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猪流行性腹泻病毒微芯片荧光定量RT-qPCR检测方法的建立
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作者 曹洪志 王新杰 +6 位作者 高姗姗 孙晓明 邓飞 石艳萍 陈弟诗 陈昌英 李平顺 《动物医学进展》 北大核心 2024年第9期45-48,共4页
为了建立简便快速的猪流行性腹泻病毒(PEDV)荧光定量RT-qPCR检测方法,根据GenBank数据库公布的猪流行性腹泻病毒囊膜蛋白E基因,设计特异性引物和探针结合微芯片技术,建立微芯片荧光定量RT-qPCR检测方法。该方法除对PEDV检测为阳性外,对... 为了建立简便快速的猪流行性腹泻病毒(PEDV)荧光定量RT-qPCR检测方法,根据GenBank数据库公布的猪流行性腹泻病毒囊膜蛋白E基因,设计特异性引物和探针结合微芯片技术,建立微芯片荧光定量RT-qPCR检测方法。该方法除对PEDV检测为阳性外,对与其同源性较近的致病病毒的检测均为阴性;最低检测限为1 copies/μL,常规荧光RT-qPCR检测限为10 copies/μL。批内、批间重复性试验表明,Ct值变异系数均在2%以内,可对PEDV临床样本进行检测。建立的检测方法特异性好、敏感性高、检测时间短且重复性好,适用于临床检测。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 微芯片 实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应 囊膜蛋白
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建立检测猕猴三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2的mRNA相对表达水平的RT-qPCR方法
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作者 林小瑞 张铭润 +5 位作者 王陈芸 周玮 叶尤松 龙维虎 李哲丽 唐东红 《实验动物科学》 2024年第2期35-40,共6页
目的本研究旨在建立一种实时荧光定量PCR方法,用于检测猕猴三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(adenosine triphosphate-binding cassette transporter protein G2,ABCG2)mRNA的基因转录水平。方法使用NCBI上GenBank数据库猕猴(Macaca mulatta)... 目的本研究旨在建立一种实时荧光定量PCR方法,用于检测猕猴三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(adenosine triphosphate-binding cassette transporter protein G2,ABCG2)mRNA的基因转录水平。方法使用NCBI上GenBank数据库猕猴(Macaca mulatta)的ABCG2核苷酸序列号NM_001032919.1及内参GAPDH核苷酸序列号NM_001195426.1,借助Primer premier 5.0软件设计PCR引物。提取猕猴新鲜肾组织的总RNA,并反转录合成cDNA。接着,利用PCR引物进行实时荧光定量PCR扩增,并根据反应体系中荧光的变化情况定量分析ABCG2的mRNA相对表达水平。结果PCR产物测序结果显示,扩增的ABCG2和GAPDH核苷酸序列与NCBI上猕猴的序列同源性分别为90.91%和91.14%。ABCG2和GAPDH的扩增效率均达到80%~120%,实时荧光定量PCR标准曲线的熔解曲线为单峰,R2接近1。结论本研究建立的检测猕猴ABCG2 mRNA实时荧光定量检测方法,为研究高尿酸血症的发病机制以及新药开发奠定基础。 展开更多
关键词 猕猴 实时荧光定量PCR 三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2
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三种血清学方法和qPCR方法在鸡滑液囊支原体检测中的综合应用研究 被引量:1
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作者 郭婷婷 赵佳 +7 位作者 马爽 陈杨 樊鹏程 毕涛旭 楚电峰 郭梦娇 吴艳涛 张小荣 《中国家禽》 北大核心 2024年第4期113-119,共7页
为评价不同方法对鸡滑液囊支原体(MS)活疫苗免疫和非免疫状态鸡群的监测效果,研究分别采用HI、SPA与ELISA三种抗体检测方法和qPCR方法同步对某养殖场A、B和C三组鸡群进行MS感染和抗体水平监测,其中A鸡群23日龄免疫MS活疫苗(MS-H株),B、... 为评价不同方法对鸡滑液囊支原体(MS)活疫苗免疫和非免疫状态鸡群的监测效果,研究分别采用HI、SPA与ELISA三种抗体检测方法和qPCR方法同步对某养殖场A、B和C三组鸡群进行MS感染和抗体水平监测,其中A鸡群23日龄免疫MS活疫苗(MS-H株),B、C鸡群不免疫MS疫苗。结果显示:三种血清学检测方法所测MS抗体阳性率趋势基本一致,HI抗体效价变化规律和ELISA抗体效价变化规律相似,但血清学方法相对于qPCR方法具有一定的滞后性,qPCR可以最早发现MS野毒感染,且在使用活疫苗免疫的情况下对疫苗和野毒进行鉴别检测。研究提示:在条件允许的情况下,qPCR可以作为MS首选的监测方法;当检测条件受限时,上述三种血清学方法同样也可以用于评估MS野毒感染状况,但对结果的判断受母源抗体水平、疫苗免疫状况、野毒感染时间等多重因素的影响,在结果判断时应进行综合分析。 展开更多
关键词 鸡滑液囊支原体 血凝抑制试验 血清平板凝集试验 酶联免疫吸附试验 qpcr
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黄颡鱼杆套病毒TaqMan qPCR检测方法的建立与应用
