沙门菌Omp D介导的rBCG口服疫苗的制备与鉴定

目的利用重组BCG（rBCG）技术，构建能以串联和并联形式、在细菌表面表达Derp2和OmpD抗原的两种rBCGLI服疫苗。方法经PCR法分别扩增获得Derp2和OmpD基因，测序正确后将两者克隆人原核表达载体pProEXHTb，获得pProEXHTb-De．rp2-OmpD质粒。①串联表达：将Derp2-OmpD融合基因亚克隆人穿梭胞壁表达载体pCW，经酶切鉴定阳性命名为pCW-Derp2-OmpD质粒。将此重组质粒电穿导人BCG感受态细胞，构建可胞壁串噘表达Derp2-OmpD融合蛋白的rBCG；②并联表达：构建pCW-Derp2与pCW-OmpD两种质粒，井将二者同时电穿导人BCG感受态细胞，以构建胞壁并联表达Derp2和OmpD蛋白的rBCG。经潮霉素抗性筛选的阳性克隆，均采用以下三种方式进行鉴定：PCR特异性扩增目的基因片段；用兔抗Derp2多克隆抗体与兔抗OmpD多克隆抗体对阳性克隆分别进行斑点免疫杂交法和间接免疫荧光法鉴定。结果采用基因工程手段制备出以胞壁形式串联和并联表达Derp2和OmpD蛋白的两种rBCG口服疫苗，并通过PCR、斑点免疫杂交法及间接免疫荧光法分别进行鉴定。结论两种rBCG口服疫苗构建成功，为体外实验和临床应用提供基础。