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过表达Oct4B1诱导结直肠癌SW480细胞发生上皮间质转化 被引量:4
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作者 陈奕霖 文坤明 +2 位作者 胡水清 陈正权 曾庆良 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期656-659,664,共5页
目的:探讨Oct4B1基因过表达是否诱导人结直肠癌SW480细胞发生上皮间质转化(EMT)及其可能的机制。方法:用带G418抗性的Oct4B1基因过表达质粒及阴性对照质粒转染人结直肠癌SW480细胞株,分别称为实验组(SW480-Oct4B1)及对照组(SW480-NC),... 目的:探讨Oct4B1基因过表达是否诱导人结直肠癌SW480细胞发生上皮间质转化(EMT)及其可能的机制。方法:用带G418抗性的Oct4B1基因过表达质粒及阴性对照质粒转染人结直肠癌SW480细胞株,分别称为实验组(SW480-Oct4B1)及对照组(SW480-NC),转染成功后用G418筛选建立稳定转染的细胞株,对两种稳定转染细胞进行如下检测:(1)RTq PCR检测Oct4B1的mRNA水平;(2)划痕实验和Transwell小室实验检测迁移和侵袭能力;(3)Western blot检测EMT相关标记物E-cadherin、N-cadherin及Vimentin蛋白表达;(4)RT-q PCR和Western blot检测EMT转录因子Twist的mRNA及蛋白表达。结果:稳定转染细胞株建立后,实验组与对照组比较:Oct4B1基因表达水平明显升高(P<0.01);细胞迁移明显增强(P<0.01);细胞侵袭能力明显提高(P<0.01);上皮标记物E-cadherin蛋白表达量明显下降(P<0.01);而间质标记物N-cadherin及Vimentin蛋白表达量明显上调(P<0.01);Twist的mRNA及蛋白表达量均明显升高(P<0.01)。结论:过表达Oct4B1基因可诱导人结直肠癌SW480细胞发生EMT,增强细胞迁移及侵袭能力,其分子机制可能与提高Twist表达有关。 展开更多
关键词 结直肠癌细胞 oct4b1 上皮间质转化 TWIST
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Oct4B1在结直肠癌干细胞中的表达及意义 被引量:3
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作者 程家平 黎江 +3 位作者 苏弦 陈奕霖 曾庆良 文坤明 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期794-797,共4页
目的:探讨胚胎干细胞转录因子Oct4的亚型Oct4B1在结直肠癌干细胞中的表达及其可能的作用。方法:以结直肠癌细胞株SW480细胞采用悬浮培养法培养出的3D微球体及其亲本细胞SW480为研究对象,采用细胞分化实验、细胞软琼脂克隆实验、流式细... 目的:探讨胚胎干细胞转录因子Oct4的亚型Oct4B1在结直肠癌干细胞中的表达及其可能的作用。方法:以结直肠癌细胞株SW480细胞采用悬浮培养法培养出的3D微球体及其亲本细胞SW480为研究对象,采用细胞分化实验、细胞软琼脂克隆实验、流式细胞技术检测干细胞标记物CD133、CD44的表达以验证3D微球体是否富集肿瘤干细胞(CSCs),实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测两种细胞Oct4B1 mRNA表达水平。结果:3D微球体具有分化为普通肿瘤细胞的能力,相对于亲本细胞,3D微球体体外克隆形成能力明显增强(P<0.01),干细胞标记物CD133、CD44明显高表达(P<0.01),Oct4B1 mRNA表达水平明显增高(P<0.01)。结论:干细胞调控因子Oct4的亚型Oct4B1在富集结直肠癌CSCs的3D微球体中表达明显增高,其可能参与结直肠癌CSCs的调控。 展开更多
关键词 结直肠癌 肿瘤干细胞 OCT4 oct4b1
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miR-299-3p靶向OCT4B1调控结直肠癌细胞SW480增殖、迁移、侵袭及凋亡 被引量:4
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作者 符国宏 赵宇青 +3 位作者 郑杨慈 吴开李 李立新 王连臣 《中南医学科学杂志》 CAS 2022年第6期801-804,822,共5页
目的探讨miR-299-3p靶向调控OCT4B1对结直肠癌细胞SW480增殖、迁移、侵袭及凋亡的作用。方法将SW480细胞分为NC组、mimics组、inhibitor组,采用MTT法检测细胞活力,结晶紫染色检测单克隆形成数,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检... 目的探讨miR-299-3p靶向调控OCT4B1对结直肠癌细胞SW480增殖、迁移、侵袭及凋亡的作用。方法将SW480细胞分为NC组、mimics组、inhibitor组,采用MTT法检测细胞活力,结晶紫染色检测单克隆形成数,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞侵袭能力,qRT-PCR测定细胞miR-299-3p和OCT4B1 mRNA,蛋白免疫印迹法测定OCT4B1蛋白表达。荧光素酶报告基因检测miR-556-3p对SW480细胞OCT4B1活性的调控作用。结果与NC组比较,miR-299-3p水平、细胞凋亡率mimics组升高,inhibitor组降低,且mimics组高于inhibitor组(P<0.05);OCT4B1 mRNA和蛋白水平、细胞穿膜数、细胞存活率、单克隆形成数mimics组降低,inhibitor组升高,且mimics组低于inhibitor组(P<0.05)。结论miR-299-3p过表达可抑制结直肠癌细胞SW480增殖、迁移、侵袭,促进其凋亡,可能与miR-299-3p抑制OCT4B1 mRNA和蛋白表达有关。 展开更多
