺部的病理结果显示,相对于野生型小鼠,Dcir-/-小鼠的肺部有更多的浸润细胞、黏液分泌和更为严重的气管纤维化;Dcir-/-小鼠淋巴结细胞释放的Th2细胞因子较野生型小鼠升高。在诱导DO11.10和DO11.10×Dcir-/-小鼠的哮喘模型时,两者的各项指标之间没有明显差异,说明Dcir参与的哮喘恶性化是通过DC细胞介导的免疫应答实现的。在DC细胞与抗原和na觙ve T细胞共同培养的过程中,Dcir-/-小鼠来源的DC细胞诱导了更多的Th2细胞产生。在将骨髓细胞(BMC)诱导为cDC和pDC的体外实验中,Dcir-/-小鼠对GM-CSF的信号和Flt-3 ligand的信号感受性均增强,从而诱导出了比野生型小鼠更多的cDC和pDC。结论 Dcir-/-小鼠增加了OVA诱导的哮喘模型的恶性度。Dcir-/-小鼠对哮喘模型恶性度的增加是由过度增殖的DC细胞介导的免疫应答而并非直接影响T细胞的感受性。在哮喘模型中Dcir通过抑制树突状细胞对GM-CSF和对Flt-3 ligand的信号感受性,从而降低哮喘模型中DC细胞的分化增殖能力和Th2免疫应答。Dcir的配体有可能作为一种治疗哮喘的新药物获得应用。