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重组腺病毒载体AdOX40Ig的构建、表达及相关体外实验
1
作者
陈志红
赵媛媛
+3 位作者
张守亮
林建扬
魏法星
朱伟
《江苏大学学报(医学版)》
CAS
2013年第1期12-16,共5页
目的:构建并鉴定含人OX40-IgG1融合基因的重组腺病毒载体,并感染人肝HL-7702细胞,筛选出最佳感染剂量并检测OX40Ig的表达情况,为进一步用于器官移植后的抗排斥治疗奠定基础。方法:根据基因库公布的人OX40和hIgG1 Fc片断序列设计特定引物...
目的:构建并鉴定含人OX40-IgG1融合基因的重组腺病毒载体,并感染人肝HL-7702细胞,筛选出最佳感染剂量并检测OX40Ig的表达情况,为进一步用于器官移植后的抗排斥治疗奠定基础。方法:根据基因库公布的人OX40和hIgG1 Fc片断序列设计特定引物,通过聚合酶链反应扩增并鉴定后,酶切插入穿梭质粒pAdTrack-CMV中。随后与pAdeasy-1腺病毒质粒以氯化钙法共转化BJ5183感受态细胞,重组质粒经鉴定正确后,大量扩增为腺病毒载体。再经293A细胞包装、扩增并纯化后感染HL-7702肝细胞,筛选出最佳感染剂量,并采用间接免疫荧光法检测其中外源性OX40Ig基因的表达,采用ELISA法测定肝HL-7702细胞上清中OX40Ig蛋白的含量。结果:转移质粒pTOX40Ig经酶切及测序鉴定正确。重组腺病毒质粒经酶切鉴定正确,并成功转染了293A细胞。得到的病毒液经纯化扩增后进一步感染肝HL-7702细胞,经筛选,10 MOI为最佳感染剂量,并且可以检测到OX40Ig目的基因及其蛋白的表达。结论:成功构建了重组腺病毒载体AdOX40Ig,并且可在肝细胞HL-7702中表达相应的目的基因及蛋白。
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关键词
人
ox
40
-IgG1融合基因
腺病毒载体
ox
40
ox40l途径
H
l
-7702肝细胞
器官移植
下载PDF
职称材料
题名
重组腺病毒载体AdOX40Ig的构建、表达及相关体外实验
1
作者
陈志红
赵媛媛
张守亮
林建扬
魏法星
朱伟
机构
江苏大学附属人民医院普外科
江苏大学基础医学与医学技术学院
出处
《江苏大学学报(医学版)》
CAS
2013年第1期12-16,共5页
基金
镇江市社会发展计划资助项目(SH2006042)
江苏大学高级人才启动基金资助项目(11JGD0090)
文摘
目的:构建并鉴定含人OX40-IgG1融合基因的重组腺病毒载体,并感染人肝HL-7702细胞,筛选出最佳感染剂量并检测OX40Ig的表达情况,为进一步用于器官移植后的抗排斥治疗奠定基础。方法:根据基因库公布的人OX40和hIgG1 Fc片断序列设计特定引物,通过聚合酶链反应扩增并鉴定后,酶切插入穿梭质粒pAdTrack-CMV中。随后与pAdeasy-1腺病毒质粒以氯化钙法共转化BJ5183感受态细胞,重组质粒经鉴定正确后,大量扩增为腺病毒载体。再经293A细胞包装、扩增并纯化后感染HL-7702肝细胞,筛选出最佳感染剂量,并采用间接免疫荧光法检测其中外源性OX40Ig基因的表达,采用ELISA法测定肝HL-7702细胞上清中OX40Ig蛋白的含量。结果:转移质粒pTOX40Ig经酶切及测序鉴定正确。重组腺病毒质粒经酶切鉴定正确,并成功转染了293A细胞。得到的病毒液经纯化扩增后进一步感染肝HL-7702细胞,经筛选,10 MOI为最佳感染剂量,并且可以检测到OX40Ig目的基因及其蛋白的表达。结论:成功构建了重组腺病毒载体AdOX40Ig,并且可在肝细胞HL-7702中表达相应的目的基因及蛋白。
关键词
人
ox
40
-IgG1融合基因
腺病毒载体
ox
40
ox40l途径
H
l
-7702肝细胞
器官移植
Keywords
human
ox
40
-IgG1 fusion gene
adenovirus vector
ox
40
/
ox
40
l
way
H
l
-7702
l
iver ce
l
l
s
organ transp
l
anting
分类号
R967 [医药卫生—药理学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组腺病毒载体AdOX40Ig的构建、表达及相关体外实验
陈志红
赵媛媛
张守亮
林建扬
魏法星
朱伟
《江苏大学学报(医学版)》
CAS
2013
0
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