Reevaluation of the Holotype of Odorrana schmackeri Boettger,1892(Amphibia:Anura:Ranidae) and Characterization of One Cryptic Species in O.schmackeri sensu lato through Integrative Approaches

The Odorrana schmackeri sensu la to is a group of cascade frogs that are widely distributed in southern China.However,their taxonomy has long been unresolved and several cryptic species have been reported in the past decade.Previous analyses revealed the existence of three sympatrie species(i.c,O.schmackeri,O.hejiangensis and O.sp2) at the type locality of O.schmackeri(Gaojiayan Town,Yichang City,Hubei Province,China).However,the lack of an original description for the holotype specimen(SMF6241) of O.schmackeri poses a confusing and controversial problem in species nomination within this group.Here,we reevaluate the taxonomic affinities of SMF6241 and examine the distinctness of O.sp2 based on specimens from the type locality.We use integrative approaches that combine morphology with 10 microsatellite loci and bioacoustics.Canonical discriminant analysis of morphological characteristics revealed three distinct groupings(i.e.,O.schmackeri,O.hejiangensis and O.sp2) and attributed SMF6241 to O.schmackeri.Genetic clustering analysis of nuclear DNA also identified three corresponding clusters.In addition,analysis of interspecific variation in morphometrics and acoustics showed divergence between O.sp2 and its sympatric congeners.All lines of evidence from morphological,molecular and bioacoustic approaches suggest the species status of O.sp2,namely Odorrana ichangensis Chen,sp.nov.Overall,this study resolves the taxonomic assignment of the holotype of O.schmackeri and provides an example for species delimitation using integrative approaches.

Sexual Dimorphism in Mass of the Hindlimb Muscles of the Piebald Odorous Frog(Odorrana schmackeri)

Male-biased sexual dimorphism in hind limb muscles is widespread in anuran species where scramble competition is common among males. Such sexual difference is thought to result from sexual selection. In this view, we tested the differences in muscle mass between the sexes and between amplectant and non-amplectant males by quantifying the mass of four hindlimb muscles （triceps femoris, sartorius, gracilis and plantaris longus） of females and males of Odorrana schmackeri. The results showed that females significantly exceeded males for muscle triceps femoris, gracilis, plantaris longus and total mass when controlled for body size. There are no significant differences between amplectant and non-amplectant males. It is probable that the maintenance of the amplectant position in O. schmackeri may depend on the strength of hindlimb muscles in females to support the pair.

花臭蛙皮肤分泌物中抗菌肽Odorranin的分离纯化与表征

从花臭蛙(Odorrana schmackeri)皮肤分泌液中分离得到一类(包含三种)新型的抗菌肽。经过一级结构解析和抗菌活性表征后,命名为Odorranin(1,2,3)。该类抗菌肽由21个氨基酸组成。Odorranin对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有明显的抑制活性,其中Odorranin 3对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别为4.2、6.06μg/mL。

华东四省天目臭蛙分类修订及分布格局

运用形态学比较和12S mt DNA序列比对,对华东4省原记载的花臭蛙Odorrana schmackeri地理种群与天目臭蛙O.tianmuii、黄岗臭蛙O.huanggangensis及花臭蛙模式产地湖北宜昌种群进行比较研究。浙江、安徽、江苏、江西(三清山)花臭蛙形态学特征与天目臭蛙相吻合。基于Kimura 2-parameter模型计算花臭蛙各地理种群与天目臭蛙、黄岗臭蛙及花臭蛙湖北宜昌种群的遗传距离,结果显示,浙江、安徽、江苏、江西(三清山、彭泽)花臭蛙与湖北宜昌种群的遗传距离为0.067~0.069,与黄岗臭蛙的遗传距离为0.027~0.029,与天目臭蛙的遗传距离仅为0~0.001。因此,长江中下游以南、江南丘陵东段安徽南部、江苏、浙江、江西东北部信江以北、鄱阳湖以东的低山丘陵地带,原记录的花臭蛙应修订为天目臭蛙;江西省东北部信江以南的武夷山区为黄岗臭蛙分布范围,花臭蛙则分布于赣江鄱阳湖以西的赣西山地。赣江以东、抚河以西以及闽东丘陵地区花臭蛙的分类归属尚待确定,华东地区花臭蛙复合体的物种分化是否与水系造成的地理阻隔相关,有待深入研究。

浙江省古田山自然保护区3种无尾两栖动物肥满度的比较

为了解古田山自然保护区两栖动物的营养状况和健康状况,于2014年7-8月,在保护区内分别采集了华南湍蛙287只、淡肩角蟾53只和花臭蛙111只,采用非伤害性的形态学方法比较研究了其肥满度.结果显示:不同性别和不同年龄组的3种无尾两栖类的肥满度均存在显著性差异,雌性个体肥满度均优于雄性个体,而成体的肥满度则优于亚成体;此外,3个不同物种间的肥满度也表现出显著性差异,雄性的华南湍蛙和雌性的花臭蛙肥满度最佳,而淡肩角蟾肥满度最差.

