基于丝网印刷电极和重氮官能化的赭曲霉素A电化学免疫传感检测方法的建立与应用

该文将赭曲霉素A(ochratoxin A,OTA)抗体和重氮盐接枝在电极表面,构建一种用于OTA快速检测的电化学免疫传感器。通过电沉积的方法将重氮盐修饰于丝网印刷碳电极(screen-printed carbon electrodes,SPCE),接枝的重氮膜作为底层,使羧基官能团暴露在电极表面。然后使用碳二亚胺对羧基进行活化,用交联的方式使抗体和羧基进行酰胺键合从而实现抗体的固定化。利用循环伏安(cyclic voltammetry,CV)法和电化学阻抗谱(electrochemical impedance spectroscopy,EIS)表征电化学免疫传感器的特性。结果表明,在最佳工作条件下,所开发的电化学免疫传感器的线性检测范围为20~200 ng/mL(R2=0.9970),检测限为0.5 ng/mL,在检测加标样品中OTA方面表现出优异的电化学性能,适用于食品中OTA的检测。此外,在干扰物存在的情况下,该传感器对OTA具有高度选择性,且贮存14 d稳定性仍较好。该电化学免疫传感器易于构建、灵敏、快速且稳定,对实际样品中OTA的检测限低,分析时间短和成本低。

基于寡核苷酸链信号放大快速检测谷物中赭曲霉毒素A

该研究以柠檬酸钠还原法制备粒径均一的金纳米粒子(gold nanoparticles,AuNPs),并将AuNPs与赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)抗体通过静电吸附作用偶联,再与6-羧基荧光素(6-carboxyfluorescein,6-FAM)修饰的寡核苷酸链(single stranded DNA,ssDNA)通过金硫键偶联,制备出荧光探针,利用AuNPs近距离淬灭荧光基团信号作用和1,4-二巯基苏糖醇(dithiothreitol,DTT)解离寡核苷酸链作用,建立基于寡核苷酸链信号放大快速检测谷物中OTA的方法。经过优化试验条件,该方法的检测限为0.0044μg/L,特异性良好。使用该方法测定玉米、大米、燕麦3种谷物中的OTA含量,添加回收率为91.2%~102.3%,变异系数小于10%,检测结果与超高效液相色谱串联质谱检测结果接近,证明该方法能够用于检测谷物样品中OTA的含量。

农产品中赭曲霉毒素A免疫层析试纸条快速检测技术研究

基于胶体金免疫层析原理建立了一种快速检测赭曲霉毒素A(ochrotaxin A,OTA)的胶体金试纸条的研制方法,包括胶体金的制备、金标记探针的制备、试纸条各条件参数的测试和优化等。试纸条检测OTA的肉眼可视检测限为0.25ng/mL,检测时间为10min,试纸条能特异性识别OTA而不与赭曲霉毒素B及其他真菌毒素发生交叉反应,使用简单、方便、成本低,重复性好,保质期长,尤其适用于农产品中OTA的现场快速筛查。

基于间接竞争原理的流式微球技术快速检测麦芽中赭曲霉毒素A

建立了一种快速、灵敏检测中药麦芽中赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)含量的间接竞争流式微球方法。麦芽样品经60%甲醇/PBS提取,加入20%甲醇/PBS溶液稀释5倍后,离心取上清液制备样品。在编码荧光微球上偶联牛血清白蛋白-OTA(BSA-OTA)复合物,与样品中OTA竞争结合抗OTA特异性抗体,然后加入FITC-IgG孵育,离心洗涤后,用流式细胞仪检测微球表面的平均荧光强度,实现样品中OTA的准确定性定量测定。本方法检测OTA的半数抑制浓度IC_(50)为1.20 ng/mL,相关系数R^2=0.9892,检出限(IC_(10))为0.12 ng/mL,加样回收率为93.9%~97.4%,RSD<3.6%。16份实际麦芽样品中检测到2个阳性样品,OTA的最高含量为3.83μg/kg,未超出欧盟的OTA限量标准,与液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法检测结果相一致。本方法简单、快速、灵敏、可靠,可拓展用于其它复杂基质中多种真菌毒素的定性与定量检测。

木薯叶粉中赭曲霉毒素A快速检测方法的建立

目的开发快速检测方法检测木薯叶粉中的赭曲霉毒素A(Ochratoxins A,OTA)。方法利用单克隆抗体和酶标抗原,建立了竞争酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)快速检测方法。用不同浓度的氯化钠甲醇水溶液、乙腈和磷酸盐缓冲液等作为样本提取液提取木薯叶粉中OTA,用活性炭和稀释法减少样本基质干扰。结果ELISA灵敏度为0.2 ng/mL,IC50为0.878 ng/mL。木薯叶粉用含氯化钠的70%甲醇水溶液提取,离心后取上清5倍稀释,样本回收率80%~121%,检测限为5μg/kg,满足国标规定食品中OTA不超过5μg/kg的要求,检测时间为30 min,一次可批量检测90个样本。结论用本研究建立的ELISA方法检测木薯叶粉及其食品中的OTA含量结果准确、操作简单、成本低、时间短、重复性好,适合基层批量筛查。

