针刺对更年期脑缺血大鼠GFAP和OX42表达的影响

目的:研究针刺对更年期脑缺血大鼠缺血区脑组织GFAP和OX42蛋白表达的影响,探讨针刺对神经损伤的保护作用及可能机制。方法:雌性SD大鼠,经筛选为自然更年期,随机分为假手术组、缺血模型组和针刺组,采用右侧大脑中动脉阻塞(MCAO)法建立脑缺血动物模型。针刺治疗后,采用Ber-derson神经体征评分法,观察大鼠神经行为学变化,光镜观察脑组织的病理学变化;免疫组织化学法检测脑组织中GFAP和OX42蛋白表达。结果:针刺能明显改善大鼠脑缺血后24 h和7 d的神经损伤症状;改善脑组织病理形态学损伤状态;对缺血24 h和7 d脑组织中GFAP和OX42蛋白表达有不同程度降低,与模型组相应时间点相比较,差异有统计学意义(P﹤0.05或P﹤0.01)。结论:针刺能够抑制胶质细胞GFAP和OX42的活化,减轻脑缺血后的炎症级联反应,从而改善脑组织病理学损伤状态,起到神经保护作用。

脂多糖诱导大鼠延髓神经元FOS和小胶质细胞OX42表达水平的变化

目的 :观察腹腔注射脂多糖 (lipopolysaccharide,LPS)后 ,大鼠延髓神经元的Fos和小胶质细胞的OX4 2表达及时间变化的规律 .方法 :大鼠经ipLPS后于 0 .5 ,1 ,3,6 ,1 2 ,2 4 ,72h处死、分别行固定、取材、制片 .每个时间点的切片 ,用免疫组织化学ABC法进行抗Fos和抗OX4 2免疫组织化学染色 .结果 :①Fos反应在注射后 1h开始出现、3h达到高峰 ,阳性产物主要分布在延髓内脏带 (MVZ)内 ;②OX4 2反应在注射后 3h开始出现 ,1 2h达到高峰 ,阳性产物主要分布在延髓内脏带、三叉旁核、楔外核 .结论 :LPS诱导下Fos阳性神经元和OX4 2小胶质细胞在延髓内脏活动调节中反应明显 .

上颌第一磨牙咬合升高对蓝斑Fos、OX42和GFAP表达的影响

目的探讨脑桥蓝斑内神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞是否参与咬合升高后信息的传递。方法64只雄性大鼠随机分为正常对照组(n=8)、假操作对照组(n=8)和咬合升高刺激组(n=48)。咬合升高刺激组大鼠双侧上颌第一磨牙咬合升高约0.5mm,以成活时间(1、2、4、8、24、72h)又分为6个亚组(每个亚组8只)。常规固定、取材、恒冷箱切制含脑桥蓝斑的脑桥吻侧冠状切片(片厚30μm),进行抗Fos-OX42或抗GFAP免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜观察。结果正常对照组和假操作对照组没有差异,合并为对照组。对照组Fos表达很稀疏,实验组Fos表达明显增加,2h达到高峰,然后下降。对照组OX42和GFAP表达很微弱,不同时间点没有明显变化,但实验组OX42和GFAP在8h出现明显增强的阳性反应,24h达到高峰,72h下降。结论咬合升高激活蓝斑内神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞,它们可能参与咬合升高后伤害性信息传入中枢的处理。

模拟失重对成体侧脑室下区OX42阳性细胞表达的影响

为了观察大鼠模拟失重后侧脑室下区(subventricular zone,SVZ)OX42阳性细胞的表达变化,本研究采用雄性SD大鼠尾部悬吊法建立模拟失重模型,按体重配对原则随机将20只大鼠分为4组:即模拟失重2周组(TS2W),模拟失重4周组(TS4W)和相应的正常对照(CON2W和CON4W)2组。用特异性标记小胶质细胞的OX42抗体行免疫组织化学ABC法染色,观察大鼠模拟失重后OX42阳性细胞在SVZ的形态和数量变化。结果显示:TS2W和TS4W组侧脑室下区OX42阳性小胶质细胞数显著增多,并呈显著活化状态,表现为阿米巴样小胶质细胞。本研究结果提示小胶质细胞可能参与失重的病理生理过程。

