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ERK1/2-Runx2信号通路在TNF-α对牙周膜干细胞成骨分化影响中的作用 被引量:10
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作者 韩耀伦 王璐 马欣 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第21期2587-2592,共6页
目的:探讨ERK1/2-Runx2信号通路在TNF-α对牙周膜干细胞成骨分化影响中的作用。方法:分离和培养牙周膜干细胞,将其分为对照组(成骨诱导液培养)、TNF-α组(成骨诱导液培养+TNF-α培养)和激动剂组(成骨诱导液培养+TNF-α+ERK培养)。ALP和... 目的:探讨ERK1/2-Runx2信号通路在TNF-α对牙周膜干细胞成骨分化影响中的作用。方法:分离和培养牙周膜干细胞,将其分为对照组(成骨诱导液培养)、TNF-α组(成骨诱导液培养+TNF-α培养)和激动剂组(成骨诱导液培养+TNF-α+ERK培养)。ALP和茜素红染色测定成骨分化功能,采用Western blot测定牙周膜干细胞Osterix、OPN、ERK1/2、p-ERK1/2、Runx2蛋白水平。结果:与对照组比较,TNF-α组ALP染色和茜素红染色程度低,ALP活性和矿化结节降低(P<0.05),Osterix和OPN蛋白水平降低(P<0.05),p-ERK1/2、Runx2蛋白水平降低(P<0.05);与TNF-α组比较,激动剂组ALP染色和茜素红染色程度介于对照组和TNF-α组之间,ALP活性和矿化结节升高(P<0.05),Osterix和OPN蛋白水平升高(P<0.05),p-ERK1/2、Runx2蛋白水平升高(P<0.05)。三组牙周膜干细胞ERK1/2蛋白水平比较无明显差异(P>0.05)。结论:TNF-α可能通过影响ERK1/2-Runx2信号通路从而抑制牙周膜干细胞的成骨分化。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子-α 细胞外调节蛋白激酶1/2 Runt相关转录因子2 牙周膜干细胞 成骨分化
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CD133基因启动子调控增强型绿色荧光蛋白基因在喉癌Hep-2细胞中的表达 被引量:2
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作者 王晓峰 周翔宇 +3 位作者 张桂珍 王伟 杜珍武 张天夫 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期498-502,I0001,共6页
目的:构建人CD133基因启动子启动加强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因表达载体,观察在喉癌Hep-2细胞系中人CD133基因启动子启动eGFP基因表达能力,为应用CD133基因启动子调控靶向肿瘤干细胞(CSCs)基因治疗奠定实验基础。方法:采用PCR方法从人... 目的:构建人CD133基因启动子启动加强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因表达载体,观察在喉癌Hep-2细胞系中人CD133基因启动子启动eGFP基因表达能力,为应用CD133基因启动子调控靶向肿瘤干细胞(CSCs)基因治疗奠定实验基础。方法:采用PCR方法从人外周血基因组中克隆人CD133基因启动子,通过基因重组技术将人CD133基因启动子克隆入慢病毒基因转移载体pWPXLd-eGFP中,构建人CD133基因启动子启动eGFP基因表达载体,PCR以及酶切鉴定构建载体的正确性。应用脂质体介导该载体转染入Hep-2细胞中,细胞分为空白对照组(未转染质粒)、阳性对照组(转染pWPXLd)和实验组(转染pWPXLd-eGFP-CD133)。应用荧光显微镜观察各组eGFP基因在喉癌Hep-2细胞内的表达。结果:PCR法获得了约1 810bp大小的CD133基因启动子片段;酶切与PCR鉴定,成功构建了人CD133基因启动子启动eGFP基因表达载体。荧光显微镜下,阳性对照组和实验组转染的Hep-2细胞株有eGFP的表达,而空白组对照组的Hep-2细胞内无eGFP的表达。结论:构建的人CD133基因启动子启动eGFP基因表达载体可以调控eGFP基因在喉癌Hep-2细胞内的表达。 展开更多
关键词 CD133启动子 加强型绿色荧光蛋白 肿瘤干细胞 HEP-2细胞系
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恶性肿瘤中高迁移率族蛋白A2的功能研究进展 被引量:2
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作者 查郎 王子卫 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期257-260,共4页
高迁移率族蛋白A2(high mobility group A2,HMGA2)是一种非组蛋白染色体蛋白,本身无转录活性,但是可以通过改变染色质结构来调节其他基因的转录。HMGA2在正常组织中低表达或不表达,而在胚胎期以及恶性肿瘤组织中的表达明显上调。在一些... 高迁移率族蛋白A2(high mobility group A2,HMGA2)是一种非组蛋白染色体蛋白,本身无转录活性,但是可以通过改变染色质结构来调节其他基因的转录。HMGA2在正常组织中低表达或不表达,而在胚胎期以及恶性肿瘤组织中的表达明显上调。在一些恶性肿瘤中,HMGA2可以作为诊断分子标志物或判断预后的独立因子。此外,HMGA2能够促进上皮-间质转化以及维持干细胞的分化潜能和自我更新能力,在肿瘤的发生、生长和转移等方面可能发挥着重要作用。 展开更多
关键词 癌基因 肿瘤干细胞 hmga2蛋白
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E1A基因对裸鼠移植瘤生长的抑制和化学治疗的增敏作用 被引量:1
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作者 王晓雷 千新来 +2 位作者 赵清正 徐震纲 唐平章 《中华耳鼻咽喉科杂志》 CSCD 北大核心 2003年第6期409-412,I001,共5页