赭曲霉毒素A时间分辩荧光定量检测体系适用性评价

目的验证赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)时间分辨荧光免疫定量检测体系对谷物中赭曲霉毒素A快速检测的适用性。方法该时间分辨荧光免疫定量检测体系包括时间分辨荧光免疫层析检测卡和时间分辩荧光定量检测仪。时间分辨荧光速测仪内置标准曲线,直接得出待测样品中赭曲霉毒素A的含量。对待测样品进行低、中、高3个浓度添加,每个浓度分为7份,由不同人员检测。同时,对实际阳性样品进行检测。结果对谷物做赭曲霉毒素A添加回收率实验,回收率在98%~113%之间;批内变异系数<15%。在实际样品的检测中,时间分辨荧光定量检测卡得出的数值,与质控样本标识的值没有显著性差异。结论时间分辨荧光定量检测系统检测快速、准确,稳定、检测设备小型化、联网可实现数据上传,适用于大批量谷物样品的快速检测和风险评估。

基于侧向层析原理的赭曲霉毒素A快速检测试纸条的研制

针对霉菌毒素精准检测技术的开发对于保障食品安全至关重要。利用胶体金与赭曲霉毒素A单抗偶联物和赭曲霉毒素A-BSA偶联物(OTA-BSA),开发了一种快速检测赭曲霉毒素A的方法。研究结果表明:1当OTA-BSA配制终质量浓度为4.8 g·L^(-1),质控线用羊抗鼠IgG配制终质量浓度为1.5 g·L^(-1),硝酸纤维素(NC)膜的包被量为1.0μL·cm^(-1)时呈现最清晰、最均匀的条带。2赭曲霉毒素A胶体金快速检测试纸条的灵敏度达到1.0μg·L^(-1),检测时间仅为5 min,非常适合现场快速检测。该检测试纸条具有携带方便、灵敏度高、特异性强等优点。由于本方法检测时间短,灵敏度高,与传统的仪器和酶联免疫检测方法相比,在野外和临床检测中更具有推广应用价值。

赭曲霉毒素A快速检测技术研究进展

赭曲霉毒素A危害大且污染范围广,快速、灵敏的赭曲霉毒素A的检测方法可以有效监控其污染。本文综述了赭曲霉毒素A的快速检测技术研究进展,集中在酶联免疫技术、胶体金免疫层析技术、免疫亲和柱层析净化-荧光光度法联用技术以及其较新的非免疫技术等,并对其中存在的问题和发展方向进行了讨论与展望。

胶体金免疫层析法快速检测赭曲霉毒素A研究

该研究应用胶体金免疫层析技术建立一种快速检测食品和饲料中赭曲霉毒素A方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,标记抗赭曲霉毒素A单克隆抗体,标记胶体金抗体喷涂于玻璃纤维上,赭曲霉毒素A偶联抗原OTA-OVA和二抗兔抗鼠IgG分别喷涂于硝酸纤维膜上作为检测限和质控线,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装成试纸条并装卡。测试结果表明,赭曲霉毒素A快速检测试纸条灵敏度为5 ng/mL,检测时间为10 min,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。该法简单方便,非常适于现场快速检测赭曲霉毒素A。

赭曲霉毒素A时间分辨荧光侧流层析试纸条的研究

目的构建一种基于时间分辨荧光纳米微球的赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)侧流层析试纸条。方法基于免疫层析原理,以时间分辨荧光纳米微球为信号探针,降低非特异性荧光的干扰,提高检测灵敏度,并通过优化样品提取液和样品稀释液,进一步提高现场检测OTA的灵敏度和准确性。结果OTA在1.0~50.0μg/kg范围内,T线和C线荧光强度比值与OTA浓度的对数线性关系良好,相关系数r 2为0.9981~0.9998。不同基质中OTA的检出限和定量限分别为0.401~0.614μg/kg和0.973~1.617μg/kg,加标回收率为89.53%~118.37%,相对标准偏差(relative standard deviations,RSDs)小于12%(n=3),且与将呕吐毒素、伏马菌素B1、黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和T-2毒素的交叉反应率均小于5%,特异性良好。OTA侧流层析试纸条基于荧光定量快速检测技术平台可在8 min内快速准确地定量测定出待测样本中OTA含量。结论本研究所制备的时间分辨荧光侧流层析试纸条可实现玉米、小麦和饲料中OTA的快速定量检测,并具有成本低、灵敏度高、操作简便、准确高、重复性好、特异性好的优点,可满足国内外OTA检测的技术要求,为真菌毒素的快检技术的发展提供了技术支撑。

构建电化学适配体传感器快速检测中药材中的赭曲霉毒素A

利用壳聚糖(CS)、还原氧化石墨烯(rGO)与氮掺杂多壁碳纳米管(N-MWCNTs)合成N-MWCNTs-rGO-CS复合材料,制备修饰电极,结合赭曲霉毒素A(OTA)的特异性适配体,构建高灵敏度电化学生物传感器,并用于中药中OTA的含量测定。在最优条件下,峰电流变化值与OTA浓度对数值的线性响应范围为2.3 pmol/L~2.3 nmol/L,检测限为0.53 pmol/L。应用该方法对中药饮片中OTA的含量进行加标回收实验,回收率在97.6%~103.2%之间。该方法有望用于中药材中OTA污染的快速检测。

赭曲霉毒素A快速检测方法研究进展及其在中药中的应用前景

赭曲霉毒素A(OTA)是一类主要由曲霉属和青霉属等真菌产生的次级代谢产物,具有强烈的肾毒性,致畸、致癌、致突变等作用。研究表明OTA不仅广泛污染于食品饲料和农作物中,近年来在香辛料、甘草等中草药中也被证实广泛存在。鉴于OTA的普遍性和危害性,该文分别综述了可视化试纸条、流式微球技术、电化学传感器、表面增强拉曼光谱等技术在OTA快速检测上的应用,预期为实现OTA检测快速化、操作简单化、仪器小型化的高通量检测研究和应用提供参考。