甲氧基聚乙二醇衍生物与抗OX40L单抗双诱导移植物免疫耐受

背景:甲氧基聚乙二醇可在淋巴细胞表面形成空间位阻而遮蔽T细胞表面抗原;OX40及其配体OX40L是一对重要的协同刺激信号分子,阻断该信号通路可使T细胞处于无反应性的失能状态,诱导免疫耐受。目的:为获得更为理想的免疫耐受状态,检测甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺丙酸酸酯(methoxy-polyethyleneglycol-succinimidyl-propionicacidester,mPEG-SPA)化学修饰联合抗OX40L单抗对移植物T淋巴细胞增殖、表型及分泌细胞因子的影响。设计、时间及地点:对比观察移植物免疫耐受体外实验,于2006-12/2007-06在徐州医学院附属医院血液病研究室完成。材料:清洁级近交系C57BL/6(H-2b)雄性和BALB/c(H-2d)雌性成年小鼠各12只,制备的脾淋巴细胞分别作为反应细胞和刺激细胞。mPEG-SPA为北京凯正公司产品,大鼠抗小鼠OX40L单抗为eBioscience公司产品。方法:将反应细胞密度调整为4×109L-1,分别加入3,6,12,15,18g/LmPEG-SPA修饰1h,以加入相同体积的磷酸盐缓冲液作空白对照;另向反应细胞中加入15g/LmPEG-SPA分别修饰1h,24h,48h,96h,120h,流式细胞仪检测脾淋巴细胞表面CD3分子的表达。单向混合淋巴细胞培养分4组:细胞对照组,单纯加入刺激细胞+反应细胞;抗OX40L单抗组,向两种细胞中加入10mg/L抗OX40L单抗;mPEG-SPA组,向两种细胞中加入15g/LmPEG-SPA;联合组,向两种细胞中加入抗OX40L单抗和mPEG-SPA。主要观察指标:CD3分子的表达水平,其反映mPEG-SPA遮蔽脾淋巴细胞的效果。淋巴细胞增殖情况与表型分析。培养上清细胞因子含量。结果:①不同浓度mPEG-SPA修饰后淋巴细胞表面CD3分子的表达均明显低于空白对照,且15,18g/LmPEG-SPA降低幅度尤为明显(P<0.05);15g/LmPEG-SPA修饰不同时间后CD3分子的表达无变化(F=1.715,P>0.05)。与细胞对照组比较,抗OX40L单抗组、mPEG-SPA组、联合组对淋巴细胞的增殖抑制率均明显升高,联合组抑制效果最强(P<0.01);抗OX40L单抗组、mPEG-SPA组T细胞表型CD4+CD25+/CD8+CD25+比值无明显变化(P>0.05),联合组明显降低(P<0.05)。抗OX40L单抗组、mPEG-SPA组、联合组γ-干扰素含量均明显低于细胞对照组,且联合组降低幅度更为显著(P<0.05);联合组白细胞介素4含量明显高于细胞对照组(P<0.05)。结论:甲氧基聚乙二醇衍生物可明显遮蔽淋巴细胞表面抗原,且对抗原的遮蔽作用较持久;其与抗OX40L单抗联合应用能够阻断T细胞激活的抗原和共刺激双信号通路,抑制T细胞的增殖活性,使Th0类细胞向Th2类细胞偏离。