目的 探讨E1A基因对人舌鳞状细胞癌淋巴结转移癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用和化学治疗 (化疗 )增敏作用及其相关机理。方法 通过裸鼠致瘤实验 ,观察了E1A基因的抑瘤作用。通过模拟E1A基因治疗临床应用的裸鼠实验 ,观察E1A基因及其... 目的 探讨E1A基因对人舌鳞状细胞癌淋巴结转移癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用和化学治疗 (化疗 )增敏作用及其相关机理。方法 通过裸鼠致瘤实验 ,观察了E1A基因的抑瘤作用。通过模拟E1A基因治疗临床应用的裸鼠实验 ,观察E1A基因及其与博来霉素联合应用在动物体内的疗效。采用免疫组织化学染色检测E1A基因对HER 2 /neu表达的影响。结果 裸鼠致瘤实验结果显示 :6 86LN 1 E1A细胞形成的肿瘤较 6 86LN 1和 6 86LN 1 vect的出瘤时间晚 ,生长慢 ,瘤重小 ,抑瘤率为 71 8%。模拟E1A基因治疗临床应用的裸鼠实验结果显示 :与对照组相比 ,博来霉素组、E1A基因组和E1A基因加博来霉素组的抑瘤率分别为 :5 3 1%、76 8%和 96 7% ,与博来霉素组相比 ,E1A基因加博来霉素组的抑瘤率为 :92 8%。免疫组织化学染色显示E1A基因能抑制HER 2 /neu的表达。结论 E1A基因能够明显抑制人舌鳞状细胞癌淋巴结转移癌细胞裸鼠移植瘤的生长并显著增加其对博来霉素敏感性 ,具有较好的临床应用前景 ,该作用可能与E1A基因抑制HER 2 /neu的表达有关。 展开更多
关键词 E1A基因 裸鼠移植瘤 生长抑制 化学治疗 增敏作用 人舌鳞状细胞癌 淋巴结转移
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12-脂氧化酶影响胃癌细胞AGS中P21及bcl-2的表达
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作者 陈丰霖 王小众 +2 位作者 李建英 陈治新 黄月红 《福建医科大学学报》 2011年第5期323-326,共4页
目的研究12-脂氧化酶(12-LOX)对胃癌细胞中P21、bcl-2及磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达的影响及与ERK1/2信号传导通路的关系。方法胃癌细胞AGS常规培养于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中24h至对数生长期,改用无血清RPMI-1640培养基培养24... 目的研究12-脂氧化酶(12-LOX)对胃癌细胞中P21、bcl-2及磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达的影响及与ERK1/2信号传导通路的关系。方法胃癌细胞AGS常规培养于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中24h至对数生长期,改用无血清RPMI-1640培养基培养24h加入干预药物。P21、bcl-2及p-ERK1/2表达采用Western blot法测定。分别采用100nmol/L的12-LOX催化合成产物12-羟基廿碳四烯酸(12-HETE)及40μmol/L的12-LOX特异性抑制黄苓素干预AGS细胞24h,测定P21、bcl-2及p-ERK1/2含量;采用ERK抑制剂PD98059预处理AGS细胞2h后,再分别用100nmol/L的12-HETE及40μmol/L黄苓素干预24h后再测定P21、bcl-2及p-ERK1/2含量。结果经100nmol/L的12-HETE干预24h后,p-ERK1/2、P21、bcl-2均显著高于末干预组(P<0.05),而40μmol/L黄苓素干预24h后,p-ERK1/2、P21、bcl-2显著低于对照组(P<0.05);采用ERK抑制剂PD98059预处理AGS细胞2h后再分别用100nmol/L的12-HETE及40μmol/L黄苓素干预与未采用PD98059预处理组相比,PD98059预处理后12-HETE干预组bcl-2水平低于仅用12-HETE干预组,PD98059预处理后黄苓素干预组bcl-2水平高于仅用黄苓素干预组(P<0.05)。而PD98059预处理后2组P21水平含量均无明显差异。结论 12-LOX对胃癌细胞P21及bcl-2表达具有调节作用,12-LOX通过其合成产物12-HETE促进ERK1/2的磷酸化,并通过ERK1/2途径调节bcl-2的表达,P21的表达不受ERK1/2途径调控。 展开更多
关键词 胃肿瘤 脂氧化酶 花生四烯酸类 原癌基因蛋白质C-BCL-2 原癌基因蛋白质p21(ras) 肿瘤细胞 培养的
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基于生物信息学筛选与鉴定宫颈癌的生物标志物微小染色体维持蛋白2 被引量:4
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作者 姜玮奇 王静 +3 位作者 贺海威 陈俊 刘晨雾 徐明娟 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期399-410,共12页
目的应用生物信息学技术分析筛选影响宫颈癌预后的关键基因并深度挖掘基因功能。方法从基因表达汇编(GEO)数据库下载宫颈癌微阵列数据集(GSE6791、GSE39001、GSE55940、GSE63678),合并和批量标准化后筛选差异表达基因(DEG)。对DEG进行... 目的应用生物信息学技术分析筛选影响宫颈癌预后的关键基因并深度挖掘基因功能。方法从基因表达汇编(GEO)数据库下载宫颈癌微阵列数据集(GSE6791、GSE39001、GSE55940、GSE63678),合并和批量标准化后筛选差异表达基因(DEG)。对DEG进行基因本体(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析及蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络构建,利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库进行生存分析以确定关键基因。