关键词 miR-299-3p oct4b1 结直肠癌 细胞增殖 细胞迁移 细胞侵袭 细胞凋亡
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抑制OCT4-pg5与OCT4B表达对膀胱癌顺铂敏感性的影响 被引量:7
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作者 周五二 杨成林 +5 位作者 王尉 聂海波 张小明 肖远松 王葵 曹智 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期176-181,共6页
目的探讨八聚体结合转录因子4假基因5(OCT4-pg5)与八聚体结合转录因子4B(OCT4B)的表达对人膀胱癌细胞顺铂敏感性的影响。方法采用反转录实时定量PCR(RT-qPCR)检测OCT4-pg5、OCT4B在膀胱癌细胞及组织中的表达;选择高表达细胞株,通过RNA... 目的探讨八聚体结合转录因子4假基因5(OCT4-pg5)与八聚体结合转录因子4B(OCT4B)的表达对人膀胱癌细胞顺铂敏感性的影响。方法采用反转录实时定量PCR(RT-qPCR)检测OCT4-pg5、OCT4B在膀胱癌细胞及组织中的表达;选择高表达细胞株,通过RNA干扰技术下调其OCT4-pg5、OCT4B表达,细胞借此分为si-OCT4-pg5组、si-OCT4B组、si-OCT4-pg5/si-OCT4B组及对照组;采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测各组细胞顺铂半数抑制浓度(IC50);RT-qPCR及Western blotting检测细胞OCT4-pg5、OCT4B表达情况;流式细胞术检测细胞凋亡及周期分布情况。结果OCT4-pg5与OCT4B在膀胱癌T24细胞及膀胱癌组织中高表达,且两者在癌组织中的表达呈正相关关系(r=0.73,P<0.01)。干扰OCT4-pg5、OCT4B表达可显著降低T24细胞的顺铂IC50,二者呈现协同效应[(29.41±3.84)μmol/L vs.(85.00±7.63)μmol/L,P<0.01]。与对照组相比,si-OCT4-pg5转染可以明显降低T24细胞OCT4B的表达水平。OCT4-pg5、OCT4B下调可明显增强T24细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性,使S期细胞分布减少,细胞阻滞在G0/G1期。结论抑制OCT4-pg5、OCT4B表达可增加人膀胱癌T24细胞的顺铂敏感性。 展开更多
关键词 膀胱癌 OCT4-pg5 oct4b 顺铂 药物敏感性
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Oct4B1基因过表达增强结直肠癌SW620细胞对奥沙利铂的耐药性及其机制 被引量:4
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作者 陈正权 文坤明 +2 位作者 陈奕霖 胡水清 曾庆良 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期858-861,共4页
目的 探讨Oct4B1基因过表达是否增强结直肠癌SW620细胞对奥沙利铂耐药性及其机制,以及与诱导细胞上皮-间充质转化(EMT)过程的关系.方法 实验分组:将SW620细胞随机平均分为实验组及对照组、实验组(SW620-Oct4B1):转染带G418抗性的O... 目的 探讨Oct4B1基因过表达是否增强结直肠癌SW620细胞对奥沙利铂耐药性及其机制,以及与诱导细胞上皮-间充质转化(EMT)过程的关系.方法 实验分组:将SW620细胞随机平均分为实验组及对照组、实验组(SW620-Oct4B1):转染带G418抗性的Oct4B1过表达质粒;对照组(SW620-NC):转染带G418抗性的阴性对照质粒;筛选合适浓度G418建立稳定转染细胞株.对稳定转染两组细胞作如下检测:(1)噻唑蓝(MTT)法检测细胞对不同浓度奥沙利铂的敏感性;(2)Western blot检测P-糖蛋白(P-gp)及EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达;(3)划痕实验检测12、24 h迁移能力;(4)Transwell小室检测24 h时侵袭能力.结果 实验组与对照组比较:(1)对奥沙利铂敏感性实验组明显低于对照组(t =8.889、5.427、9.678、4.459、5.362,P=0.001、0.006、0.001、0.011、0.006);(2)P-gp表达两组分别为0.401、0.439、0.419(0.420±0.020)及0.099、0.110、0.120(0.110 ±0.010),实验组明显高于对照组(t=24.723,P=0.000);(3)12 h伤痕愈合率分别为32.196%、32.382%、33.441% (32.670 ±0.670)%及23.049%、25.286%、23.674% (24.000±1.150)%,实验组明显高于对照组(f=11.245,P=0.001);24 h伤痕愈合率分别为67.048%、68.650%、66.291% (67.330±1.200)%和49.161%、47.632%、53.203%(50.000 ±2.880)%.实验组显著高于对照组(t=9.620,P=0.001);(4)24 h两组透膜细胞数分别为400.105、407.500、384.300(397.300±11.850)个及205.641、186.244、215.02(202.300±14.680)个,实验组显著多于对照组(t=17.905,P=0.000);(5)E-cadherin表达两组分别为0.186、0.190、0.223(0.200 ±0.020)及0.530、0.531、0.529(0.530 ±0.010),实验组明显低于对照组(t=28.143,P=0.000),而N-cadherin表达两组分别为0.949、0.935、0.906(0.930±0.020)及0.687、0.648、0.675(0.670±0.020),实验组显著高于对照组(t=15.181,P=0.000).结论 Oct4B1基因过表达能增强结直肠癌SW620细胞对奥沙利铂耐药性,其机制可能与诱导细胞EMT过程有关. 展开更多