OX40L通过激活树突状细胞促进重组狂犬病病毒免疫早期抗体的产生

目的明确重组狂犬病病毒(LBNSE-OX40L)过表达的OX40L能否通过激活树突状细胞增强先天性免疫反应进而激活早期抗体的产生。方法体外研究:从Balb/c小鼠股骨提取骨髓源树突状细胞(bone marrow dendritic cells,BMDCs)培养6 d,用感染复数(MOI)=1的亲本病毒LBNSE和重组病毒LBNSE-OX40L感染培养好的BMDCs,通过流式细胞术分析各病毒对BMDCs成熟情况的影响和ELISA方法检测感染BMDCs上清中与先天性免疫相关细胞因子α干扰素(interferon-α,IFN-α)和白细胞介素12p40(interleukin-12p40,IL-12p40)的表达情况。体内研究:Balb/c雌鼠双后肢肌肉注射106 FFU的亲本病毒LBNSE和重组病毒LBNSE-OX40L,免疫后第6天收集小鼠腹股沟淋巴结,经流式细胞术检测成熟DCs比例,在免疫后第6天收集小鼠血清,通过抗病毒中和抗体滴定法检测病毒中和抗体(virus neutralizing antibody,VNA)含量,通过ELISA检测小鼠血清中IgG抗体;在免疫后第2、4、6天通过ELISA检测IgM抗体亚类含量。结果与亲本病毒LBNSE相比,重组病毒LBNSE-OX40L能够在体外激活显著多的BMDCs,并产生显著高水平的IFN-α和IL-12p40,且重组病毒LBNSE-OX40L能刺激体内DCs成熟分化,迅速产生高水平的VNA和RABV特异性IgG和IgM抗体亚类。结论LBNSE-OX40L能激活树突状细胞促进机体先天性免疫反应,进而增强早期抗体的产生,可以作为早期有效的狂犬病疫苗候选。

麻黄碱介导TSLP/OX40L通路调节变应性鼻炎大鼠Th2型免疫反应的作用研究

目的:探讨麻黄碱对卵白蛋白(OVA)诱导的变应性鼻炎大鼠Th2型免疫反应的抑制作用及可能机制。方法:将雌性SD大鼠随机分为4组,对照组、模型组、麻黄碱组(10 mg/kg)和氯雷他定组(2 mg/kg),每组10只。通过OVA诱导变应性鼻炎大鼠模型,并使用药物连续治疗7 d。治疗后,对大鼠进行鼻部症状评分,ELISA法检测大鼠血清免疫球蛋白E(IgE)、IL-4和IL-13水平,苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠鼻腔组织形态,qRT-PCR和Western blot检测大鼠鼻黏膜组织TSLP和OX40L的mRNA和蛋白表达,免疫组织化学分析鼻黏膜组织中环氧合酶2(COX2)的表达。结果:与模型组相比,麻黄碱组和氯雷他定组的鼻部症状评分显著降低,鼻腔组织病变明显减轻,COX2阳性细胞率显著降低(P<0.05)。与模型组相比,麻黄碱组和氯雷他定组大鼠血清中IgE、IL-4和IL-13水平显著降低(P<0.05)。与模型组相比,麻黄碱组和氯雷他定组大鼠鼻黏膜组织中TSLP和OX40L的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:麻黄碱对OVA诱导的变应性鼻炎大鼠具有良好的治疗作用,麻黄碱可能通过TSLP/OX40L通路调节变应性鼻炎大鼠Th2型免疫应答,从而发挥治疗作用。

OX40/OX40L信号与自身免疫性疾病

1 OX40/OX40L在免疫应答中的作用 1.1 OX40与OX40L的生物学特征OX40（CD134）是TNFR超家族成员之一,为Ⅰ型跨膜糖蛋白,相对分子质量约为48～50 kD[1]。人的OX40基因位于第1号染色体上,并与其他TNF受体家族成员如CD30、4—1BB、TNFR-Ⅱ和DR3成簇排列在人染色体lp36的远侧带。

正性共刺激分子ICOS/ICOSL、OX40/OX40L对老年2型糖尿病免疫炎症的调节作用

目的探讨正性共刺激分子ICOS/ICOSL、OX40/OX40L对老年2型糖尿病免疫炎症的调节作用及临床意义。方法老年2型糖尿病患者40例作为研究组,另随机选取同期接受体检的健康老年人40例作为对照组,均展开共刺激分子ICOS/ICOSL、OX40/OX40L检测,对比分析两组检测结果。结果研究组B细胞、CD4^+T细胞上的ICOS/ICOSL、OX40/OX40L表达水平显著高于对照组(P<0.05);合并大血管病变的患者B细胞、CD4^+T细胞上ICOS/ICOSL、OX40/OX40L表达均显著高于未合并者(P<0.05);研究组ICOS/ICOSL与dsDNA抗体、IgG抗体呈正相关,OX40/OX40与抗核抗体水平呈正相关。结论正性共刺激分子ICOS/ICOSL、OX40/OX40L参与老年2型糖尿病的免疫炎症调节,对其实施检测有望提供老年2型糖尿病诊治与并发症预防的新思路。