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作者 王亿文 潘晓艺 +4 位作者 蔺凌云 刘思玉 姚嘉赟 王甘翔 沈锦玉 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2024年第6期48-56,共9页
黄颡鱼杆套病毒(Yellow catfish nidovirus,YCNdV)是近年来在养殖黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)中新发现的病毒性病原,为找到灵敏检测该病毒的方法,本研究根据YCNdV的衣壳基因序列设计特异性引物及探针,对反应体系和反应条件进行优化... 黄颡鱼杆套病毒(Yellow catfish nidovirus,YCNdV)是近年来在养殖黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)中新发现的病毒性病原,为找到灵敏检测该病毒的方法,本研究根据YCNdV的衣壳基因序列设计特异性引物及探针,对反应体系和反应条件进行优化,建立了TaqMan qPCR方法,并与套氏PCR进行了临床样品的检出率比较。结果显示:反应体系优化后的引物和探针终浓度分别为0.4μmol/L和0.1μmol/L,获得的最佳退火延伸温度为58℃,该条件下,最低检测限为4 copies的pMD19-YCNdV.cap质粒标准品;标准曲线线性关系好且线性范围广(3.37×10^(10)~3.37×100 copies/μL),相关系数(R^(2))为0.9984,扩增效率为91.3%;特异性检测结果表明,与黄颡鱼小RNA病毒(Yellow catfish picornavirus,YCPrV)、草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型(Grass carp reovirus genotypeⅡ,GCRV-Ⅱ)、鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)、大口黑鲈弹状病毒(Micropterus salmoides rhabdovirus,MSRV)、大口黑鲈蛙虹彩病毒(Largemouth bass virus,LMBV)、传染性脾肾坏死病毒(Infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)、鲤浮肿病毒(Carp edema virus,CEV)和锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)均无交叉扩增信号;重复性实验结果显示,组间和组内变异系数均小于0.6%;对保存的32份疑似黄颡鱼杆套病毒感染样品进行检测,结果表明,TaqMan qPCR检出率较套氏PCR高9.37个百分点;TaqMan qPCR检测发病黄颡鱼各组织发现,在脾、鳃和肾中YCNdV病毒载量显著高于其它组织。以上结果表明,本研究建立的TaqMan qPCR检测方法具有良好的特异性、重复性和超高的灵敏度,可用于YCNdV的定量检测,为YCNdV引起疾病的早防早治提供可靠检测手段。 展开更多
关键词 黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco) 杆套病毒 TaqMan qpcr 组织分布
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PEDV、PoRVA和PDCoV TaqMan三重RT-qPCR检测方法的建立与初步应用 被引量:1
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作者 胡泽奇 李润成 +5 位作者 谭祖明 谢秀艳 王江平 秦乐娟 李荣 葛猛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2267-2272,共6页
旨在建立一种可快速同时检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)、猪A群轮状病毒(porcine rotavirus type A, PoRVA)和猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)三重荧光定量PCR方法。针对PEDV-N、PoRVA-... 旨在建立一种可快速同时检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)、猪A群轮状病毒(porcine rotavirus type A, PoRVA)和猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)三重荧光定量PCR方法。针对PEDV-N、PoRVA-VP6和PDCoV-M基因设计了引物和探针,条件优化后进行性能评估,并与商品化试剂盒检测对比。结果显示:本研究建立的三重RT-qPCR方法具有良好特异性,对PRRSV、PCV_2和PRV等阳性核酸不发生扩增;具有较高的敏感性,PEDV、PoRVA和PDCoV的最低检测限均达1 copies·μL^(-1);重复性良好,组内和组间变异系数均小于1%;样本适应性广,检测不同样本类型时,变异系数均小于1%。与商品化试剂盒对比,本研究建立的方法PEDV和PoRVA的检测符合率为92.5%和97.5%,并对PDCoV的检测范围更广,对其变异毒株仍有较好的检测效果。本研究建立的检测方法具有特异性好、敏感性高、稳定性强和样本适应性广等优势,为临床腹泻样本提供了一种好的检测方法。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪A群轮状病毒 猪丁型冠状病毒 三重RT-qpcr
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猪肉及制品中HEV、PEDV和PDCoV三重qPCR方法的建立与应用 被引量:1