关键词 结直肠癌 oct4b1 上皮-间充质转化 耐药性
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沉默Oct4B1基因对结直肠癌耐药细胞上皮间质转化逆转实验研究 被引量:1
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作者 胡水清 文坤明 陈奕霖 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2017年第20期1432-1436,共5页
目的研究已证实Oct4基因可调控肿瘤细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)。本研究探讨沉默Oct4的亚型Oct4B1能否逆转结直肠癌耐奥沙利铂细胞株SW620/OxR的EMT。方法分别采用带G418抗性的Oct4B1-shRNA质粒和阴性对... 目的研究已证实Oct4基因可调控肿瘤细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)。本研究探讨沉默Oct4的亚型Oct4B1能否逆转结直肠癌耐奥沙利铂细胞株SW620/OxR的EMT。方法分别采用带G418抗性的Oct4B1-shRNA质粒和阴性对照质粒转染SW620/OxR细胞,转染成功后通过G418筛选建立稳定转染细胞株,分别称为实验组(RNAi组)及对照组(Ctrl组)。对两组细胞作如下检测,(1)RT-qPCR检测Oct4B1的mRNA水平;(2)划痕实验检测细胞迁移能力;(3)Transwell小室检测细胞侵袭能力变化;(4)蛋白质印迹法检测EMT标记物E-钙粘蛋白(E-cadherin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平。结果RNAi组与Ctrl组比较,(1)Oct4B1mRNA表达明显下调,P<0.05;(2)细胞迁移能力明显减弱,P<0.05;(3)细胞侵袭能力显著降低,P<0.01;(4)上皮标记物E-cadherin明显增高(P<0.05),间质标记物N-cadherin(P<0.01)和Vimentin(P<0.05)则明显下调。结论沉默Oct4B1基因可逆转SW620/OxR细胞EMT。 展开更多
关键词 oct4b1 结直肠癌 上皮间质转化 耐药
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Role of Oct4 in the early embryo development 被引量:1
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作者 Guangming Wu Hans R Schöler 《Cell Regeneration》 2014年第1期50-59,共10页
Oct4 is a key component of the pluripotency regulatory network,and its reciprocal interaction with Cdx2 has been shown to be a determinant of either the self-renewal of embryonic stem cells(ESCs)or their differentiati... Oct4 is a key component of the pluripotency regulatory network,and its reciprocal interaction with Cdx2 has been shown to be a determinant of either the self-renewal of embryonic stem cells(ESCs)or their differentiation into trophoblast.Oct4 of maternal origin is postulated to play critical role in defining totipotency and inducing pluripotency during embryonic development.However,the genetic elimination of maternal Oct4 using a Cre-lox approach in mouse revealed that the establishment of totipotency in maternal Oct4–depleted embryos was not affected,and that these embryos could complete full-term development without any obvious defect.These results indicate that Oct4 is not essential for the initiation of pluripotency,in contrast to its critical role in maintaining pluripotency.This conclusion is further supported by the formation of Oct4-GFP–and Nanog-expressing inner cell masses(ICMs)in embryos with complete inactivation of both maternal and zygotic Oct4 expression and the reprogramming of fibroblasts into fully pluripotent cells by Oct4-deficient oocytes. 展开更多
关键词 OCT4 oct4b TOTIPOTENCY PLURIPOTENCY EMBRYO DEVELOPMENT
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