LPS激发大鼠前脑神经元Fos和小胶质细胞OX42表达改变

目的 探讨单次腹腔注射LPS后前脑神经元和小胶质细胞的可塑性变化和相互关系。 方法 应用抗Fos、抗TH或抗OX4 2单一、以及抗Fos/抗TH/抗OX4 2三重免疫组化标记方法 ,观察大鼠单次腹腔注射LPS后 ,Fos阳性神经元、Fos/TH阳性神经元、OX4 2阳性小胶质细胞在脑内的表达分布及时程变化 ,以及Fos阳性神经元或Fos/TH阳性神经元与OX4 2阳性小胶质细胞之间的关系。 结果 Fos阳性神经元分布在额、顶皮质 ,扣带回和梨状皮质 ,外侧隔核腹侧部 ,杏仁中央核 ,海马CA2区、CA3区、齿状回 ,下丘脑室旁核、视上核、下丘脑外侧区和第三脑室周围灰质等。Fos阳性神经元在注射后 30min出现表达 ,注射后 1～ 3h为表达高峰。反应阳性小胶质细胞首先于脑室周围灰质出现 ,注射后 6h达到高峰 ,胞体变大 ,突起变粗 ,OX4 2呈阳性深染 ,密集分布于Fos阳性神经元的表达区域。下丘脑Fos/TH/OX4 2三重染色切片显示 :由LPS激活的Fos/TH阳性神经元周围被OX4 2阳性细胞包绕并接触 ,表明神经元和小胶质细胞在对LPS刺激的反应中关系密切。 结论 在外周免疫刺激下 ,下丘脑、扣带回、梨状皮质和海马内的神经元和小胶质细胞可能参与免疫调节。

Effect of Qingguang'anⅡon expressions of OX42 protein and IL-1βmRNA of retinal microglia cells of rats with chronic high intraocular pressure

The study investigated the effects of Qingguang＇an Ⅱ（a Chinese medicinal preparation） on expressions of OX42 protein and interleukin-1β（IL-1β） mRNA of retinal microglia cells of rats with chronic high intraocular pressure（IOP）. SD rats were randomly divided into 6 groups, that were： A： blank group; B： model group; C： Qingguang＇an Ⅱ low dose group; D： Qingguang＇an Ⅱ medium dose group; E： Qingguang＇an Ⅱ high dose group; F： Yimaikang disket（a Chinese medicinal preparation） group. Experimental rats in B, C, D, E, F groups were established the model of chronic high IOP by cauterizing of superficial scleral vein. Tissues of eyes were obtained after intragastric administration for 2 and 4 wk. At the time-point of 2 wk, OX42 protein and IL-1β mRNA in group B were statistically expressed in higher level comparing with other groups（P〈0.05）. Moreover, at the time-point of 4 wk, OX42 protein and IL-1β mRNA in groups C, D and E were statistically expressed in lower level comparing with group F（P〈0.05）. Besides, OX42 protein and IL-1β mRNA in groups C and D were statistically expressed in higher level comparing with group E（P〈0.05）. OX42 protein and IL-1β mRNA in groups C and D were expressed in similar level（P〉0.05）. The study indicated that, in the protection of optic nerve of rats with chronic high IOP, the high dose of Qingguang＇an Ⅱ at the time-point of 4 wk was the better choice.

椎管注射氟柠檬酸对针刺保护高湿热应激大鼠胃黏膜作用的影响

目的:观察预先椎管注射氟柠檬酸(FCA)对针刺“足三里”穴保护受高湿热刺激大鼠胃黏膜损伤作用的影响,以探讨脊髓内胶质细胞是否参与此针刺作用。方法:将36只雄性SD大鼠随机分为6组。空白对照组(A)不做任何刺激;湿热应激组(B)大鼠放入仿真模拟气候舱内[干球温度(40.0±0.5)℃,相对湿度(60±5)%],60 min后取出;针刺+湿热应激组(C)大鼠放入仿真模拟气候舱内做应激处理的同时开始电针双侧“足三里”穴;FCA+湿热应激组(D)先向大鼠椎管注射FCA 1μL,60 min后做应激处理;FCA+针刺+湿热应激组(E)向大鼠椎管注射FCA 1μL后,再做电针和应激处理;椎管注射生理盐水(NS)+针刺+湿热应激组(F)向大鼠椎管注射NS 10μL后,再做电针和应激处理。采用免疫组织化学方法观察脊髓腰膨大段胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和小胶质细胞特异性标记物OX42的表达,并记录各组动物的胃黏膜损伤指数。结果:大鼠在高湿热刺激60 min后胃黏膜出现点、线状出血灶,并有溃疡形成。B组胃黏膜损伤指数为33.7±2.8,而C组胃黏膜损伤指数明显下降为20.4±1.6(P<0.01),同时腰膨大后角浅层中GFAP和OX42的表达有明显增加(P<0.01)。E组胃黏膜损伤指数为24.1±2.7,腰膨大GFAP和OX42的表达有明显下调,与C组比较差异有统计学意义(P<0.05)。F组与C组之间比较无明显差异。结论:电针“足三里”穴对高湿热应激大鼠胃黏膜损伤具有保护作用,脊髓腰膨大中的胶质细胞可能参与了此保护作用。

