过表达一个疣粒野生稻的Ricin_B凝集素基因OmR40c1增强水稻耐盐性

盐胁迫是影响盐/碱稻区水稻产量的主要逆境因素。研究耐盐相关基因,对于培育水稻抗逆品种具有重要意义。OmR40c1是从疣粒野生稻(Oryza meyeriana)中分离获得cDNA序列,与已报道的受脱落酸与盐诱导的OsR40c1的CDS序列完全相同,但在5′端UTR和3′端UTR区域有差别。有关OmR40c1基因功能的研究还未见报道。本研究的主要目的是初步分析OmR40c1在水稻耐盐性中的作用。对栽培稻日本晴(Oryza sativa L.var.Nipponbare)进行脱落酸(abscisic acid,ABA)和盐胁迫处理,OsR40c1基因均上调表达。构建基因定位载体并注射烟草表皮细胞,其结果表明OmR40c1定位于细胞质膜和细胞核上。构建超表达载体并转染日本晴,PCR及qRT-PCR结果均显示OmR40c1在转基因材料中成功表达。OmR40c1可能参与种子萌发。174mmol/L盐胁迫下,野生型种子的发芽率下调一半左右,转OmR40c1基因水稻种子发芽未受影响;转OmR40c1水稻苗期的株高是未经盐处理转基因水稻株高的一半左右;而野生型的株高是未经盐处理野生型水稻株高的1/6左右。盐胁迫下,水稻叶片、根长等都受到不同程度的影响。盐胁迫下,转OmR40c1基因水稻植株内的Na^+浓度是野生型的1.38倍;K^+浓度是野生型的1.25倍。综上,OmR40c1一定程度提高了水稻的耐盐性,且苗期的耐盐性高于成株期。

水稻OmR40c1蛋白的表达纯化及其与血红细胞的凝集作用

目的:在大肠杆菌中融合表达水稻蛋白Om R40c1,并探讨其与红细胞的凝集效果,为进一步研究Om R40c1在体外的抑菌实验做准备。方法:PCR扩增目的基因,经Bam HⅠ及NotⅠ双酶切,连入表达载体p GEX-6p-1构建成重组质粒,测序正确后转入大肠杆菌BL21,优化诱导表达条件;纯化重组Om R40c1蛋白,并分析其与红细胞的凝集效果。结果:获得原核表达的Om R40c1蛋白,重组Om R40c1在低温(4℃)条件下可与兔血红细胞发生凝集作用。结论:原核表达体系适合水稻Om R40c1蛋白的融合表达。