Omi/HtrA2对前列腺癌细胞株PED/PEA-15表达及PC-3细胞凋亡的影响

背景与目的:促、抑凋亡因子间的相互作用与肿瘤的发生、发展密切相关。Omi/HtrA2是新近发现的一种凋亡调节因子,PED/PEA-15是一种广泛表达的抗凋亡蛋白。本研究旨在探讨Omi/HtrA2对PED/PEA-15表达和前列腺癌细胞PC-3凋亡的影响。方法:构建Omi/HtrA2的表达载体和siRNA载体,并用脂质体法分别将两载体转染至PC-3细胞中,Westernblot和ELISA法检测Omi/HtrA2对PED/PEA-15表达和细胞凋亡的影响;Caspase-8检测试剂盒检测PED/PEA-15对Caspase-8活性的影响;Westernblot、RT-PCR法检测Omi/HtrA2特异siRNA序列对其转录、翻译的影响,流式细胞仪检测siRNA导致Omi/HtrA2基因沉默后PC-3细胞凋亡的变化。结果:酶切和DNA测序证实Omi/HtrA2的表达载体和siRNA载体构建成功。通过转染Omi/HtrA2表达载体高表达Omi/HtrA2可抑制PED/PEA-15表达,并增加肿瘤细胞的凋亡率;抑制PED/PEA-15的表达可提高Caspase-8活性。siRNA沉默Omi/HtrA2基因后PC-3细胞对顺铂的敏感性降低。结论:Omi/HtrA2可通过抑制抗凋亡蛋白PED/PEA-15表达而在PC-3细胞凋亡中发挥重要作用。

窒息新生儿血清对肾小管上皮细胞内Omi／HtrA2表达的影响

目的探讨窒息新生儿血清对人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)内Omi/HtrA2表达的影响。方法以人HK-2为研究对象,将培养在孔板内的细胞随机分为正常对照组、窒息组。从新生儿病房经股静脉收集重度窒息24 h足月新生儿血,经肝素抗凝,3 000 r/min离心20 min,分离血清,56℃恒温水浴30 min灭活补体,微孔滤器过滤除菌,按体积比1∶5配成窒息血清,200 mL/L作为攻击浓度。当细胞生长达到要求后,窒息组加入窒息血清对HK-2细胞进行攻击,正常对照组采用正常培养基进行培养,24 h后终止培养和攻击,固定细胞,采用免疫组织化学法检测二组细胞Omi/HtrA2的表达。采用SPSS 10.0软件进行t检验。结果Omi/HtrA2染色为金黄色或黄褐色分布于细胞质中。与正常对照组阳性细胞率[(9.0±2.5)%]相比,窒息组阳性细胞率[(25.15±3.5)%]明显增加,差异具有显著性意义(t=-15.322 P<0.01)。结论窒息新生儿血清可诱导Omi/HtrA2在HK-2细胞内的表达,Omi/HtrA2可能参与窒息新生儿血清诱导的HK-2凋亡。

线粒体丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2与细胞凋亡

Om i/HtrA2是一种线粒体丝氨酸蛋白酶,具有修复、降解线粒体中折叠错误的蛋白质的作用,并可以通过破坏caspase与X染色体连锁凋亡抑制蛋白(X IAP)之间的相互作用和直接利用其自身具有的蛋白酶活性引起细胞凋亡。本文介绍了Om i/HtrA2的结构、生物学作用、参与细胞凋亡的机制及其在某些疾病中的作用。

线粒体促凋亡因子Omi/HtrA2在肝癌组织中表达的研究

目的探讨丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2在肝癌组织、癌旁组织与正常肝组织中的表达及意义。方法应用免疫组化SABC法检测43例肝癌、30例癌旁组织及10例正常肝组织中Omi/HtrA2的表达。结果29例(67·44%)肝癌中Omi/HtrA2蛋白表达阳性,30例癌旁组织和10正常肝组织没有或只有少量很弱的表达。肝癌高分化组中Omi/HtrA2蛋白的表达明显高于中、低分化组(P<0·01)。另外,Omi/HtrA2表达与肿瘤大小及临床分期相关,但Omi/HtrA2表达与肝硬化、有无癌栓、HBsAg和AFP无关。结论肝细胞癌可能需要Omi/HtrA2的表达来促进凋亡,Omi/HtrA2的表达对肝癌的发展有重要作用。