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作者 余姓鸿 张婧 +7 位作者 安微 杨苗 谢礼 舒佳新 薛昌华 郑巧 林华 韩国全 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2024年第2期210-219,共10页
人兽共患病引发的动物源性食品安全事件频发,为从食品原料源头上控制和保障其食用安全,控制猪肉及其制品消费成本,本研究构建了可同时检测猪肉及制品中戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhe... 人兽共患病引发的动物源性食品安全事件频发,为从食品原料源头上控制和保障其食用安全,控制猪肉及其制品消费成本,本研究构建了可同时检测猪肉及制品中戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和猪δ冠状病毒(Porcine delta corona virus,PDCoV)三重实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR,qPCR)方法。结果表明,三重qPCR方法只能扩增出3种目的病毒的特异性基因片段,特异性好;对HEV、PEDV和PDCoV三种病毒的最低检测限分别为6.02、6.98、6.92 copies/μL;组内和组间变异系数(CV%)在0.10%~3.00%之间,重复性好。将所建立方法应用于248份出口猪肉及制品和282份生猪粪拭子的检测,同时以相应病毒标准检测方法进行平行检测,结果显示猪肉及制品中三种病毒的检出率均为0%,与标准方法检测结果一致。生猪粪拭子中,该方法对PEDV、PDCoV和HEV三种病毒的检出率分别为1.06%、3.19%、0.35%,标准方法检出率分别为1.06%、3.19%、0%。研究表明,建立的三重qPCR检测方法能准确快速地检测猪肉及制品或生猪样品中三种病毒,为保障生鲜猪肉及其制品市场流通和阻断病毒食源性传播提供技术支持。 展开更多
关键词 猪肉 戊型肝炎病毒(HEV) 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 猪δ冠状病毒(PDCoV) 三重qpcr
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基于核酸适配体的SYBR Green I qPCR法检测鳗弧菌(Vibrio anguillarum)
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作者 谭英 赵玲敏 +5 位作者 翁齐彪 黄力行 鄢庆枇 黄将远 白月 郑江 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期942-950,共9页
鳗弧菌(Vibrio anguillarum)可感染鲈鱼、鳗鲡等多种水产养殖动物,是水产养殖中的重要病原菌,对其进行快速检测是病害防控的基础。利用鳗弧菌与其核酸适配体间较强的亲和特异性,通过核酸适配体来识别、结合鳗弧菌,然后以结合的核酸适配... 鳗弧菌(Vibrio anguillarum)可感染鲈鱼、鳗鲡等多种水产养殖动物,是水产养殖中的重要病原菌,对其进行快速检测是病害防控的基础。利用鳗弧菌与其核酸适配体间较强的亲和特异性,通过核酸适配体来识别、结合鳗弧菌,然后以结合的核酸适配体为模板,进行SYBR Green I实时荧光定量PCR(qPCR)扩增,通过Ct值来定量检测鳗弧菌的浓度,从而建立了鳗弧菌的适配体-qPCR定量检测方法。从特异性、标准曲线、灵敏度、重复性和应用效果对该方法进行分析,表明该方法具有很强的特异性,能特异性地扩增鳗弧菌,且对哈维氏弧菌、溶藻弧菌、变形假单胞菌、大肠杆菌、嗜水气单胞菌和迟钝爱德华氏菌均无扩增;在10^(3)~10^(11) CFU/L的检测范围内有较好的线性关系,可用于鳗弧菌的定量检测;同时,该方法有较高的灵敏度和稳定性,其最低检测限为10^(3) CFU/L,组内和组间变异系数分别小于0.17%和1.98%;最后采用该方法对鱼体组织样品进行了应用检测,证明了该方法具有较好的可行性和应用性,可用于水产品或食品中鳗弧菌的定量检测。 展开更多
关键词 鳗弧菌 核酸适配体 实时荧光定量PCR 检测限
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含内参的登革和寨卡病毒三重RT-qPCR检测方法的建立与评估
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作者 曹孟涛 胡潇予 +4 位作者 杨微 李春缘 徐晓立 任瑞文 蒋红霞 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期537-543,共7页
目的 本研究旨在建立一种登革病毒以及寨卡病毒并含人类基因为内参的三重RT-qPCR检测方法,可以同时检测出内参、登革病毒以及寨卡病毒。方法 针对登革病毒4种血清型的保守区域和寨卡病毒的NS1基因以及人类各个组织中稳定表达的β-actin... 目的 本研究旨在建立一种登革病毒以及寨卡病毒并含人类基因为内参的三重RT-qPCR检测方法,可以同时检测出内参、登革病毒以及寨卡病毒。方法 针对登革病毒4种血清型的保守区域和寨卡病毒的NS1基因以及人类各个组织中稳定表达的β-actin基因,设计3组特异性引物和探针。构建4种血清型的登革病毒、寨卡病毒以及β-actin标准质粒作为阳性质控品,采用L_(9)(3^(4))正交实验方法确定最佳反应条件,对其特异性、灵敏性及覆盖面进行验证与临床评估,并与检测登革病毒的商品化试剂盒进行了一致性评估。结果 本实验建立的三重RT-qPCR检测方法与12种相近虫媒病毒无非特异性交叉反应;对登革病毒与寨卡病毒的检测灵敏度分别为2.99和2.18 copies/μL组内和组间重复性变异系数均在1.5%以内;与商品化试剂盒相比较,该检测方法对13株登革流行病毒均可获阳性结果;经过Bland-Altman一致性分析,商品化试剂盒和该方法对临床阳性样本检测结果一致性达到92.59%。结论 本研究建立了一种特异性强、灵敏度高的含内参的登革病毒和寨卡病毒三重RT-qPCR检测方法,可作为登革病毒与寨卡病毒感染者的早期快速鉴别诊断的有效工具,也可用于病毒暴发地区的快速筛查。 展开更多