对关键基因进行基因功能集富集分析,并且利用基于TCGA数据库的泛癌数据进行深度的功能挖掘,包括基因相关性分析、单因素Cox回归、免疫亚型、肿瘤微环境和肿瘤干性分析。结果共筛选出336个DEG,其中153个下调、183个上调。PPI网络和生存分析结果显示微小染色体维持蛋白(MCM)2是宫颈癌的潜在生物标志物。基因功能集富集分析提示,MCM2与自噬和MAPK信号通路有关。在泛癌数据中的研究表明,MCM2的表达水平与4种恶性肿瘤(宫颈癌、弥漫大B细胞淋巴瘤、直肠腺癌、葡萄膜黑素瘤)的5年总生存率呈正相关,与7种恶性肿瘤(肾上腺皮质癌、肾嫌色细胞癌、急性髓细胞样白血病、脑低级别胶质瘤、肝细胞肝癌、间皮瘤、肉瘤)的5年总生存率呈负相关(P均<0.05)。深度功能挖掘提示,MCM2~10参与肿瘤组织免疫亚型的改变,高表达MCM2~10的肿瘤组织中可能存在较低比例的基质细胞和免疫细胞及较高比例的肿瘤细胞;在多种肿瘤中,MCM2的表达水平与肿瘤细胞的干性特征呈正相关。结论MCM2在宫颈癌中高表达且与患者预后相关,是宫颈癌的潜在预后标志物。在多种恶性肿瘤中,MCM2参与多种生物过程,可能成为恶性肿瘤治疗干预的新靶点。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 MCM2 生物信息学 泛癌 肿瘤微环境 肿瘤干细胞
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骨髓间充质干细胞注射抑制败血症大鼠的炎症反应 被引量:2
7
作者 郝昱芳 耿立霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1158-1163,共6页
目的探索骨髓间充质干细胞(BMSC)对败血症大鼠的治疗作用。方法 48只Wistar大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、治疗组。利用盲肠结扎造瘘术(CLP)制备大鼠败血症模型,提取BMSC培养至第三代,治疗组大鼠尾静脉注射BMSC,模型组大鼠注... 目的探索骨髓间充质干细胞(BMSC)对败血症大鼠的治疗作用。方法 48只Wistar大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、治疗组。利用盲肠结扎造瘘术(CLP)制备大鼠败血症模型,提取BMSC培养至第三代,治疗组大鼠尾静脉注射BMSC,模型组大鼠注射等剂量的PBS。观察各组大鼠术后72 h后存活率,取大鼠肺脏组织HE染色观察病变情况,心脏采血应用实时荧光定量PCR检测外周血单个核细胞白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、叉头盒蛋白3(Foxp3)、CC趋化因子配体2(CCL2)的mRNA水平,ELISA检测IL-6、IL-17、TNF-α的蛋白水平。结果空白组大鼠与假手术组大鼠的存活率以及肺组织形态均未见明显异常、大鼠血培养未见细菌生长;IL-6、IL-17、TNF-α、CCL2、Foxp3 mRNA和蛋白水平无明显差别。模型组中大鼠存活率明显低于假手术组,组织病变明显,大鼠血培养可见大量肠杆菌生长。外周血单个核细胞IL-6、IL-17、TNF-α、CCL2 mRNA和IL-6、IL-17、TNF-α蛋白的表达水平较假手术组明显增高,而Foxp3的mRNA表达水平较假手术组明显降低。治疗组中大鼠存活率明显高于模型组,肺组织病变明显减轻,IL-6、IL-17、TNF-α和CCL2 mRNA和蛋白的表达水平较模型组明显降低,而Foxp3的mRNA表达水平较模型组组明显增高。结论 BMSC治疗可增加败血症大鼠存活率,降低炎性细胞因子水平。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 败血症 白细胞介素6(IL-6) 白细胞介素17(IL-17) 肿瘤坏死因子α CC趋化因子配体2(CCL2) 叉头盒蛋白P3(Foxp3)
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炎症环境下敲低SHP2对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响 被引量:1
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作者 张远 赵庆 +4 位作者 吕浩东 王天丛 窦昭婧 金玉琴 季骏 《口腔疾病防治》 2022年第11期769-778,共10页
目的探讨炎症环境下含有Src同源结构域2的蛋白酪氨酸磷酸酶2(Src homology-2 domain containing protein tyrosine phosphatase-2,SHP2)对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)增殖及成骨分化的调节作用和相... 目的探讨炎症环境下含有Src同源结构域2的蛋白酪氨酸磷酸酶2(Src homology-2 domain containing protein tyrosine phosphatase-2,SHP2)对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)增殖及成骨分化的调节作用和相关机制,为牙周炎治疗提供新的靶点。方法使用慢病毒感染构建敲低SHP2基因的hPDLSCs细胞系,通过RT-qPCR、Western blot验证SHP2的敲低水平;使用肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)在体外模拟炎症环境;CCK-8检测正常及炎症条件下敲低SHP2对hPDLSCs增殖的影响;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色、ALP活性检测、ARS染色、RT-qPCR以及Western blot检测成骨指标;Western blot检测敲低SHP2在炎症条件下,对丝裂原活化蛋白激酶/核因子κB(mitogen-activated protein kinase/nuclear factor-κB,MAPK/NF-κB)通路蛋白的影响。