耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌的耐药机制及分子流行病学

目的碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌(CRAB)逐年升高的分离率和全球播散已成为极为严重的问题,本研究目的是阐明我院CRAB的耐药机制和分子流行病学特征。方法使用gyrB多重PCR方法将我院2014年7月—2015年6月分离的327株非重复醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体(ABC)鉴定到种,VITEK-2仪器法和E-test法测定抗菌药物的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration MIC),PCR方法检测常见的碳青霉烯酶耐药基因、ISAba1并测序,Turton 2组多重PCR方法进行分子分型。结果327株ABC中有315株鲍曼不动杆菌(ABA)、9株皮特不动杆菌和3株医院不动杆菌,ABA、皮特和医院不动杆菌对亚胺培南的耐药率分别为91.7%、0和66.7%,耐药株主要分离自急诊科和呼吸ICU。ABA bla_(OXA-23-like)和ISAba1检出率均为91.1%,测序均为bla_(OXA-23),bla_(OXA-51-like)和ISAba1检出率分别为100%和0.3%,测序主要为bla_(OXA-66)和bla_(OXA-69),未检测到其他OXAs型、NDM、IMP、GIM、KPC、SIM、VIM和GES酶基因。Turton分子分型76.8%属于国际克隆Ⅱ型(IC Ⅱ)。结论携带bla_(OXA-23)和ISAba1的IC Ⅱ克隆是我院主要的流行克隆株,克隆播散是CRAB感染增加和暴发的重要原因。

鲍曼不动杆菌中OXA碳青霉烯酶的表型筛选与PCR检测

目的了解OXA碳青霉烯酶在暨南大学附属第一医院耐亚胺培南鲍曼不动杆菌中的流行状况,完善OXA碳青霉烯酶的分子流行病学资料。方法采用改良Hodge试验筛选产碳青霉烯酶菌株,多重PCR法检测OXA碳青霉烯酶的编码基因(blaOXA-23-like、blaOXA-24-like、blaOXA-58-like和blaOXA-143),利用生物信息学的方法对OXA亚型进行比对分析并制作分子进化树。结果在157株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌中Hodge试验筛选出碳青霉烯酶表型阳性菌株141株,PCR检测结果显示有132株携带OXA-23编码基因,未检测到OXA-24-like、OXA-58-like和OXA-143亚型。结论产OXA-23碳青霉烯酶是该院鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药的主要机制之一。

多重耐药鲍曼不动杆菌中OXA碳青霉烯酶基因的研究

目的调查我院院内分离的多重耐药鲍曼不动杆菌中OXA碳青霉烯酶基因的存在情况,为临床合理使用抗菌药物和控制院内感染的发生提供科学依据。方法用Walk Away 96 PLUS NC31复合板鉴定菌种,用微量稀释法和K-B纸片扩散法测定菌株的药敏情况,PCR法检测OXA23、OXA24、OXA48、OXA55、OXA58、OXA60、OXA64、OXA66基因在46株院内分离的多重耐药鲍曼不动杆菌中的存在情况,对部分阳性基因进行测序。结果 46株多重耐药鲍曼不动杆菌中,41株(89.1%)OXA23组基因阳性,其余基因检测均阴性。结论我院院内分离的多重耐药鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要原因之一是产OXA23组碳青霉烯酶。

鲍曼不动杆菌OXA型碳青霉烯酶基因型检测分析

目的了解鲍曼不动杆菌OXA型碳青霉烯酶基因型的存在状况。方法应用聚合酶链反应(PCR)检测OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-58基因,对PCR产物进行DNA直接测序,同时采用PCR对ISAba1和ISAba3插入序列进行检测,对PCR产物进行直接测序。除分别对OXA-23和ISAba1进行检测外,在两个基因之间再设计一对引物进行扩增,获得ISAba1与OXA-23之间的全长DNA序列。结果收集温州医科大学附属第一医院住院患者临床分离的200株鲍曼不动杆菌,用PCR方法共检到OXA-23基因阳性菌株155株,阳性率为77.5%,其中与插入序列ISAba1同时阳性143株,阳性率为71.5%,本次试验未检到OXA-24基因阳性菌株;200株鲍曼不动杆菌均携带OXA-51基因,阳性率为100%,其中和OXA-23基因同时阳性155株,阳性率为77.5%;OXA-58基因阳性菌株共检出8株,阳性率为4.0%,插入序列ISAba3阳性共检出12株,阳性率为6.0%,其中有8株ISAba3和OXA-58同时阳性,阳性率为4.0%。结论产OXA-23型碳青霉烯酶是该院鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类抗生素的主要原因。