线粒体促凋亡因子Omi/HtrA2在乳腺癌中的表达及意义

目的本文旨在通过检测促凋亡分子Omi/HtrA2在乳腺良恶性肿瘤组织中的表达,探讨其与乳腺癌发病的关系及临床意义。方法采用免疫组化En Vinsion system法检测63例乳腺癌及37例乳腺纤维腺瘤组织中Omi/HtrA2的表达情况,同时检测这些组织中Caspase-3蛋白的表达。结果Omi/HtrA2在乳腺纤维腺瘤中表达显著低于乳腺癌中的表达(P<0·05),而Caspase-3则在乳腺纤维腺瘤中表达显著高于乳腺癌中的表达(P<0·05),但二者的表达与乳腺癌的临床分期均无明显相关性(P>0·05)。结论线粒体促凋亡蛋白Omi/HtrA2的在乳腺癌中高表达与其发生发展有关。

槲芪散及其君药槲寄生对大鼠肝癌前病变组织中促凋亡因子Omi/HtrA2表达的影响

目的:探讨槲芪散及其君药槲寄生干预肝癌前病变组织中癌细胞凋亡机制。方法:用电镜观察模型组、正常组以及槲芪散大小剂量组、槲寄生单体组肝细胞线粒体形态学的变化,用免疫组化SP法、Western Blotting法检测各实验组大鼠肝组织丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2的表达。结果:槲芪散治疗组肝细胞线粒体形态较模型组有明显改善;除正常组外,模型组,槲芪散大、小剂量治疗组,槲寄生单体组均有Omi/HtrA2的表达,模型组、正常组、大剂量治疗组、单体组之间丝氨酸蛋白酶的表达量有统计学意义(P<0.05)。结论:槲芪散及其君药槲寄生能够改善肝细胞线粒体的形态和功能,降低Omi/HtrA2总量的表达,并且促使Omi/HtrA2从线粒体释放,诱导肝癌细胞的凋亡。

XIAP、OMI/HTRA2蛋白对HeLa细胞的影响及两种蛋白间相互作用

目的探讨XIAP、Omi/HtrA2、米非司酮对HeLa细胞凋亡的影响以及XIAP、Omi/HtrA2的相互作用。方法细胞转染、米非司酮诱导HeLa细胞凋亡,利用共聚焦显微镜及流式细胞术观察XIAP、Omi/HtrA2在细胞内的表达和定位,并检测其对HeLa细胞凋亡影响的情况,使用共聚焦显微镜检测XIAP、Omi/HtrA2的相互作用。结果 (1)在转染了重组质粒pDsRed2-XIAP、pDsRed2-Omi/HtrA2的HeLa细胞中,加入米非司酮后其凋亡率分别是:只加米非司酮组为46.16%;米非司酮+转染质粒pDsRed2-XIAP为26.41%;米非司酮+转染质粒pDsRed2-Omi/HtrA2为78.85%。(2)利用共聚焦显微镜检测XIAP、Omi/HtrA2在HeLa细胞中存在能量共振转移现象。结论米非司酮能促进HeLa细胞凋亡;DsRed2-XIAP融合蛋白能够抑制由米非司酮诱导的HeLa细胞凋亡;DsRed2-Omi/HtrA2融合蛋白能够促进HeLa细胞凋亡,米非司酮能增加Omi/HtrA2促凋亡作用。在活HeLa细胞中,利用荧光共振能量转移技术直接证实XIAP与Omi/HtrA2在部分细胞中存在相互作用。

喉癌中Omi/HtrA2的表达及作用初探

目的:检测Omi/HtrA2在喉癌组织中的表达,初步探讨其在喉癌发生、发展中的意义。方法:采用RT-PCR与免疫组织化学方法,检测20例喉鳞状细胞癌及12例声带息肉手术切除标本中Omi/HtrA2mRNA与蛋白的表达情况。结果:癌旁正常组织中未检测到Omi/HtrA2蛋白表达,而在喉癌组织与声带息肉组织中均有表达。Omi/HtrA2基因在高分化喉鳞癌组织中的表达水平高于低分化型喉鳞癌组织、声带息肉以及癌旁的正常组织(P<0.01)。结论:Omi/HtrA2在喉鳞状细胞癌中有表达,表明Omi/HtrA2的促凋亡作用参与了喉癌的发生发展过程,为癌症治疗提供了新的理论基础。

丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2在肝癌细胞系中的表达及其促凋亡作用

目的:探讨Omi/HtrA2丝氨酸蛋白酶活性对肝癌细胞HepG2凋亡的影响。方法:检测O-mi/HtrA2在正常肝上皮细胞L02细胞系和肝癌细胞系HepG2、Hep3B、PLC中的表达。用脂质体法将Omi/HtrA2小干扰RNA表达载体(psiRNA-Omi/HtrA2)转染至人HepG2细胞中,以RT-PCR和Western Blot法评价psiRNA-Omi/HtrA2对Omi/HtrA2表达的沉默效应。用MTT法和流式细胞仪检测siRNA导致Omi/HtrA2基因沉默后HepG2细胞凋亡的变化。结果:在L02细胞系和3种肝癌细胞系中,所有细胞系在mRNA水平和蛋白质水平均表达Omi/HtrA2,在肝癌细胞系中的Omi/HtrA2 mRNA和蛋白质表达水平均高于正常肝上皮细胞L02。psiRNA-Omi/HtrA2载体可特异性抑制HepG2细胞中Omi/HtrA2的表达。转染psiRNA-Omi/HtrA2载体的HepG2细胞凋亡下调。结论:Omi/HtrA2在肝癌细胞系中表达增高,它可能在促进肝癌细胞凋亡中有重要作用,Omi/HtrA2为肝癌的治疗提供了一个新的选择靶点。

Omi/HtrA2对人肝癌细胞系凋亡的调控作用研究

目的探讨丝氨酸蛋白激酶Omi/HtrA2在肝癌细胞中在促凋亡基因p53与抑凋亡基因XIAP之间调控机制的研究,并探讨其今后用于靶向治疗的可能性。方法用Western blotting的方法半定量测定4种不同的肝细胞株(L02、HepG2、Hep3B、Huh7)中p53、XIAP、Omi/HtrA2蛋白的表达量,以及使用Omi/HtrA2特异性抑制剂ucf-101后各自的表达量。结果在p53表达不同的细胞株中XIAP蛋白和Omi/HtrA2蛋白的表达也是不同的,p53可上调Omi/HtrA2蛋白表达,下调XIAP蛋白表达。使用ucf-101后,肝癌细胞中XIAP蛋白表达明显上调。结论Omi/HtrA2是p53与XIAP之间凋亡调控作用的信号因子之一,参与细胞凋亡的调控,有可能作为肿瘤细胞凋亡的治疗靶点。

线粒体Omi/HtrA2信号通路参与人脑挫裂伤后神经细胞凋亡的研究

目的揭示人脑急性创伤性脑损伤后Omi/Htr A2介导的神经细胞凋亡线粒体途径的激活。方法选择100例脑外伤开颅手术中获得的脑挫裂伤脑组织作为外伤组,另外选择100例脑出血患者手术径路中获得的正常脑组织作为对照组,采用流式细胞仪检测神经细胞凋亡,采用Western-blot检测Omi/Htr A2、X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、pro-caspase 3、pro-caspase 9和剪切聚腺苷二磷酸-核糖多聚酶(PARP)表达,采用四肽荧光底物法检测caspase 3和caspase 9活性。结果外伤组脑组织凋亡神经细胞比例、Omi/Htr A2、pro-caspase 3、pro-caspase 9和剪切PARP表达及caspase 3和caspase 9活性较对照组显著升高(均P<0.01),外伤组脑组织XIAP表达较对照组显著下降(P<0.01)。外伤组脑组织Omi/Htr A2表达与凋亡神经细胞比率、pro-caspase 3、pro-caspase 9和剪切PARP表达及caspase 3和caspase 9活性呈显著正相关(均P<0.01),与XIAP表达呈显著负相关(P<0.01);外伤组脑组织XIAP表达与凋亡神经细胞比率、pro-caspase 3、pro-caspase 9和剪切PARP表达及caspase 3和caspase 9活性呈显著负相关(均P<0.01)。结论 Omi/Htr A2介导的线粒体途径可能参与人急性创伤性脑损伤后神经细胞凋亡过程。