结果慢病毒感染细胞72 h后在荧光显微镜下显示出明显的绿色荧光,测得SHP2 shRNA重组慢病毒的滴度为2.9×10^(8) TU/mL;Western blot及RT-qPCR检测发现,SHP2敲低组的SHP2蛋白及基因的表达显著降低(P<0.001);在正常条件下,敲低SHP2在一定程度上抑制了hPDLSCs的增殖;敲低SHP2后,hPDLSCs的早期成骨指标增高,包括ALP活性显著增高,ALP和COL-1的表达增加(P<0.05),然而敲低SHP2对hPDLSCs最终产生钙结节的量无明显影响。在TNF-α和IL-1β诱导的炎症环境下,敲低SHP2对hPDLSCs的增殖无明显影响(P>0.05),敲低SHP2后,hPDLSCs成骨相关指标均增加(P<0.05),钙结节形成的量增多(P<0.05);炎症环境下,敲低SHP2后,hPDLSCs中p65的磷酸化和IκB-α的降解降低,并且NF-κB上游MAPK通路蛋白p-p38和p-JNK的表达降低(P<0.05)。结论炎症环境下,敲低SHP2对hPDLSCs的增殖无明显影响,但可通过抑制MAPK/NFκB通路促进hPDLSCs成骨分化。 展开更多
关键词 牙周膜干细胞 增殖 牙周炎 肿瘤坏死因子-α 白细胞介素-1β 炎症环境 Src同源结构域2的蛋白质酪氨酸磷酸酶2 基因沉默 成骨分化 碱性磷酸酶 COL-1 MAPK/NF-κB信号通路
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RRS1在MPP^+诱导SH-SY5Y细胞凋亡过程中表达的变化及意义 被引量:1
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作者 能一鸣 张峥 +3 位作者 李雪 王芳玲 华亚男 侯琳 《精准医学杂志》 2020年第4期323-327,330,共6页
目的探究核糖体合成调节因子1(RRS1)在1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP^+)诱导的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡过程中表达的变化及意义。方法以含有0、100、200、400μmol/L MPP^+的培养基培养SH-SY5Y细胞48 h,用CCK-8法检测各组细胞的增殖... 目的探究核糖体合成调节因子1(RRS1)在1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP^+)诱导的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡过程中表达的变化及意义。方法以含有0、100、200、400μmol/L MPP^+的培养基培养SH-SY5Y细胞48 h,用CCK-8法检测各组细胞的增殖活力,用JC-1法检测细胞线粒体膜电位,采用Annexin V-APC/PI试剂盒检测细胞凋亡率,用Western blot检测细胞抑癌因子P53、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)与RRS1蛋白的表达。构建RRS1慢病毒过表达载体(Lv-RRS1)和慢病毒阴性对照载体,对细胞进行慢病毒转染后,用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot检测慢病毒转染效率;对转染细胞以400μmol/L MPP^+处理48 h,用CCK-8检测细胞增殖活力,用Annexin V-APC/PI试剂盒检测细胞凋亡率,用Western blot检测细胞RRS1、P53、Bcl-2和Bax蛋白的相对表达情况。结果细胞经MPP^+处理培养,SH-SY5Y细胞增殖活力、线粒体膜电位显著降低(F=95.63、69.90,P<0.05);细胞凋亡率明显升高(F=258.49,P<0.01);P53蛋白和Bax蛋白表达明显升高(F=40.47、20.78,P<0.05);RRS1蛋白和Bcl-2蛋白表达明显降低(F=28.44、42.43,P<0.05)。慢病毒转染后,与对照组相比较,Lv-RRS1组RRS1 mRNA和蛋白表达量均明显增加(t=15.59、6.05,P<0.01);对转染的细胞以400μmol/L MPP^+处理48 h后,与对照组相比较,Lv-RRS1组细胞增殖活力显著升高(t=4.76,P<0.01);细胞凋亡率明显降低(t=5.80,P<0.01);RRS1蛋白和Bcl-2蛋白表达明显升高(t=12.41、3.14,P<0.05);P53蛋白和Bax蛋白表达显著降低(t=5.20、4.77,P<0.05)。结论RRS1在MPP^+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡中低表达,RRS1可能通过影响凋亡相关因子P53、Bax和Bcl-2蛋白的表达参与MPP^+诱导的SH-SY5Y细胞的凋亡。 展开更多
关键词 核蛋白质类 1-甲基-4-苯基吡啶 细胞系 肿瘤 神经母细胞瘤 帕金森病 细胞凋亡 基因 p53 BCL-2相关X蛋白质 原癌基因蛋白质C-BCL-2 体外研究
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类固醇激素在体外对肿瘤细胞bcl-2表达及端粒酶活性影响的研究
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作者 刘芬 林贤东 《海峡药学》 2001年第2期88-89,118,共3页
探讨类固醇激素对端粒酶活性调节的机制及 bcl- 2蛋白水平表达的影响。采用 PCR- ELISA方法检测类固醇激素作用前后 KS、SGC端粒酶活性的改变 ,免疫组化 S- P方法检测 bcl- 2蛋白表达水平。结果说明乙烯雌酚显著增强 KS、SGC端粒酶的活... 探讨类固醇激素对端粒酶活性调节的机制及 bcl- 2蛋白水平表达的影响。采用 PCR- ELISA方法检测类固醇激素作用前后 KS、SGC端粒酶活性的改变 ,免疫组化 S- P方法检测 bcl- 2蛋白表达水平。结果说明乙烯雌酚显著增强 KS、SGC端粒酶的活性 ,丙酸睾丸酮和乙烯雌酚不同程度增强bcl- 2蛋白表达。 展开更多
关键词 端粒梅 活性 原致癌基因 c-bcl-2 类固醇激素 人肿瘤细胞系
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2,3-吲哚醌对乳腺癌BT549细胞生长的抑制作用及其机制