氯胺酮鞘内给药对神经病理性痛大鼠脊髓背角小胶质细胞活化、TNF-α和IL-1β产生的影响

目的:探究鞘内注射氯胺酮(ketamine,KTM)对坐骨神经结扎(CCI)神经病理性疼痛大鼠模型行为、脊髓背角肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素1β(IL-1β)以及小胶质细胞标记蛋白OX42表达的影响。方法:(1)建立CCI模型大鼠,鞘内注射KTM或MI(米诺四环素)进行干预,测定大鼠机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。(2)运用ELISA法检测TNF-α和IL-1β表达水平。(3)使用Western Blot法检测OX42的表达情况。结果:(1)KTM组和MI组大鼠MWT和TWL值较CCI组显著升高;KTM组大鼠MWT和TWL值高于CCI组(P<0.05)。(2)KTM组和MI组TNF-α和IL-1β表达水平低于CCI组(P<0.05);其中KTM组TNF-α和IL-1β表达水平显著高于MI组(P<0.05)。(3)KTM组和MI组OX42表达水平显著低于CCI组;KTM组OX42表达水平高于MI组(P<0.05)。结论:鞘内KTM可以抑制脊髓背角小胶质细胞激活,减少TNF-α和IL-1β表达,显著改善坐骨神经结扎引起的神经病理性疼痛。

老年与年轻大鼠脑出血后小胶质细胞反应的比较

目的探讨年龄对脑出血后小胶质细胞反应的影响。方法年轻(3个月龄)和老年(16个月龄)雄性S-D(Sprague-Dawley)大鼠(河南省实验动物中心提供)脑内注入100μl自体全血,观察与年龄相关的神经胶质细胞的反应。年轻、老年模型组大鼠分别在脑内注血后6、12、24、72 h、7、14 d时间点处死动物(每组6只)进行OX42免疫组化。假手术组(每组6只)作对照。观察OX42染色的阳性细胞表达。结果 与年轻大鼠比较,老年大鼠脑出血后3 d有增加小胶质细胞的激活作用(OX42染色)。皮质、基底的小胶质细胞数决定其活化程度,老年大鼠在皮质、基底节有更明显的小胶质细胞活化。老年大鼠脑出血后3 d OX42阳性细胞数显著高于年轻大鼠,这种状况可持续到监测14 d(P<0.01)。结论脑出血导致老年大鼠更严重的脑损伤很可能与过度的小胶质细胞活化有关,年老是影响脑出血后脑损伤的重要因素。

大鼠束缚后脑内小胶质细胞的反应

目的 探讨大鼠束缚后脑内小胶质细胞的反应及其时程变化。 方法 将大鼠束缚于小的塑料桶内 1,3或 6h ,于解束后 30min被处死 ,脑组织进行抗OX4 2 (小胶质细胞的特异性标记物 )免疫组织化学染色。结果 正常大鼠脑内的小胶质细胞一般为静息状态 (静息型 ) ,其特点是OX4 2为阴性或浅染 ,在切片上不易发现或细胞形态不清晰。束缚 1h后 ,小胶质细胞为轻度反应 ,OX4 2浅染 ,细胞形态隐约可见 ,仅于下丘脑的视上核、室旁核和弓状核有散在的表达。束缚 3h后 ,小胶质细胞的反应达到高峰 ,由静息状态变为早期反应状态 (早期反应型 ) ,OX4 2深染 ,细胞形态清楚 ,突起上可见到小棘。早期反应型小胶质细胞广泛分布于前脑 :扣带回、新皮质浅层、隔外侧核、海马CA3、齿状回、杏仁中央核 ;间脑 :下丘脑视前区、视上核、室旁核、第三脑室周区、弓状核、丘脑室旁核、外侧膝状体、内侧膝状体 ;脑干 :中脑的上丘视性层、中脑导水管周围灰质、下丘的皮质部 ;脑桥的外侧臂旁核、蓝斑、A5区 ;延髓的延髓内脏带 (MVZ)和三叉神经脊束核等处 ;束缚 6h后 ,小胶质细胞反应减弱 ,OX4 2浅染 ,分布范围减少 ,主要出现于扣带回、隔外侧核、海马、视上核、室旁核、中脑导水管周围灰质、脑桥的臂旁外侧核、蓝斑、延髓的延髓内脏带

咬合创伤对脑桥臂旁核和蓝斑小胶质细胞的影响

目的:探讨第一磨牙升高咬合造成的咬合创伤能否引起脑桥结合臂旁核和蓝斑小胶质细胞反应。方法:56只SD大鼠随机分为1h、2h、4h、8h、24h、72h实验组和对照组(n=8),用正畸方丝将上颌第一磨牙咬合升高大约1mm。免疫组化检测OX42阳性小胶质细胞在脑桥臂旁核和蓝斑核的分布和表达变化。结果:正常大鼠的脑桥臂旁核和蓝斑核只有少量弱表达,小胶质细胞处于静息期。在4h和8h,OX42阳性反应增强,小胶质细胞出现轻度反应,在24h达到高峰,小胶质细胞出现明显反应,胞体和分支增粗,细胞突触上小棘样结构明显,72h反应下降。脑桥结合臂旁核外侧反应比内侧强,蓝斑背侧部强于腹侧部。结论:咬合创伤激活脑桥内蓝斑和结合臂旁核内小胶质细胞,参与伤害性信息传入中枢的处理。