滋水清肝饮加减方对2型糖尿病患者正性共刺激分子ICOS/ICOSL、OX40/OX40L免疫调节作用的影响

目的:研究滋水清肝饮加减方对2型糖尿病患者正性共刺激分子ICOS/ICOSL、OX40/OX40L的免疫调节作用的影响。方法:随机抽取2016年1月—2017年3月本院收治的90例2型糖尿病患者,依据治疗措施差异分作两组,各45例,对照组施予甘精胰岛素治疗,于此基础,观察组施予滋水清肝饮加减方治疗,比较两组正性共刺激分子ICOS/ICOSL、OX40/OX40L。结果:治疗后,(1)在B细胞上,观察组ICOS/ICOSL表达(0.71±0.04)%,OX40/OX40L(6.05±0.83)%,分别比对照组的(2.11±0.37)%及(11.58±2.10)%低,差异有统计学意义(P<0.05);(2)在CD4+T细胞上,观察组ICOS/ICOSL表达(0.61±0.01)%,OX40/OX40L(0.30±0.03)%,分别比对照组的(1.60±0.17)%及(1.13±0.20)%低,差异有统计学意义(P<0.05);(3)对于合并大血管病变者,观察组B细胞、CD4+T细胞上的ICOS/ICOSL、OX40/OX40L表达均比对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);(4)观察组血糖及总胆固醇(Total Cholesterol,TC)、糖化血清蛋白(Glucosylated serum protein,GSP)水平均比对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:于2型糖尿病患者中施予滋水清肝饮加减方治疗有助于改善正性共刺激分子ICOS/ICOSL、OX40/OX40L的免疫调节作用,促进合并大血管病变者转归,值得推广。

miR-138靶向OX40L对实验性自身免疫性脑脊髓炎幼鼠的作用机制研究

目的:探究miR-138/OX40L分子轴对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)鼠的影响。方法:建立EAE小鼠模型并设为EAE组,未作处理的小鼠为对照组;流式细胞术分选小胶质细胞并检测T细胞凋亡情况;免疫荧光染色检测活化小胶质细胞内TLR3、TLR4和FIZZ-1表达;RT-qPCR检测miR-138和OX40L mRNA表达水平;Western blot检测OX40L蛋白水平;MTT法检测T细胞增殖能力;双荧光素酶报告基因实验用于验证miR-138和OX40L的靶向关系。结果:与对照组相比,EAE组小鼠出现四肢瘫痪、大小便失禁、体重减轻等症状,同时神经功能评分降低。EAE组小鼠活化小胶质细胞比例显著高于对照组小鼠,且TLR3、TLR4和FIZZ-1表达水平增加。miR-138在EAE小鼠脑组织和分离的小胶质细胞中表达下调(P<0.05),在小胶质细胞中过表达miR-138导致与其共培养的T细胞增殖能力下降(P<0.05),凋亡率增加(P<0.01)。miR-138能靶向结合OX40L mRNA从而调节OX40L蛋白表达。在小胶质细胞中过表达OX40L能促进T细胞的活性(P<0.05)并降低其凋亡(P<0.001);但同时过表达miR-138和OX40L部分消除了OX40L对T细胞活性的促进作用。结论:EAE小鼠的小胶质细胞中miR-138通过调节OX40L的表达影响T细胞活性,可能对EAE的治疗产生一定的效果。