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作者 李雪 杨雨 +2 位作者 张丽 周娜 侯琳 《精准医学杂志》 2020年第3期208-212,共5页
目的探讨2,3-吲哚醌对乳腺癌BT549细胞生长的抑制作用及其机制。方法体外培养乳腺癌BT549细胞,通过CCK8实验筛选2,3-吲哚醌药物浓度并检测其对BT549细胞增殖的抑制作用;乳腺癌BT549细胞经2,3-吲哚醌加药处理72 h后,通过Transwell、划痕... 目的探讨2,3-吲哚醌对乳腺癌BT549细胞生长的抑制作用及其机制。方法体外培养乳腺癌BT549细胞,通过CCK8实验筛选2,3-吲哚醌药物浓度并检测其对BT549细胞增殖的抑制作用;乳腺癌BT549细胞经2,3-吲哚醌加药处理72 h后,通过Transwell、划痕实验检测2,3-吲哚醌对BT549细胞侵袭和迁移的抑制作用;2,3-吲哚醌加药处理BT549细胞72 h后,采用实时定量PCR(qPCR)方法检测BT549细胞中p53基因(p53)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白基因(Bax)以及MDM2基因(MDM2)mRNA相对表达量的变化;2,3-吲哚醌加药处理BT549细胞72 h后,采用Western blot方法检测细胞中P53、Bcl-2、Bax和MDM2蛋白的相对表达情况。结果CCK8实验结果显示,与0μmol/L组相比,随着2,3-吲哚醌浓度的升高,BT549细胞的增殖水平逐渐下降(F=74.64,P<0.01)。Transwell实验和划痕实验结果显示,与0μmol/L组相比,加入2,3-吲哚醌的浓度越高,细胞的侵袭和迁移能力越低(F=751.48、314.67,P<0.01)。qPCR方法检测结果显示,与0μmol/L组相比较,随着2,3-吲哚醌浓度的增加,细胞中p53和Bax mRNA相对表达量逐渐增高(F=62.82、20.86,P<0.01),Bcl-2、MDM2 mRNA相对表达量逐渐下降(F=21.53、30.31,P<0.01)。Western blot检测结果显示,与0μmol/L组比较,随着2,3-吲哚醌浓度的增高,细胞中P53、Bax蛋白的相对表达水平逐渐增高(F=29.59、53.12,P<0.01),Bcl-2、MDM2蛋白相对表达水平逐渐下降(F=14.85、159.81,P<0.01)。结论2,3-吲哚醌通过P53信号通路抑制乳腺癌BT549细胞的增殖、侵袭和迁移。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 2 3-吲哚醌 基因 p53 肿瘤抑制蛋白质P53 bcl-2 原癌基因蛋白质C-BCL-2 BCL-2相关X蛋白质 细胞增殖 细胞运动 体外研究
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bcl-2和PCNA在皮肤混合瘤中的表达特点及意义
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作者 杨长俊 吴莉莉 《中国现代药物应用》 2010年第6期22-23,共2页
目的探讨原癌基因蛋白质(bcl-2)和增殖细胞核抗原(PCNA)在皮肤混合瘤中的表达特点及意义。方法采用免疫组化Envision二步法检测10例皮肤混合瘤标本中的bcl-2和PCNA的表达情况。结果10例患者标本中均见bcl-2和PCNA阳性染色。肿瘤巢内,衬... 目的探讨原癌基因蛋白质(bcl-2)和增殖细胞核抗原(PCNA)在皮肤混合瘤中的表达特点及意义。方法采用免疫组化Envision二步法检测10例皮肤混合瘤标本中的bcl-2和PCNA的表达情况。结果10例患者标本中均见bcl-2和PCNA阳性染色。肿瘤巢内,衬于囊腔和导管样结构内侧的肿瘤细胞示PCNA阳性,而上皮样细胞示bcl-2阳性。结论皮肤混合瘤中bcl-2、PCNA的异常表达似与此肿瘤的发生有关。 展开更多
关键词 原癌基因蛋白质bcl-2 增殖细胞核抗原PCNA 皮肤混合瘤
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Overexpression of Bcl-2 partly inhibits apoptosis of human cervical cancer SiHa cells induced by arsenic trioxide 被引量:7
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作者 邓友平 林晨 +5 位作者 郑杰 付明 梁萧 陈洁平 肖培根 吴旻 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2000年第1期84-88,共5页
OBJECTIVE: To study the biological effect of arsenic trioxide (As2O3) on human cervical cancer SiHa cells and SiHa cells overexpressing bcl-2 gene. METHODS: SiHa cells with overexpression of Bcl-2 (SiHa-Bcl2 cells) we... OBJECTIVE: To study the biological effect of arsenic trioxide (As2O3) on human cervical cancer SiHa cells and SiHa cells overexpressing bcl-2 gene. METHODS: SiHa cells with overexpression of Bcl-2 (SiHa-Bcl2 cells) were established by transfecting SiHa cells with Bcl-2 expression vector. The sensitivities of SiHa and SiHa-Bcl2 cells to As2O3 were determined using MTT (Thiazolyl blue) reduction and colony forming ability assay, morphological analysis, flow cytometric analysis, DNA agarose