病房鲍曼不动杆菌气溶胶检测及其携带OXA型碳青霉烯酶耐药基因分析

目的耐碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌为最受关注的医院获得性感染病原体。本研究通过对医院病房环境中气载鲍曼不动杆菌的检测,确定鲍曼不动杆菌气溶胶的形成,进一步鉴定鲍曼不动杆菌气源性分离株的耐药表型和耐药基因,分析病房环境气溶胶中的耐药性及OXA型碳青霉烯酶耐药基因的携带情况。方法2017年6-12月利用ANDERSEN-6级空气收集器定期收集ICU病房、呼吸内科及其走廊环境中的气载鲍曼不动杆菌;采用K-B法检测其对常用13种抗生素的敏感性;利用多重PCR扩增OXA型碳青霉烯酶耐药基因。结果共分离到非重复鲍曼不动杆菌16株,在显微镜下呈紫色,菌体球杆状,无鞭毛;8株来源于ICU病房,5株来源于呼吸内科病房。16株鲍曼不动杆菌,对头孢曲松钠、环磷酰胺、环丙沙星和亚胺培南的耐药率接近90%,对甲氧苄氨嘧啶/新诺明、庆大霉素和他唑巴坦的耐药率为81.25%,而对阿米卡星、头孢吡肟和头孢他啶的耐药率分别为75.00%、68.75%和62.50%,对氨苄青霉素/舒巴坦、美罗培南的耐药率分别为50.00%和43.50%。耐药基因检测结果显示,16株菌中都携带有OXA-51,除分离株15外其他15株分离菌都携带OXA-23,另外两种耐药基因均未检出。结论耐药鲍曼不动杆菌中存在气溶胶,病房环境中气载鲍曼不动杆菌多重耐药比较严重,OXA-23和OXA-51是其耐碳青霉烯酶类药物的重要机制。

耐亚胺培南鲍氏不动杆菌碳青霉烯酶表型与基因型研究

目的研究某综合医院临床分离耐亚胺培南鲍氏不动杆菌碳青霉烯酶基因型携带状况,为临床合理用药及医院感染控制提供依据。方法对2008年1月-2009年10月临床分离的100株耐亚胺培南鲍氏不动杆菌,应用聚合酶链反应检测其金属β-内酰胺酶的耐药基因:blaIMP、blaVIM、blaSIM-1和OXA型碳青霉烯酶的耐药基因:blaOXA-23、blaOXA-24。结果所有受试验菌株均未检测到金属β-内酰胺酶耐药基因blaIMP、blaVIM、blaSIM-1和OXA-24型碳青霉烯酶的耐药基因,PCR检测到79株菌携带blaOXA-23,在阳性菌株中随机选取2株测序,在网上与NCBI在线数据库的已知产OXA-23碳青霉烯酶鲍氏不动杆菌进行比对,与登录号EF534259.1的同源性为100.0%。结论某综合医院临床分离耐亚胺培南鲍氏不动杆菌未产金属β-内酰胺酶,主要耐药机制是产OXA-23型碳青霉烯酶。

下呼吸道感染广泛耐药鲍曼不动杆菌耐药性分析和部分碳青霉烯酶基因检测

目的分析我院下呼吸道感染广泛耐药鲍曼不动杆菌（xDRAB）的耐药性及其OXA-23、OXA-51基因携带情况。方法用K-B纸片扩散法测定42株XDRAB对11种抗菌药物的耐药性；用PCR法检测OXA-23、OXA-51基因存在情况，并对部分基因进行测序。结果42株XDRAB对多黏菌素B无耐药，对米诺环素耐药率低，为2．4％，对头孢哌酮／舒巴坦中介率为16．7％。42株XDRAB中OXA-23和OXA-51基因的携带率均为100Voo。结论多黏菌素B、米诺环素和大剂量头孢哌酮／舒巴坦是治疗XDRAB感染的有效药物。产0XA-23碳青霉烯酶是我院下呼吸道感染的XDRAB对碳青霉烯类抗菌药物耐药的重要机制之一。

REP-PCR对医护人员鼻腔中鲍曼不动杆菌分离株的溯源分析

目的对医护人员鼻腔中的鲍曼不动杆菌进行分离鉴定,对其来源和传播途径进行分析。方法用棉拭子采集10名医护人员和10名非医护人员(大学生)鼻腔样品,分离鉴定非重复鲍曼不动杆菌,采用K-B法检测其对13种常用抗生素的敏感性;利用多重PCR扩增OXA型碳青霉烯酶耐药基因;应用基因外重复回文序列REP-PCR对分离株进行分子多样性分析。结果共分离19株鲍曼不动杆菌,其中分离自医护人员鼻腔12株,分离自非医护人员鼻腔7株。K-B法检测Ab的耐药性,医护人员鼻腔分离株对环丙沙星(CIP)、亚胺硫霉素(IPM)、头孢曲松(CRO)、环磷酰胺(CTX)和新诺明(SXT)耐药率均≥41.7%,非医护人员分离株耐药率均≤3%;耐药基因检测19株菌中都携带OXA-51基因,且医护人员鼻腔分离株携带OXA-23菌株数多于非医护人员鼻腔分离株。另外两种未检出耐药基因(OXA-24和OXA-58)。REP-PCR显示,医护人员鼻腔分离株、非医护人员鼻腔分离株Ab的8种基因型(A-H)中同源性≥90%的有33株菌,占94.29%(33/35)。结论鲍曼不动杆菌不仅能通过直接接触传播,也可能存在气源性传播途径。