Omi/HtrA2抑制剂对蛛网膜下腔出血大鼠早期脑损伤的影响

目的探讨Omi/HtrA2抑制剂对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠早期脑损伤的影响,并分析其作用机制。方法120只大鼠随机分成Sham组、SAH组和Omi/HtrA2抑制剂UCF-101组,每组40只。UCF-101组大鼠在SAH模型形成前按3.0μmol/kg剂量腹腔注射UCF-101。每组10只大鼠被用于检测脑组织白介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、闭合蛋白(occludin)、claudin-5、闭锁小带蛋白1(ZO-)、水通道蛋白-9(AQP-9)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和组织型金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)等蛋白表达,10只大鼠被用于检测凋亡神经细胞,10只大鼠被用于测定脑含水量,10只大鼠被用于测定血脑屏障通透性。结果与Sham组比较,SAH组大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α、AQP-9和MMP-9蛋白表达水平及凋亡神经细胞比例、血脑屏障通透性和脑水肿指数均显著升高(均P<0.05),而Occludin、Claudin-5、ZO-1和TIMP-1蛋白表达均显著降低(均P<0.05);UCF-101组上述各指标均优于SAH组(均P<0.05)。结论Omi/HtrA2抑制剂对SAH后大鼠具有脑保护作用,其机制可能与其修复血脑屏障、减轻脑水肿、抑制促炎因子释放和降低神经细胞凋亡有关。

Omi/HtrA2基因表达对食管癌细胞EC9706凋亡及对耐药影响的实验研究

目的研究凋亡促进因子Omi/Htr A2基因过表达对食管癌细胞EC9706凋亡及对耐药性的影响。方法用脂质体包裹转染人食管癌EC9706细胞,实验分为对照组、空载体组、Omi载体组、顺铂组、Omi+顺铂联合组,采用RT-PCR检测不同干预组Omi/Htr A2基因m RNA表达的变化,MTT法检测不同干预组细胞生长抑制率,流式细胞术检测不同干预组细胞的凋亡率,分析Omi/Htr A2基因蛋白表达对细胞耐药性的影响。结果 1Omi/Htr A2基因m RNA在EC9706细胞中的表达:对照组为(0.113±0.009),空载体组为(0.106±0.006),Omi载体组为(0.436±0.021),顺铂组为(0.196±0.013),Omi+顺铂联合组为(0.639±0.032),顺铂组、Omi+顺铂联合组较对照组、空载体组明显增强,差异有统计学意义(P<0.01,P=0.011,P=0.000),对照组与空载体组比较无显著性差异(P>0.05,P=0.725)。2MTT法检测Omi/Htr A2的表达对细胞生长的抑制率:对照组为0,空载体组为2.89%,Omi载体组为27.61%,顺铂组为30.02%,Omi+顺铂联合组为48.47%,与对照组相比,Omi载体组、顺铂组、Omi+顺铂联合组均显著抑制EC9706细胞的生长,差异具有显著性(P=0.000)。3流式细胞术检测Omi/Htr A2的表达对凋亡的影响:对照组细胞凋亡率为10.76%,空载体组为13.26%,Omi载体组为38.14%,顺铂组为45.86%,Omi载体+顺铂联合组为56.64%,与对照组、空载体组比较,Omi载体组、顺铂组、Omi载体+顺铂联合干预组细胞凋亡率明显提高,差异具有显著性意义(P=0.000)。结论 Omi/Htr A2基因过表达可以明显抑制癌细胞的生长,提高癌细胞的凋亡率及癌细胞对化疗药物的敏感性,且Omi/Htr A2基因的表达与化疗药物具有协同抗癌作用。

Omi/HtrA2在高体积分数氧早产大鼠肺损伤中的作用

目的研究Omi/HtrA2在早产大鼠高体积分数氧(高氧)肺损伤中的作用。方法早产Wistar大鼠48只随机分为高氧组和对照组。高氧组大鼠暴露于950 mL.L-1氧气中,对照组置于空气中。在处理后1 d、3 d、7 d每组分批处死8只大鼠后收集肺组织。采用HE染色观察其肺组织病理变化;免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(SP)法检测Omi/HtrA2、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9(Caspase-9)在各组早产大鼠肺组织的表达和分布;采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)评价其肺组织细胞凋亡情况;采用间接免疫荧光双染色法,在激光共聚焦显微镜下观察Omi/HtrA2在细胞内的转位。结果 1.高氧组早产大鼠可见典型的肺损伤病理学改变。2.Omi/HtrA2、XIAP和Caspase-9主要表达于肺组织细胞的胞质。对照组中Omi/HtrA2有少量表达。高氧损伤后Omi/HtrA2的表达呈时间依赖性,于1 d时表达开始增加,3 d时明显增加,7 d时表达最多;高氧1 d时XIAP表达有所减少,3 d时明显减少,7 d最少;高氧1 d时Caspase-9表达开始增加,3 d时明显增加,7 d时表达最多。3.高氧组3 d时出现明显的肺细胞凋亡,7 d凋亡细胞数达高峰。4.与对照组比较,高氧组肺泡上皮细胞内Omi/HtrA2转位率明显增加。结论 Omi/HtrA2可能通过抑制XIAP、激活Caspase-9促进早产大鼠高氧后肺组织细胞的凋亡。

甲基莲心碱抑制腺样囊性癌生长的机制研究

目的研究甲基莲心碱对腺样囊性癌生长的作用及其作用机制。方法涎腺腺样囊性癌细胞SACC-83随机分为对照组、甲基莲心碱低剂量组、甲基莲心碱中剂量组、甲基莲心碱高剂量组。甲基莲心碱低、中、高剂量组分别用10,20,40μmol·L^(-1)甲基莲心碱处理细胞,对照组细胞用等量的培养基处理。以噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖情况;以流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;以Transwell检测细胞迁移;以蛋白质印迹(Western Blot)法检测高温需求因子A2(Omi/HtrA2)、X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)表达水平以及增殖、凋亡、迁移相关蛋白表达水平。结果对照组和甲基莲心碱低、中、高剂量组细胞凋亡率分别为(3.31±0.68)%,(13.43±1.76)%,(24.71±2.43)%和(42.37±2.95)%,迁移细胞数分别为134.18±8.28,94.86±6.90,68.81±6.43和50.24±5.27。对照组细胞中Omi/HtrA2蛋白、XIAP蛋白、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、切割型胱天蛋白酶-3(cleaved caspase-3)蛋白和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达水平分别为0.91±0.08,0.73±0.03,0.78±0.09,0.22±0.04和0.93±0.07,不同剂量甲基莲心碱作用后Omi/HtrA2蛋白、XIAP蛋白、CyclinD1蛋白和MMP-9蛋白的表达水平明显降低,cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05),且甲基莲心碱对SACC-83细胞的作用具有剂量依赖性。结论甲基莲心碱可以通过调控Omi/HtrA2和XIAP蛋白对腺样囊性癌细胞的生长起到抑制作用。