关键词 三重RT-qpcr 登革病毒 寨卡病毒 内参
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qPCR检测白纹伊蚊携带Wolbachia分型及密度方法的建立与应用
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作者 熊易平 周宁馨 +7 位作者 梁国锐 李建航 李博 韩宛蓉 邢丹 郭晓霞 姜玉庭 赵彤言 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2024年第1期19-27,共9页
目的白纹伊蚊天然携带A与B亚组沃尔巴克氏体Wolbachia,这种共生菌能够通过抑制宿主传播病毒能力或降低宿主种群密度来控制虫媒疾病传播,且这种作用强度与其密度密切相关,本文旨在建立一种准确检测蚊虫携带Wolbachia分型与密度的方法。... 目的白纹伊蚊天然携带A与B亚组沃尔巴克氏体Wolbachia,这种共生菌能够通过抑制宿主传播病毒能力或降低宿主种群密度来控制虫媒疾病传播,且这种作用强度与其密度密切相关,本文旨在建立一种准确检测蚊虫携带Wolbachia分型与密度的方法。方法克隆白纹伊蚊携带Wolbachia的wsp基因并测序,在w AlbA与w AlbB wsp基因的非保守区设计特异性引物,建立qPCR检测方法。结果该方法灵敏性和特异性良好,两亚组Wolbachia无交叉反应。利用该方法检测不同浓度四环素处理后蚊虫携带Wolbachia密度下降程度,确定最适四环素处理浓度为0.1 mg/mL。结论本方法的建立为研究Wolbachia在蚊虫生理生殖和天然免疫方面的作用提供了技术支撑。 展开更多
关键词 白纹伊蚊 沃尔巴克氏体 qpcr 四环素
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芯片式支原体qPCR检测技术的开发与应用研究
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作者 姚杰 黄懿 《上海医药》 CAS 2024年第19期85-89,共5页
目的:为解决目前支原体检测方法操作复杂、耗时长、灵敏度低等问题,按照《中华人民共和国药典》(ChP)、美国药典(USP)、欧洲药典(EP)生物制品支原体检测方法及验证指导原则,构建一种快速芯片式的支原体检测方法,并对该方法检测能力进行... 目的:为解决目前支原体检测方法操作复杂、耗时长、灵敏度低等问题,按照《中华人民共和国药典》(ChP)、美国药典(USP)、欧洲药典(EP)生物制品支原体检测方法及验证指导原则,构建一种快速芯片式的支原体检测方法,并对该方法检测能力进行验证。方法:采用Taqman探针法,并利用快速qPCR仪结合芯片检测支原体,快速高效,可极大降低检测成本。结果与结论:本研究建立的基于qPCR的支原体检测方法特异性强、稳定性佳、可重复性好,可为支原体感染的诊断检测和流行病学调查提供方法学支持。 展开更多
关键词 支原体残留 探针法 qpcr
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三重TaqMan qPCR检测呼吸道感染衣原体方法的建立及应用
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作者 何琪富 夏丽君 +2 位作者 苟升东 肖胜 郭紫晶 《国际检验医学杂志》 CAS 2024年第S01期62-69,共8页
目的本试验的目的是建立可以快速鉴别诊断呼吸道感染肺炎衣原体(Cpn)、鹦鹉热衣原体(Cps)和沙眼衣原体(Ct)的三重TaqMan qPCR方法,有助于衣原体病的科学防控和指导临床用药,为公共卫生安全提供保障。方法选择Cpn、Cps和Ct特异基因ARGR、... 目的本试验的目的是建立可以快速鉴别诊断呼吸道感染肺炎衣原体(Cpn)、鹦鹉热衣原体(Cps)和沙眼衣原体(Ct)的三重TaqMan qPCR方法,有助于衣原体病的科学防控和指导临床用药,为公共卫生安全提供保障。方法选择Cpn、Cps和Ct特异基因ARGR、ompA和ORF8设计引物,建立标准曲线,优化反应条件和体系,验证方法的灵敏度、重复性;通过单独检测3种衣原体的荧光定量PCR方法验证本研究建立方法的准确性。结果结果显示,所建立的三重TaqMan qPCR方法特异度和重复性好,检测灵敏度分别为45 copy/μL(Cpn)、40 copy/μL(Cps)和43 copy/μL(Ct);利用该方法对600个临床样本进行检测,其检出率与参考方法比较,差异无统计学意义(P>0.05),表明该方法检测结果可靠。结论本研究建立的检测呼吸道感染衣原体的三重TaqMan qPCR方法特异性和重复性好,灵敏度高,结果可靠,为呼吸道感染衣原体临床诊治和流行病学监控提供有力工具。 展开更多
关键词 呼吸道感染 肺炎衣原体 鹦鹉热衣原体 沙眼衣原体 实时荧光定量PCR
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One-step quantum dialogue
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作者 朱鹏辉 钟伟 +3 位作者 杜明明 李喜云 周澜 盛宇波 《Chinese Physics B》 SCIE EI CAS CSCD 2024年第3期95-104,共10页