人可溶性OX40L蛋白ELISA检测试剂盒的研制及其在自身免疫性疾病诊断中的应用

目的研制特异性检测人可溶性OX40L蛋白(sOX40L)的ELISA试剂盒,探讨其在自身免疫性疾病临床诊断中的应用。方法利用两株识别不同抗原表位的鼠抗人OX40L单克隆抗体1G1和4C12分别作为包被抗体和检测抗体,采用双抗体酶联免疫夹心法研制特异性检测人sOX40L的ELISA方法,并对其稳定性、精确性和特异性进行分析。结果①建立的检测人sOX40L酶联免疫试剂盒在抗原浓度为3.91～250ng/ml范围内有良好的线性关系,并具有良好的稳定性、较高的准确性和特异性。②利用该ELISA方法检测到sOX40L蛋白在肾病综合征和Graves’病患者血清中表达水平均显著高于健康对照组。结论成功建立了检测人sOX40L蛋白的ELISA试剂盒,应用该方法检测到sOX40L在多种自身免疫病患者血清中异常高表达。该试剂盒在OX40L分子基础研究以及自身免疫病的临床诊断方面具有潜在的应用价值。

Th17细胞功能相关基因OX40L筛选及其与miR-146a-3p靶向关系验证、对Th17细胞迁移调控作用机制探讨

目的筛选Th17细胞功能相关基因OX40L,验证其与微小核糖核酸146a-3p(miR-146a-3p)的靶向关系,并探讨其对Th17细胞迁移的调控作用机制。方法①通过在GEO数据集中搜索multiple sclerosis,筛选出GSE57098基因数据集,R语言获取CD4+T细胞和Th17细胞的差异基因,DAVID 6.8在线分析软件获取GO分析及KEGG分析,STRING在线分析网站获取蛋白互作关系,Cytoscape软件获取Th17细胞功能相关的Hub蛋白,选取关键蛋白OX40L,并用qPCR进行验证。②使用Starbase预测miR-146a-3p与OX40L存在结合位点,双荧光素酶报告实验验证miR-146a-3p与OX40L靶向关系。③体外培养生长良好的Th17细胞,给予miR-146a-3p模拟物和抑制剂及其对照处理,qRT-PCR检测Th17细胞miR-146a-3p mRNA,CCK8增殖实验检测各组Th17细胞增殖情况,Transwell小室侵袭实验检测各组Th17细胞迁移情况,流式细胞术检测各组Th17细胞凋亡比例;qRT-PCR法和Western blot法检测各组OX40L mRNA和蛋白,ELISA法检测各组Th17细胞TNF-α。结果①GSE57098数据集中Th17细胞和CD4+T细胞有差异基因2130个,其中表达上调1515个,表达下调615个,OX40L在表达上调的蛋白中排名靠前。OX40L在KEGG分析中参与Cytokine-cytokinereceptorinteraction途径。②miR-146a-3p与OX40LmRNA3'UTR呈靶向结合关系,miR-146a-3p可抑制OX40L基因的转录表达。③与对照组比较,miR-146a-3pmimic组Th17细胞TLR4和p-NFκBp65蛋白表达降低,分泌TNF-α能力降低,细胞迁移能力降低,P均<0.05。结论OX40L在Th17细胞基因表达谱发生明显变化,其表达上调是造成多发性硬化发病的机制之一;miR-146a-3p通过靶向调节OX40L的表达,进一步抑制TNF-α途径中NF-κB p65的翻译水平,降低Th17细胞的迁移。

程序性死亡配体-1与OX40L在NK/T细胞淋巴瘤中的表达及临床意义

目的通过检测程序性死亡配体-1(PD-L1)和OX40L在NK/T细胞淋巴瘤中的表达,分析PD-L1及OX40L的表达与NK/T细胞淋巴瘤的临床分期、LDH水平、β2微球蛋白水平、Ki-67等之间的关系,通过二者表达水平的相关性分析探讨二者在肿瘤局部微环境的表达关系。方法应用Envision法检测35例NK/T细胞淋巴瘤组织(观察组)和17例慢性鼻-鼻窦炎组织(对照组)中PD-L1及OX40L的表达情况,探讨NK/T细胞淋巴瘤的临床病理特征与两种因素之间的相互联系,并分析这两种因素表达水平之间的相关性。利用SPSS 26.0软件对所得数据进行综合统计处理。组间差异的比较采用χ^(2)检验,相关性分析采用非参数Spearman秩相关分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果(1)PD-L1在NK/T细胞淋巴瘤组织(74.3%)中的表达与在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉组织(76.5%)中的表达,P>0.05表示差异无统计学意义。NK/T细胞淋巴瘤组织中PD-L1的阳性表达的关联因素常见为临床分期(Ann Arbor分期)、LDH水平、Ki-67(P<0.05),而与患者性别、年龄、临床症状、β2微球蛋白关联不明显;(2)OX40L在NK/T细胞淋巴瘤组织(37.1%)中的表达低于对照组(88.2%),差异有统计学意义。NK/T细胞淋巴瘤组织中OX40L的阳性表达与临床分期有关(P<0.05),与患者性别、年龄、临床症状、β2微球蛋白水平、LDH水平、Ki-67无明显相关性;(3)NK/T细胞淋巴瘤组织中PD-L1、OX40L的表达呈负相关(r=-0.630,P<0.05);(4)PD-L1与NK/T细胞淋巴瘤的临床疗效呈负相关(r=-0.344,P<0.05),而OX40L与NK/T细胞淋巴瘤的临床疗效无相关性。结论PD-L1的高表达及OX40L的低表达可能参与NK/T细胞瘤的发展。PD-L1与临床疗效的相关性,进而说明PD-1/PD-L1信号通路可能成为NK/T细胞淋巴瘤免疫治疗的新靶点。