gel electrophoresis, in situ cell death detection (TUNEL), Northern blot, RT-PCR and Western blot. RESULTS: As2O3 inhibited the growth of SiHa cells and induced G2/M arrest and apoptosis of the cells. RT-PCR and Western blot analysis revealed that As2O3 induced SiHa cell apoptosis possibly via inhibiting the expression of HPV16 E7 and decreasing the expression of c-myc. However, we found that SiHa-Bcl2 cells partly resisted As2O3 induced apoptosis, which might be related to the prevention of the down-regulation of HPV16 E7 and c-myc gene expression. Nevertheless, As2O3 at a high concentration could still induce apoptosis of SiHa-Bcl2 cells mainly via decreasing Bcl-2 expression and slightly inhibiting viral gene expression. CONCLUSION: As2O3 is an inducer of the apoptosis of human cervical carcinoma cells and the cells overexpressing Bcl-2 can partly resist As2O3 induced apoptosis, but the exact mechanism is unclear. 展开更多
关键词 Antineoplastic Agents Apoptosis ARSENICALS Cell Cycle Cell Survival DNA Neoplasm Female Humans OXIDES Proto-Oncogene proteins Proto-Oncogene proteins c-bcl-2 tumor Suppressor protein p53 Uterine Cervical Neoplasms bcl-2-Associated X protein
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氧化砷诱导食管癌细胞凋亡线粒体形态改变 被引量:19
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作者 沈忠英 沈健 +2 位作者 陈铭华 李乔山 洪超群 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期200-203,共4页
目的 通过研究食管癌细胞株SHEEC1细胞凋亡早期线粒体的形态改变和bcl 2、bax的表达 ,以了解三氧化二砷 (As2 O3 )作用于食管癌细胞的机制。方法 食管癌细胞株SHEEC1用 1、2、3μmol/LAs2 O3 作用 2、4、6、1 2、2 4h。用Annexin V... 目的 通过研究食管癌细胞株SHEEC1细胞凋亡早期线粒体的形态改变和bcl 2、bax的表达 ,以了解三氧化二砷 (As2 O3 )作用于食管癌细胞的机制。方法 食管癌细胞株SHEEC1用 1、2、3μmol/LAs2 O3 作用 2、4、6、1 2、2 4h。用Annexin V荧光探针 ,流式细胞仪和DNA组方图检测早期凋亡细胞 ;光镜和电镜检测凋亡细胞的形态学改变 ;用罗达明 (Rhodamin 1 2 3)荧光探针检查活细胞线粒体的改变 ;用免疫组织化学SP方法检查bcl 2和bax的表达。结果 SHEEC1细胞经As2 O3 作用 2 4h出现细胞凋亡的典型形态改变。 4h可用Annexin V查出早期凋亡细胞。线粒体的超微结构改变如下 :As2 O3 作用 2~ 4h内线粒体增生 ,伴有电子密度高物质出现在基质 ,是早期细胞损伤的现象。作用 6h线粒体进行性肿胀 ,1 2h出现气球样外观 ,甚至外膜破裂。不同剂量皆引起损伤脱落细胞bcl 2表达下调和bax上调。结论 由As2 O3 诱导的SHEEC1细胞凋亡 ,线粒体形态改变是早期改变 ,细胞凋亡和bax表达上调及bcl 展开更多
关键词 食管肿瘤 脱噬作用 线粒体 氧化砷 细胞凋亡
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食管肿瘤干细胞的分选及鉴定的实验研究 被引量:9
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作者 孙志刚 黄盛东 +4 位作者 张宝仁 徐志云 刘晓红 龚德军 袁扬 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期291-295,共5页
目的进行人食管肿瘤干细胞(CSCs)的分选及鉴定。方法通过获取人食管癌标本进行肿瘤细胞的培养,应用流式细胞仪检测p75NTR在人食管肿瘤细胞(ECCs)中的表达,应用磁珠分选法(MACS)进行p75NTR阳性细胞与阴性细胞的分选,研究p75NTR... 目的进行人食管肿瘤干细胞(CSCs)的分选及鉴定。方法通过获取人食管癌标本进行肿瘤细胞的培养,应用流式细胞仪检测p75NTR在人食管肿瘤细胞(ECCs)中的表达,应用磁珠分选法(MACS)进行p75NTR阳性细胞与阴性细胞的分选,研究p75NTR阳性细胞的增殖、分化、软琼脂集落形成能力,并进行裸鼠接种以观察其致瘤能力。结果在8个食管肿瘤细胞系(株)中,除SHEC-1、SHEC-5未检测到p75NTR阳性细胞外,其余6个细胞系(株)中检测到p75NTR阳性细胞为0.32%-3.35%。MACS分选后的p75NTR阳性细胞的增殖能力明显强于阴性细胞[群体倍增时间分别为(17±3)h、(37±7)h,P〈0.01];p75NTR阳性细胞具有分化产生其他表型细胞的能力;p75NTR阳性细胞在软琼脂中的集落形成能力(45.9%±8.9%)显著高于阴性细胞(3.7%±2.1%),P〈0.01;行裸鼠接种时,p75NTR阳性细胞表现出较强的致瘤性,SHEC-7细胞只需2×10^3个即可致瘤,其致瘤能力是未分选细胞的50倍。结论人ECCs中p75NTR阳性细胞具有自我更新、分化、增殖能力,并具有较强的致瘤能力,p75NTR阳性细胞具有CSCs的特性。 展开更多