Quantum dialogue(QD)enables two communication parties to directly exchange secret messages simultaneously.In conventional QD protocols,photons need to transmit in the quantum channel for two rounds.In this paper,we pr... Quantum dialogue(QD)enables two communication parties to directly exchange secret messages simultaneously.In conventional QD protocols,photons need to transmit in the quantum channel for two rounds.In this paper,we propose a one-step QD protocol based on the hyperentanglement.With the help of the non-local hyperentanglement-assisted Bell state measurement(BSM),the photons only need to transmit in the quantum channel once.We prove that our one-step QD protocol is secure in theory and numerically simulate its secret message capacity under practical experimental condition.Compared with previous QD protocols,the one-step QD protocol can effectively simplify the experiment operations and reduce the message loss caused by the photon transmission loss.Meanwhile,the non-local hyperentanglement-assisted BSM has a success probability of 100%and is feasible with linear optical elements.Moreover,combined with the hyperentanglement heralded amplification and purification,our protocol is possible to realize long-distance one-step QD. 展开更多
关键词 one-step quantum dialogue hyperentanglement hyperentanglement distribution non-local Bell-state measurement
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Effect of the Retarder on Initial Hydration and Mechanical Properties of the"one-step"Alkaliactivated Composite Cementitious Materials
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作者 DING Rui HE Yue +3 位作者 LI Xingchen LI Han TIAN Hao WANG Hongen 《Journal of Wuhan University of Technology(Materials Science)》 SCIE EI CAS CSCD 2024年第5期1199-1213,共15页
This paper studied the effects of different retarders on the performance of the"one-step"alkali-activated composite cementitious material(ACCM)which is composed of ground granulated blast slag(GGBS)and fly a... This paper studied the effects of different retarders on the performance of the"one-step"alkali-activated composite cementitious material(ACCM)which is composed of ground granulated blast slag(GGBS)and fly ash(FA),and analyzed its mechanical properties,hydration mechanism,and retardation mechanism.The effects of retarders on the hydration products,mechanical properties,and hydration kinetics of ACCM were investigated using XRD,SEM,FTIR,EDS,and thermoactive microcalorimetry.The results showed that Na_(2)B_(4)O_(7)·10H_(2)O(B)delayed the exotherm during the alkali activation process and could effectively delay the setting time of ACCM,but the mechanical properties were slightly decreased.The setting time of ACCM increased with the increase in SG content,but the mechanical properties of ACCM decreased with the increase in SG content.C1_(2)H_(22)O_(11)(CHO)could effectively delay the hydration reaction of ACCM and weakly enhanced the compressive strength.H_(3)PO_(4)(HP)at a concentration of 0.05 mol/L had a certain effect on ACCM retardation,but HP at a concentration of 0.07 and 0.09 mol/L had an effect of promoting the setting and hardening time of ACCM. 展开更多