噪音环境下花臭蛙求偶鸣声特征分析

2012年7月份,在黄山浮溪地区利用超声录音设备录制并分析了繁殖季节雄性花臭蛙（Odorrana schmackeri）个体的求偶鸣声。观察发现花臭蛙繁殖活动主要集中在7月中旬,繁殖高峰期活动无昼夜规律,全天均可见求偶鸣叫及抱对产卵等行为,并且多在浅水滩处活动。花臭蛙鸣声根据音节数和声谱特征可分为4种类型：即单音节音、婴儿音、双音节音和多音节断奏音,其中,单音节音、双音节音和婴儿音较为常见。利用Selena软件给出4种声音的语图以及各自对应的能谱图,利用Sound Analysis pro v1.2对单音节音、双音节音和婴儿音的鸣声特征参数进行定量分析,分析的声音参数包括鸣叫持续时间、音节数、音节持续时间、音节间隔、主频、脉冲率等。结果表明,花臭蛙鸣声的主频范围为1.8-4.5 k Hz（n=65）。鸣声不包括超声组分,主频峰值（3.1±0.7）k Hz,与前人电生理实验所得花臭蛙听觉敏感峰值一致,说明花臭蛙主要在这一频段进行通讯。对3种常见鸣叫音声音参数的单因素方差分析结果表明,双音节音与单音节音和婴儿音在声音持续时间上存在显著性差异（P〈0.01）,双音节音和单音节音在第二谐波声强上也具有显著性差异（P=0.01）。花臭蛙的双音节音在3种常见鸣叫音中具有最长的持续时间,为（99.5±8.4）ms,故推测,双音节音为花臭蛙繁殖期主要求偶鸣声,并通过其鸣声时长的变化来体现自身品质的好坏。

福建省花臭蛙复合体组成及天目臭蛙分布新记录记述

由于没有明显的地理阻隔,闽浙丘陵地带花臭蛙复合体(Odorrana schmackeri species complex)的物种组成、分布界限、分布格局存在争议。2016年9月至10月对闽浙交界地带福建省宁德市屏南县和南平市浦城县进行野外考察、样本收集,通过扩增样本线粒体12S rRNA和16S rRNA基因并与黄岗臭蛙(O.huanggangensis)、天目臭蛙(O.tianmuii)和花臭蛙(O.schmackeri)的序列进行比对,构建系统发生关系、计算遗传距离,结合形态学鉴定和形态量度分析,对福建省花臭蛙复合体组成进行了研究。结果显示,福建省花臭蛙复合体包括黄岗臭蛙和天目臭蛙,其中黄岗臭蛙分布于武夷山山区、闽江和九龙江流域,天目臭蛙仅分布于衢江(钱塘江主要支流)的次源地——浦城县管厝乡东北部,为福建省臭蛙类分布新记录种。本研究增添了福建省两栖动物多样性并细化了黄岗臭蛙和天目臭蛙在该省分布范围的认识,但是浦城县西北端长江流域的花臭蛙复合体的物种组成仍需进一步确认。水系和流域是否影响花臭蛙复合体物种分化和分布格局以及这些近缘物种的物种形成机制有待进一步研究。

湖南省花臭蛙复合体分类及分布格局

运用形态特征系统聚类和分子系统学分析,研究先前报道的湖南省花臭蛙(Odorrana schmackeri)各地理种群的分类组成及其分布格局。结果显示,原认定的花臭蛙湖南省各地理种群已分化为花臭蛙和黄岗臭蛙(O.huanggangensis)两个物种。分布于湘西南及南部雪峰山和南岭的花臭蛙种群应修订为黄岗臭蛙,为湖南省臭蛙属物种新发现,湘西北及湘东南罗霄山脉的种群为花臭蛙,黄岗臭蛙与花臭蛙在张家界市武陵源景区同域分布。湘西北武陵山与雪峰山之间以及湘中丘陵地带花臭蛙种群的分类归属,黄岗臭蛙和花臭蛙在湖南省分布格局的形成以及同域分布的机制值得探讨。

千岛湖花臭蛙个体发育过程中的食性变化

个体发育过程中的食性变化普遍存在于无尾目类群中。我们于2012～2013年，对千岛湖地区的花臭蛙（Odorranaschmackeri）进行抓捕采样，测量体长、体重以及头宽等身体指标，同时鉴定胃内食物并加以测量和分析。调查期间，共捕获花臭蛙838只，测量胃内食物2178个。结果表明，花臭蛙食物种类丰富，食物类群隶属78科，但食谱宽度较窄。随着花臭蛙体长增加，其摄食的食物总体积和单个食物体积显著增加，但摄食食物数量显著减少。同时，不同体长的花臭蛙对不同食物的摄食频率也有不同。半翅目、膜翅目以及等翅目等小型食物的摄食频率随花臭蛙体长的增加而变小，而直翅目以及鳞翅目幼虫等大型食物的摄食频率随花臭蛙体长的增加而变大。综上所述，千岛湖地区花臭蛙在个体发育过程中存在食性变化，因此在以后无尾目类群的食性研究中，应将个体发育的因素考虑在内。