关键词 食管肿瘤 肿瘤干细胞 癌基因蛋白质v-fos类
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弥漫大B细胞淋巴瘤患者蛋白表达检测的预后意义 被引量:11
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作者 俞文娟 曹利红 +8 位作者 王敬瀚 王照明 钱文斌 佟红艳 孟海涛 麦文渊 毛莉萍 钱劼靖 金洁 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期784-788,共5页
目的探讨TP53、Bcl-2、Bcl-6、Myc蛋白表达对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBcL)患者预后的影响。方法回顾性分析223例DLBCL患者的临床资料,对有完整病理资料患者的石蜡标本采用免疫组化法进行TP53、Bcl-2、Bcl-6、Myc蛋白表达检查,并结合临... 目的探讨TP53、Bcl-2、Bcl-6、Myc蛋白表达对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBcL)患者预后的影响。方法回顾性分析223例DLBCL患者的临床资料,对有完整病理资料患者的石蜡标本采用免疫组化法进行TP53、Bcl-2、Bcl-6、Myc蛋白表达检查,并结合临床资料进行预后影响因素分析。结果①223例患者中男133例,女90例,中位发病年龄为56(15~83)岁。所有患者均进行TP53、Myc、Bcl-2、Bcl-6蛋白检测,阳性率分别为39.0%、38.6%、69.1%、56.5%,Myc/Bcl-2双表达22.7%(64/223);按照Hans分型分类,生发中心起源B细胞亚型(GCB型)占27.4%,non-GCB占72.6%。②进一步分析发现TP53蛋白表达组non—GCB亚型居多(81.6%对66.9%,P=0.021),且与Myc表达存在显著正相关(P〈0.001)。③219例患者获得完整随访资料,中位随访时间为38(2~97)个月,3、5年总生存(OS)率分别为70%、66%。单因素分析结果显示Bcl-6蛋白表达为预后良好因素(P=0.034),TP53高表达(P=0.007)、Myc/Bcl-2双表达(P=0.012)为预后不良因素。多因素分析结果显示TP53高表达(HR=1.848,95%CI 1.025-2.968,P=0.010)及Myc/Bcl-2双表达(HR=1.124,95%C11.134~2.256,P=0.032)为独立预后不良因素。④TP53阳性与阴性组患者3年OS率分别为59%和77%,5年OS率分别为57%和71%,差异均有统计学意义(P值均〈0.05)。结论免疫组化法检测Mye/Bcl-2双表达及TP53高表达能够预测DLBCL患者的预后,Myc/Bcl-2双表达及TP53高表达是DLBCL患者的独立预后不良因素。 展开更多
关键词 淋巴瘤 大B细胞 弥漫性 肿瘤抑制蛋白质P53 原癌基因蛋白质c—myc 原癌 基因蛋白质c-bcl-2 预后
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P53抑制剂诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究 被引量:3
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作者 燕学波 吕安林 +3 位作者 刘博武 黄炜 侯婧 李垚 《中华临床医师杂志(电子版)》 CAS 2011年第10期2878-2885,共8页
目的研究P53特异性抑制剂对骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的影响。方法分离SD大鼠骨髓间充质干细胞,取第4代骨髓间充质干细胞分为对照组(CON)和P53特异性抑制剂(PFT-α)组。观察骨髓间充质干细胞诱导前后细胞形态变化,流式细胞仪鉴... 目的研究P53特异性抑制剂对骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的影响。方法分离SD大鼠骨髓间充质干细胞,取第4代骨髓间充质干细胞分为对照组(CON)和P53特异性抑制剂(PFT-α)组。观察骨髓间充质干细胞诱导前后细胞形态变化,流式细胞仪鉴定骨髓间充质干细胞表面抗原及诱导后心肌样细胞分化率,免疫荧光法检测诱导后cTnI、CX-43表达,Western Blot法测定诱导后cTnI、P53、P21蛋白表达情况。结果原代培养的骨髓间充质干细胞2周形成集落,传代诱导后细胞体积变大,呈长梭形,排列趋一致。流式细胞仪测定骨髓间充质干细胞表面抗原CD44阳性表达率为(89.98±1.29)%,CD45阳性表达率为(2.14±0.22)%。心肌样细胞鉴定结果显示:诱导后1周,空白对照组未见cTnI和CX-43免疫荧光表达,PFT-α组少量表达cTnI和CX-43;诱导后4周时,可见空白对照组少量表达cTnI和CX-43,PFT-α组强表达cTnI和CX-43。WesternBlot检测诱导1周时PFT-α组cTnI表达与对照组比较,有统计学差异(P<0.01)。诱导后4周,PFT-α组cTnI表达与对照组比较,有统计学差异(P<0.01)。两组cTnI表达量4周与1周比较有统计学差异(P<0.05)。诱导1周时,PFT-α组几乎不表达P53蛋白,PFT-α组与对照组比较有统计学差异(P<0.05)。诱导4周时,PFT-α组与对照组比较有统计学差异(P<0.05)。PFT-α组诱导4周时P53、P21表达量与1周时比较均有统计学差异(P<0.05)。心肌细胞分化率结果显示,诱导4周时,PFT-α组与空白对照组比较有统计学差异(P<0.01)。结论通过P53特异性抑制剂PFT-α阻断P53-P21蛋白通路,能诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化。 展开更多