血清OX40L在缺血性脑卒中的诊断应用研究

目的通过检测缺血性脑卒中(IS)患者血液样本与健康体检人群血液样本中OX40配体(OX40L)水平,分析OX40L作为生物标志物对IS的诊断应用价值。方法选取2022年10月至2023年6月在牡丹江医学院附属红旗医院(本院)确诊的160例IS患者(IS组)和本院100例健康体检人员(对照组)为研究对象,根据美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分、急性卒中0rg 10172治疗试验(TOAST)分型对IS患者进行分组。对IS患者不同分组中血清OX40L水平进行比较,评估OX40L对IS的诊断应用价值。结果IS组血清OX40L水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);随着脑卒中严重程度的加重,血清OX40L水平升高(P<0.05),且在TOAST分型中各组间血清OX40L水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析结果显示,OX40L与脂蛋白a[Lp(a)]、同型半胱氨酸(Hcy)、NIHSS评分均呈正相关(r=0.583、0.427和0.685,P<0.05)。二元logistic回归多因素分析结果显示,OX40L是IS发生的独立危险因素[OR=1.013,95%CI(1.007~1.018),P<0.05]。受试者工作特征曲线显示,Lp(a)、Hcy、OX40L诊断IS的曲线下面积(AUC)分别为0.683、0.754、0.817,三者联合检测诊断IS的AUC为0.845。结论OX40L与IS发生有关,检测IS患者血清中OX40L表达水平有助于判断TOAST分型各亚型之间差异以及IS的病情严重程度,OX40L或可作为IS的辅助诊断指标。

OX40/OX40L分子在炎症性肠病免疫病理机制中的作用

OX40/OX40L是一对重要的协同刺激分子,它们能增强CD+4^+ T细胞的扩增、成熟和产生效应功能,还可使T细胞免于凋亡,并促进记忆性T细胞产生。因此,OX40/OX40L在机体的免疫应答和多种疾病中起重要作用。目前的研究表明免疫异常是炎症性肠病发病的重要因素,此文就OX40/OX40L的生物学功能及其在IBD中的作用作一综述。

自身免疫性肝炎患者外周血OX40/OX40L变化及临床意义

目的探讨自身免疫性肝炎(AIH)患者外周血OX40/OX40L变化及临床意义。方法选取2019年7月至2020年12月绵阳市中心医院收治的85例AIH患者(研究组)及同时间段体检的62例健康人群(对照组)为研究对象。对比两组临床特征及外周血OX40/OX40L阳性表达率,分析影响AIH发生的因素,以受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)评估OX40/OX40L预测AIH发生的诊断价值。结果两组T淋巴细胞亚群、C反应蛋白、白细胞计数、白细胞介素-6、白细胞介素-4、白细胞介素-21、趋化因子、谷丙转氨酶水平对比差异具有统计学意义(P<0.05);研究组外周血OX40/OX40L阳性表达率分别为(12.43±2.13)%、(14.91±2.18)%,对照组分别为(6.59±1.16)%、(4.82±0.73)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。Logistic多因素分析显示白细胞介素-21、OX40/OX40L水平是AIH发生的影响因素(95%CI分别为1.517~6.073、4.903~8.418、0.844~0.985,P均<0.05)。ROC曲线分析显示OX40/OX40L及二者联合诊断AIH的AUC分别为0.804(95%CI:0.699~0.909)、0.789(95%CI:0.682~0.895)、0.914(95%CI:0.844~0.985)。结论AIH患者外周血OX40/OX40L过度表达,OX40、OX40L联合诊断AIH具有较高价值。