关键词 "one-step"alkali-activated composite cementitious materials solid activator hydration mechanism RETARDER retarding mechanism
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Three-dimensional visualization technology for guiding one-step percutaneous transhepatic cholangioscopic lithotripsy for the treatment of complex hepatolithiasis
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作者 Yong-Qing Ye Ya-Wen Cao +6 位作者 Rong-Qi Li En-Ze Li Lei Yan Zhao-Wei Ding Jin-Ming Fan Ping Wang Yi-Xiang Wu 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS 2024年第28期3393-3402,共10页
BACKGROUND Biliary stone disease is a highly prevalent condition and a leading cause of hospitalization worldwide.Hepatolithiasis with associated strictures has high residual and recurrence rates after traditional mul... BACKGROUND Biliary stone disease is a highly prevalent condition and a leading cause of hospitalization worldwide.Hepatolithiasis with associated strictures has high residual and recurrence rates after traditional multisession percutaneous transhepatic cholangioscopic lithotripsy(PTCSL).AIM To study one-step PTCSL using the percutaneous transhepatic one-step biliary fistulation(PTOBF)technique guided by three-dimensional(3D)visualization.METHODS This was a retrospective,single-center study analyzing,140 patients who,between October 2016 and October 2023,underwent one-step PTCSL for hepatolithiasis.The patients were divided into two groups:The 3D-PTOBF group and the PTOBF group.Stone clearance on choledochoscopy,complications,and long-term clearance and recurrence rates were assessed.RESULTS Age,total bilirubin,direct bilirubin,Child-Pugh class,and stone location were similar between the 2 groups,but there was a significant difference in bile duct strictures,with biliary strictures more common in the 3D-PTOBF group(P=0.001).The median follow-up time was 55.0(55.0,512.0)days.The immediate stone clearance ratio(88.6%vs 27.1%,P=0.000)and stricture resolution ratio(97.1%vs 78.6%,P=0.001)in the 3D-PTOBF group were significantly greater than those in the PTOBF group.Postoperative complication(8.6%vs 41.4%,P=0.000)and stone recurrence rates(7.1%vs 38.6%,P=0.000)were significantly lower in the 3D-PTOBF group.CONCLUSION Three-dimensional visualization helps make one-step PTCSL a safe,effective,and promising treatment for patients with complicated primary hepatolithiasis.The perioperative and long-term outcomes are satisfactory for patients with complicated primary hepatolithiasis.This minimally invasive method has the potential to be used as a substitute for hepatobiliary surgery. 展开更多
