长蛸(Octopus variabilis)不同地理群体遗传多样性的ISSR分析

利用ISSR分子标记技术获得长蛸的ISSR-PCR最优反应体系,并对大连、烟台、青岛、连云港、舟山、温州、厦门7个群体168个个体进行遗传多样性分析。结果表明,7个引物在7个群体中共扩增出118条重复性好且带型清晰的ISSR扩增带,其中多态条带为55条,多态性比例达46.61%。在物种水平上的Nei’s基因多样性指数和Shannon’s信息指数分别为0.3145和0.4766,在群体水平上分别为0.1573和0.2355。7个群体可明显聚类为2个类群,AMOVA分子变异分析发现,长蛸54.64541%的变异发生在群体间,45.35459%的变异发生在群体内。群体间的遗传分化系数Gst为0.5067和由Gst估算的基因流Nm为0.4867<1。分析显示长蛸具有较高遗传多样性水平,但群体间已经出现了较大程度的遗传分化。

栓皮栎ISSR反应体系的建立

以栓皮栎叶片为试材,采用单因素试验设计对栓皮栎ISSR反应条件进行系统优化,建立了栓皮栎ISSR的最佳反应体系和扩增程序。结果表明：PCR反应体系总体积为25μL,其中10×Buffer 2.5μL,30ng模板DNA,1.5UTaq聚合酶,2.5mmol/L Mg2＋,0.6μmol/L引物,0.3mmol/L dNTPs;扩增程序：94℃预变性1min;94℃变性30s,51.5～59.0℃退火60s,72℃延伸2min,35个循环;最后72℃延伸5min。在此条件下从100条ISSR引物中筛选出12条多态性好、稳定性高的引物对陕西省天然群体共22个栓皮栎个体的DNA进行扩增,共得到166个位点,其中142个为多态位点,多态位点百分率为85.54%,Nei指数为0.2928,Shannon信息指数为0.4381,表明栓皮栎的遗传多样性处于较高水平。