miR-155反义寡核苷酸对乳腺癌HS578T细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨微小RNA 155(microRNA-155,miR-155)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:设计合成全硫代磷酸化修饰的miR-155 ASO,通过LipofectamineTM2000(Invitrogen)转染于乳腺癌HS578T细胞。CCK-8法检测乳腺癌细胞转染后的增殖情况,流式细胞仪分析转染率并检测细胞凋亡情况。结果:流式细胞仪检测转染率达70.5%。CCK-8试验结果显示转染miR-155 ASO后,HS578T细胞存活数明显低于空白组和脂质体组。流式细胞仪检测显示转染miR-155ASO后,HS578T细胞凋亡数明显增加。结论:miR-155 ASO可抑制乳腺癌HS578T细胞增殖,并促进其凋亡。提示miR-155可能成为乳腺癌治疗的靶基因。

miR-155种子序列的反义寡核苷酸对抗多发性骨髓瘤的作用

目的:探讨针对miR-155种子序列的微小反义核酸(tiny antimiR-155,t-antimiR-155)对多发性骨髓瘤细胞的抑制效应。方法:化学合成t-anti miR-155,通过脂质体转染多发性骨髓瘤RPMI-8266细胞株;实验分为t-antimiR-155组、随机对照组(SCR)和空白对照组;通过MTT法检测细胞增殖抑制率;使用细胞集落形成实验观察集落形成情况;流式细胞术(Annexin V/PI双染法)检测细胞凋亡率。结果:(1)MTT筛选t-antimiR-155显著抑制RPMI-8266细胞生长的浓度,t-antimiR-155的最佳浓度是0.4μmol/L,最佳作用时间是转染后48 h。(2)细胞集落形成实验显示,相比于SCR组,t-antimiR-155组细胞形成集落的能力减弱,集落形成率显著降低。(3)相比于SCR组,t-antimiR-155组的细胞凋亡率明显增加,差异显著。结论:t-antimiR-155可能通过干扰miR-155表达有效抑制多发性骨髓瘤细胞的进展;miR-155可能作为多发性骨髓瘤基因治疗的潜在靶点。

微小RNA-155反义寡核苷酸对乳腺癌MDA-MB-157细胞及裸鼠移植瘤的作用

目的:探讨微小RNA-155(microRNA-155,miR-155)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)对乳腺癌MDA-MB-157细胞增殖、凋亡及裸鼠移植瘤的作用。方法:设计合成化学修饰的miR-155 ASO,通过LipofectamineTM 2000转染MDA-MB-157细胞,激光共聚焦检测转染率,real-time PCR测定转染后miR-155表达水平的变化,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,观察miR-155 ASO对裸鼠成瘤能力的影响,免疫组织化学法检测瘤体组织Caspase-3的表达。结果:激光共聚焦检测转染率达80%以上。转染miR-155 ASO后,miR-155表达明显下降,细胞增殖能力降低,凋亡增加。miR-155 ASO能明显抑制裸鼠移植瘤生长,抑制率为52.98%,并且能显著增加Caspase-3的表达。结论:miR-155 ASO能显著下调miR-155的表达水平,继而抑制乳腺癌MDA-MB-157细胞的增殖,促进其凋亡;并且通过增加靶基因Caspase-3的表达,抑制裸鼠移植瘤的生长,为miR-155作为乳腺癌治疗靶点提供了实验依据。

miR-155反义寡核苷酸对内毒素诱导急性肺损伤小鼠的保护作用

目的 通过建立微小RNA（miRNA）反义寡核苷酸（ASO）慢病毒表达载体,探讨miR-155 ASO对急性肺损伤（ALI）小鼠的保护作用.方法 设计并合成miR-155 ASO,使用BamHⅠ和NheⅠ双酶切后连接产生慢病毒表达载体,聚合酶链反应（PCR）筛选阳性克隆,测序并测定病毒滴度.按随机数字表法将54只4～6周龄的雄性BALB/c小鼠平均分为3组,均经腹腔注射脂多糖（LPS）10 mg/kg制备ALI动物模型.3组分别于制模前24 h经尾静脉注射含1×108/mL pmiR-155-ASO病毒的磷酸盐缓冲液（PBS）200μL（pmiR-155-ASO组）,或含1×108/mL pSMPUW-miR-GFP空载体病毒的PBS 200μL（pmiR-cont组）,或等量PBS（PBS组）.每组中10只小鼠用于观察7 d存活率;剩余8只小鼠于制模后取血标本及肺组织,用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清炎性因子水平;用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肺组织miR-155表达;镜下观察肺组织病理学改变及巨噬细胞分布.结果 pmiR-cont组与PBS组各指标比较差异均无统计学意义.pmiR-155-ASO组肺组织中miR-155成熟体的表达水平较pmiR-cont组明显降低（2-ΔΔCt：4.92±0.72比15.38±0.60,P〈0.05）.与pmiR-cont组比较：给予miR-155ASO预处理后ALI小鼠损伤程度明显改善,7 d存活率显著提高（72.1％比61.9％,P〈0.05）;肺大体观察显示肺组织充血明显减轻,肺湿/干重（W/D）比值明显下降（4.50±0.13比5.64±0.61,P〈0.05）;苏木素-伊红（HE）染色显示肺组织炎性细胞浸润减少,免疫荧光法检测显示肺组织巨噬细胞浸润数量明显减少;血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）水平明显降低〔TNF-α（ng/L）：379.8±48.9比495.9±33.3,IL-6（ng/L）：262.3±61.8比355.4±22.6,均P〈0.05〕,而IL-10水平无明显改变（ng/L：143.6±32.5比140.4±22.3,P〉0.05）.结论 miR-155 ASO具有抑制LPS诱导ALI小鼠炎症反应、改善预后的作用.

Anti-miR-155反义寡核苷酸对胰腺癌SW1990细胞株增殖和凋亡的影响

目的观察anti-miR-155反义寡核苷酸(AMOs)对人胰腺癌细胞株SW1990增殖和凋亡的影响。方法将SW1990细胞分为空白组、阴性对照组和AMOs处理组。阴性对照组将阴性对照链转染入SW1990细胞株中,AMOs处理组采用AMOs抑制SW1990细胞内miR-155的活性;CCK-8法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术测定细胞周期及凋亡。结果与空白组及阴性对照组相比,AMOs显著抑制SW1990细胞的增殖(P<0.05),100nmol/L AMOs的抑制率达36.51%,使G0/G1细胞比例显著增加,G2/M期细胞比例显著减少(P<0.05),AMOs处理过的SW1990细胞早期凋亡率明显增高(P<0.05)。结论 AMOs通过抑制SW1990细胞内高水平表达miR-155的活性,显著抑制SW1990细胞的增殖。