Omi/HtrA2在腺样囊性癌的表达及其临床意义

目的探讨Omi/Htr A2在不同分型腺样囊性癌中的表达差异,并评价其对腺样囊性癌的临床意义。方法纳入确诊为腺样囊性癌的患者100例,应用免疫组织化学染色方法,检测Omi/Htr A2在不同分型腺样囊性癌中的表达;并检测腺样囊性癌转移组和非转移组患者中Omi/Htr A2表达情况。结果 Omi/Htr A2表达主要位于细胞胞质中,在腺样囊性癌组织中其阳性率为83%;腺样囊性癌低级组与高级组间表达情况具有统计学差异(P<0.05),但不同分型的腺样囊性癌组织中其表达差异无统计学意义(P>0.05);Omi/Htr A2在转移组腺样囊性癌中阳性率为93.1%,在非转移组中其阳性率为46.2%,两组比较具有统计学差异(P<0.05)。结论 Omi/Htr A2与腺样囊性癌的发病密切相关,可作为临床判断腺样囊性癌的辅助性指标,对临床的诊治及预后的判断具有一定的指导价值。

丝氨酸蛋白酶HtrA2/Omi与细胞存亡

The serine protease HtrA2/Omi is released from the mitochondrial intermembrane space following apoptotic stimuli.Once in the cytosol,HtrA2/Omi has been implicated in promoting cell death in caspase-dependent or caspase-independent pathway.On the other hand,HtrA2/Omi can refold and degrade misfolded proteins in the mitochondria during cell stress.

Omi/HtrA2基因与神经变性疾病的研究进展

人HtrA2(也称作Omi)是HtrA丝氨酸蛋白酶家族的新成员,可以通过破坏X染色体连锁的凋亡蛋白抑制物和caspase的相互作用,和(或)直接利用其蛋白酶活性诱导凋亡,也可以校正、降解错误折叠的蛋白质,抵抗应激,具有细胞保护的作用。研究已经发现它参与了许多疾病的发生、发展。作者就其生物学功能、单核苷酸多态性与神经变性疾病的相关性做一综述。

大鼠大脑皮质中Omi/HtrA2的年龄分布差异性及其可能的意义

目的探讨年龄因素影响下大鼠大脑皮质细胞中Omi/HtrA2的表达差异及其与神经细胞凋亡的关系。方法采用正常成年及正常老年大鼠大脑皮质组织,经过Caspase-3、8、9、12活性检测和TUNEL法检测凋亡细胞;Western blot法检测Omi/HtrA2蛋白含量变化;Real-timePCR法检测Omi/HtrA2 mRNA含量变化。结果衰老大鼠大脑皮质细胞凋亡明显高于成年大鼠,具体表现为:前者Caspase-3的比活性显著升高,阳性细胞凋亡数显著增高,与后者相比均有统计学差异(P<0.05)。与成年大鼠相比,衰老大鼠大脑皮质Caspase-9的比活性显著升高,二者相比差异有统计学意义(P<0.05);与成年大鼠相比,衰老大鼠大脑皮质Omi/HtrA2蛋白表达水平显著升高,二者相比差异有统计学意义(P<0.01);与成年大鼠相比,衰老大鼠大脑皮质Omi/HtrA2的mRNA水平也显著升高,二者相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论衰老大鼠大脑皮质凋亡水平增高,可能与Caspase-9途径活性增高以及Omi/HtrA2的基因和蛋白质表达水平增加有关。

HtrA2/Omi与Survivin在胰腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨凋亡相关蛋白丝氨酸蛋白酶HtrA2/Omi和Survivin在胰腺癌中的表达及其临床意义。方法:用免疫组化SP法对40例胰腺癌组织和20例癌旁正常胰腺组织中HtrA2/Omi和Survivin的表达情况进行检测。结果:胰腺癌组与对照组比较,HtrA2/Omi、Survivin表达率均明显升高,组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05),HtrA2/O-mi的阳性表达率与Survivin的阳性表达率无显著相关(r=0.105,P>0.05);HtrA2/Omi在胰腺癌组织中的表达与肿瘤TNM分期、分化程度相关,Survivin表达与肿瘤TNM分期、分化程度、肿瘤转移相关。结论:HtrA2/Omi、Survivin可能通过调节胰腺癌组织细胞的凋亡而参与胰腺癌的发病。