关键词 间充质干细胞 心肌 肿瘤抑制蛋白质P53 癌基因蛋白质P21(ras)
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干细胞生长因子反义寡核苷酸对肝癌细胞中原癌基因蛋白质c-kit及碱性成纤维细胞生长因子表达的影响 被引量:4
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作者 吴宁 朱博慧 +2 位作者 薛英姿 郭显智 姜玲 《中华临床医师杂志(电子版)》 CAS 2011年第12期3449-3454,共6页
目的探讨干细胞生长因子(SCF)反义寡核苷酸对肝癌HepG2细胞中原癌基因蛋白质c-kit、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响及意义。方法以脂质体作为转染载体,转染SCF反义寡核苷酸于HepG2细胞。实验分三组:(1)空白对照组;(2)转染SCF... 目的探讨干细胞生长因子(SCF)反义寡核苷酸对肝癌HepG2细胞中原癌基因蛋白质c-kit、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响及意义。方法以脂质体作为转染载体,转染SCF反义寡核苷酸于HepG2细胞。实验分三组:(1)空白对照组;(2)转染SCF反义寡核苷酸组;(3)转染SCF错义寡核苷酸组。Western blot方法检测转染前后肝癌细胞中SCF、bFGF蛋白的表达,RT-PCR检测转染前后肝癌细胞中c-kit与bFGF mRNA的表达,用流式细胞仪检测转染SCF反义寡核苷酸后HepG2细胞凋亡率。结果与转染错义寡核苷酸组相比,SCF反义寡核苷酸对HepG2细胞中c-kit、bFGF的表达有明显抑制作用,转染SCF反义寡核苷酸可明显增加HepG2细胞凋亡率(P<0.01)。结论 SCF在肝癌细胞凋亡中有重要调节作用,SCF/c-kit有可能作为PI3K/Akt信号通路的上游对肝癌细胞bFGF的表达起重要调控作用。 展开更多
关键词 肝肿瘤 干细胞因子 寡核苷酸类 反义 原癌基因蛋白质C-KIT 成纤维细胞 生长因子2 转染
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皮肤混合瘤中bcl-2和增殖细胞核抗原的免疫组化研究 被引量:2
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作者 尤德渊 王艳东 尤海燕 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期300-302,共3页
目的探讨bcl-2和增殖细胞核抗原(PCNA)在皮肤混合瘤中的表达及意义。方法采用免疫组化S-P法及免疫组化双染技术对12例皮肤混合瘤皮损标本中bcl-2和PCNA的表达进行观察。结果12例患者的皮损标本均见bcl-2及PCNA阳性染色。肿瘤巢内,衬于... 目的探讨bcl-2和增殖细胞核抗原(PCNA)在皮肤混合瘤中的表达及意义。方法采用免疫组化S-P法及免疫组化双染技术对12例皮肤混合瘤皮损标本中bcl-2和PCNA的表达进行观察。结果12例患者的皮损标本均见bcl-2及PCNA阳性染色。肿瘤巢内,衬于囊腔和导管样结构内侧的肿瘤细胞示PCNA阳性,而上皮样肿瘤细胞示bcl-2阳性。bcl-2阳性的肿瘤细胞多呈PCNA阴性染色,而bcl-2阴性的肿瘤细胞多呈PCNA阳性染色。结论皮肤混合瘤中bcl-2、PCNA的异常表达似与此肿瘤的发生相关。 展开更多
关键词 BCL-2 皮肤混合瘤 免疫组化研究 增殖细胞核抗原(PCNA) 免疫组化S-P法 阳性染色 肿瘤细胞 异常表达 细胞多 表达及 上皮样 标本 皮损 阴性
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造血干细胞移植受者外周血中单核细胞趋化蛋白2水平变化与急性移植物抗宿主病发生相关性探讨 被引量:2
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作者 许多荣 杨茂华 +5 位作者 张祥忠 彭爱华 许辉茹 邹外一 黄珊 李娟 《中华移植杂志(电子版)》 CAS 2009年第4期285-288,共4页
目的探讨白血病患者异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)术后外周血中单核细胞趋化蛋白2(MCP-2/CCL8)水平的变化与急性移植物抗宿主病(aGVHD)发生之间的关系。方法以10例白血病自体造血干细胞移植(auto-HSCT)患者作为对照,采用酶联免疫分... 目的探讨白血病患者异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)术后外周血中单核细胞趋化蛋白2(MCP-2/CCL8)水平的变化与急性移植物抗宿主病(aGVHD)发生之间的关系。方法以10例白血病自体造血干细胞移植(auto-HSCT)患者作为对照,采用酶联免疫分析法检测31例行allo-HSCT白血病患者(观察组)干细胞回输前1d(-1d)、回输后7d(+7d)外周血中CCL8、TNF-α和IL-2的水平;同时,对观察组受者+7d后每7d动态监测上述指标,至+98d结束。结果对照组和观察组+7d时血浆中CCL8、TNF-α和IL-2的中位水平与-1d时比较,各指标均无明显改变(均P>0.05)。观察组中共11例发生了aGVHD。11例受者在诊断aGVHD时,IL-2水平与+7d时比较无明显变化(P>0.05),但CCL8和TNF-α水平较+7d时明显升高(均P<0.05);经抗aGVHD治疗获得完全缓解后,血浆中CCL8、TNF-α水平又降至+7d时水平(均P<0.05);aGVHD患者血浆CCL8水平首次升高至出现aGVHD临床症状的平均间隔时间为(7.0±1.6)d,而TNF-α水平变化的间隔时间则为(2.4±1.1)d,两者比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论CCL8可能参与了allo-HSCT受者aGVHD的发生,而且其血浆水平出现显著变化的时间要早于TNF-α。 展开更多
关键词 急性移植物抗宿主病 异基因造血干细胞移植 单核细胞趋化蛋白2 Α肿瘤坏死因子 白细胞介素2
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