猪Ob-Rb基因的克隆与分析

[目的]采用RT-PCR法克隆与分析瘦素受体Ob-RbcDNA序列。[方法]从160日龄初情期的苏姜猪的下丘脑中提取组织总RNA,根据GenBank中猪Ob-RbmRNA全序列设计引物,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)进行cDNA扩增,获得1条343 bp的片段,将PCR产物克隆于pGEM-Teasy载体后进行测序分析。[结果]用紫外分光光度计检测所提取的RNA质量,OD260/OD280=1.9,证明所提RNA的质量较好,无降解和蛋白质污染;用1%的琼脂糖检测所提RNA,有3条清晰的条带,分别是28S、18S、5S,28S与18S浓度比约为2∶1,说明所提的RNA的完整性较好。所获Ob-RbcDNA序列用Blast程序与在GenBank中发表的猪Ob-RbcDNA序列(AF092422)比较表明,其同源性为100%,说明所扩增的序列是正确的。[结论]该研究为进一步探索Ob-Rb基因组织表达和作用机理奠定了理论基础。