分子鉴定2种猪食道口线虫熔解曲线分析试验的建立

基于猪有齿食道口线虫和四棘食道口线虫IGS rDNA序列的遗传变异情况,于种内保守、种间差异明显的序列片段设计1对引物,建立了区分2种猪食道口线虫的熔解曲线分子鉴定方法。研究结果显示,该方法可通过熔解曲线差异而准确鉴定猪食道口线虫2个种,与其他线虫和吸虫无交叉反应,特异性良好;能检测猪食道口线虫单虫卵样品和FTA卡片的DNA模板。该研究为猪食道口线虫种类准确鉴定提供了一种新的准确、敏感、特异且快速的分子手段。

有齿食道口线虫msp基因的克隆与表达

以有齿食道口线虫为研究对象,扩增出其雄虫的msp基因,克隆至质粒载体pTrcHis-B中,构建了msp基因重组原核表达载体.经测序表明,目的基因msp已以正确的阅读框架整合至表达质粒中.应用大肠杆菌Top10为宿主菌,通过IPTG诱导方法,表达包含msp基因产物的融合蛋白,经SDS-PAGE分析,表明表达蛋白大小正确,表达量高.