Omi/HtrA2 shRNA重组真核表达质粒的构建及其在大鼠肾小管上皮细胞缺氧/复氧模型中的作用

目的构建在哺乳动物细胞中表达的Omi/HtrA2短发夹RNA(shRNA)的表达质粒,观察其对大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E缺氧/复氧模型中Omi/HtrA2表达的影响。方法根据Genbank中Omi/HtrA2 mRNA分别设计2对多聚核苷酸序列,退火形成互补双链DNA,分别克隆至经双酶切后的载体Pgenesil-1上,构建Omi/HtrA2特异性的shRNA表达载体PGP1和PGP2,进行酶切和测序鉴定。制作NRK-52E缺氧/复氧模型,将表达质粒通过脂质体介导转染NRK-52E,Western blot检测Omi/HtrA2蛋白质表达。结果将合成的DNA片段退火后克隆至Pgenesil-1载体上,构建Omi/HtrA2特异shRNA表达载体PGP1和PGP2;经酶切和测序证实构建成功,无碱基突变发生。将表达质粒介导转染NRK-52E缺氧/复氧模型后,细胞Omi/HtrA2蛋白质表达显著降低。结论成功构建针对大鼠Omi/HtrA2基因的shRNA表达载体PGP1和PGP2,它们能有效抑制NRK-52E缺氧/复氧模型中Omi/HtrA2表达。

Omi/HtrA2短发夹RNA在大鼠肾小管上皮细胞凋亡中的作用及机制

目的探讨Omi/HtrA2短发夹RNA(shRNA)对缺氧/复氧诱导大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)凋亡的作用及机制。方法细胞分为5组:正常组(常规培养),模型组(缺氧/复氧组)、HK组(转染重组质粒Pgenesil-1/HK)、shRNA1组(转染Pgenesil-1/Omi/HtrA2shRNA1)、shRNA2组(转染Pgenesil-1/Omi/HtrA2shRNA2)。用荧光显微镜观察荧光蛋白的表达,Westernblot检测各组Omi/HtrA2、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(caspase)-3/-9蛋白表达,比色法测定caspase-3/-9的活性。结果在荧光显微镜下,转染组细胞均可见绿色荧光,未转染组未见绿色荧光。与模型组相比,shRNA1组和shRNA2组Omi/HtrA2、caspase-3/-9蛋白表达明显减少(P<0.01)。模型组和HK组、shRNA1组和shRNA2组之间Omi/HtrA2、caspase-3/-9蛋白表达差异无统计学意义。与正常组相比,模型组Omi/HtrA2、caspase-3/-9蛋白表达明显增强(P<0.01)。结论Pgenesil-1/Omi/HtrA2shRNA1和Pgenesil-1/Omi/HtrA2shRNA2能明显减少缺氧/复氧诱导的NRK-52E中Omi/HtrA2蛋白的表达。通过抑制procaspase-9的活化,进而减少了下游procaspase-3的激活,最终减轻了缺氧/复氧诱导的NRK-52E的凋亡程度。

Omi/HtrA2和Caspase-9在食管癌中的表达及与凋亡的关系

目的探讨在食管鳞癌中Omi/HtrA2、Caspase-9蛋白的表达及其与癌细胞凋亡的关系。方法采用免疫组化SP法对80例经病理确诊为食管鳞癌病例的正常组织、癌旁组织及癌组织进行Omi/HtrA2和Caspase-9蛋白免疫组化分析。采用TUNEL法检测细胞凋亡水平,并分析食管癌中Omi/HtrA2和Caspase-9的表达及其与肿瘤细胞凋亡的关系。结果 1 Omi/HtrA2、Caspase-9在食管鳞癌组织阳性表达率分别为76.25%、58.75%,在癌旁组织中的阳性表达率分别为27.50%、72.50%,在正常组织中的阳性表达率分别为22.50%、85.00%;Omi/HtrA2、Caspase-9在食管鳞癌组织中的阳性表达率与其在癌旁组织、正常组织中蛋白的阳性表达率分别进行比较,差异均有统计学意义(P<0.05);癌旁组织与正常组织的Omi/HtrA2和Caspase-9蛋白阳性表达率进行比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。2 Omi/HtrA2蛋白表达阳性组癌细胞凋亡指数(18.186±1.331)‰,明显高于阴性组凋亡指数(5.108±1.783)‰(P<0.01);Caspase-9蛋白表达阳性组细胞凋亡指数为(17.763±0.675)‰,明显高于阴性组细胞凋亡指数(11.619±0.712)‰(P<0.05)。结论 Omi/HtrA2在食管癌中高表达,而Caspase-9在食管癌中低表达,两者在促进食管癌细胞凋亡中有相反的调节作用。