协同刺激分子OX40/OX40L在哮喘免疫学发病中的作用

支气管哮喘是由嗜酸性粒细胞、肥大细胞和T细胞等多种炎性细胞参与的气道慢性炎症性疾病,并伴有气道高反应性、可逆性气流受限及黏液高分泌,其发病机制极为复杂,许多机制目前尚不很清楚。近来研究发现OX40/OX40L是哮喘免疫学发病机制中的一个重要环节,它在哮喘发病中的作用正逐渐被人们重视,现就OX40/OX40的生物学功能及调节作用以及其在哮喘治疗中的价值做一综述。

OX40/OX40L共刺激途径与移植免疫

OX40/OX40L途径是T细胞活化的共刺激信号之一,尤其对维持T细胞初次活化后的进一步增殖、存活、分化为效应细胞及记忆性T细胞是必需的共刺激信号。阻断这一信号途径可能在诱导移植耐受和治疗移植排斥中具有重要价值。本文就近几年来有关Ox4/OX40L与器官移植及骨髓移植方面的研究进展作一综述。

OX40/OX40L与慢性肝炎免疫发病机制的研究进展

慢性肝炎的发生发展与人体的免疫功能强弱密切相关,其中T淋巴细胞发挥着重要作用。共刺激分子OX40/OX40L参与T淋巴细胞的活化,综述了OX40/OX40L的分子特性、参与免疫调控的机制以及与慢性肝病的关系。

芦荟多糖对炎症性肠病小鼠免疫功能及OX40、OX40L表达的影响

目的观察芦荟多糖对炎症性肠病(IBD)小鼠免疫功能及对OX40、OX40L表达的影响并探讨其机制。方法采用三硝基苯磺酸(TNBS)诱导法制备IBD小鼠模型,随机分为模型组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组(514 mg/kg)及芦荟多糖低(150 mg/kg)、中(300 mg/kg)、高(600 mg/kg)剂量组,每组10只,另设正常对照组10只,连续给药10 d后,计算各受试小鼠疾病活动指数(DAI)积分,苏木素-伊红(HE)染色观察肠黏膜组织损伤情况,检测胸腺及脾脏指数、碳粒吞噬指数、溶血素水平及结肠组织中OX40、OX40L蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型组小鼠结肠黏膜组织细胞排列稀疏紊乱,可见大量炎性细胞浸润,疾病活动指数积分、胸腺系数、脾脏系数、吞噬指数K、校正吞噬指数α、半数溶血值、结肠黏膜组织中OX40、OX40L蛋白表达水平均明显增高(P<0.05);与模型对照组比较,芦荟多糖低、中、高剂量组小鼠肠炎症状明显减轻,疾病活动指数积分、胸腺系数、脾脏系数、吞噬指数K、校正吞噬指数α、半数溶血值、结肠黏膜组织中OX40、OX40L蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论芦荟多糖可能通过下调OX40、OX40L表达,减弱炎症性肠病小鼠免疫功能而实现对IBD的治疗作用。

OX40/OX40L在免疫应答中的作用及与疾病关系的研究

随着对OX40OX40L的深入研究,发现这对重要的协同刺激分子除了能增强CD4+T细胞、B细胞、DC细胞的扩增、成熟和产生效应功能外,还能影响CD8+T细胞的杀伤效应,能使T细胞免于凋亡,并促进更多记忆T细胞的生成。OX40OX40L在许多疾病的发生发展中也起着关键的作用,通过干预其相互作用所进行的免疫治疗已在许多动物模型上取得非常好的疗效,这为今后的临床治疗提供了理论和实验基础。