关键词 HEPATOLITHIASIS one-step percutaneous transhepatic cholangioscopic lithotripsy Biliary disease Three-dimensional visualization Clinical efficacy
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Study of the reaction mechanism for preparing powdered activated coke with SO_(2)adsorption capability via one-step rapid activation method under flue gas atmosphere
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作者 Binxuan Zhou Jingcai Chang +5 位作者 Jun Li Jinglan Hong Tao Wang Liqiang Zhang Ping Zhou Chunyuan Ma 《Chinese Journal of Chemical Engineering》 SCIE EI CAS CSCD 2024年第1期158-168,共11页
In this study,the impact of different reaction times on the preparation of powdered activated carbon(PAC)using a one-step rapid activation method under flue gas atmosphere is investigated,and the underlying reaction m... In this study,the impact of different reaction times on the preparation of powdered activated carbon(PAC)using a one-step rapid activation method under flue gas atmosphere is investigated,and the underlying reaction mechanism is summarized.Results indicate that the reaction process of this method can be divided into three stages:stage I is the rapid release of volatiles and the rapid consumption of O_(2),primarily occurring within a reaction time range of 0-0.5 s;stage II is mainly the continuous release and diffusion of volatiles,which is the carbonization and activation coupling reaction stage,and the carbonization process is the main in this stage.This stage mainly occurs at the reaction time range of 0.5 -2.0 s when SL-coal is used as material,and that is 0.5-3.0 s when JJ-coal is used as material;stage III is mainly the activation stage,during which activated components diffuse to both the surface and interior of particles.This stage mainly involves the reaction stage of CO_(2)and H2O(g)activation,and it mainly occurs at the reaction time range of 2.0-4.0 s when SL-coal is used as material,and that is 3.0-4.0 s when JJ-coal is used as material.Besides,the main function of the first two stages is to provide more diffusion channels and contact surfaces/activation sites for the diffusion and activation of the activated components in the third stage.Mastering the reaction mechanism would serve as a crucial reference and foundation for designing the structure,size of the reactor,and optimal positioning of the activator nozzle in PAC preparation. 展开更多
关键词 Reaction mechanism Powdered activated coke preparation SO_(2)adsorption one-step rapid activation Flue gas atmosphere
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毒害艾美耳球虫疫苗ENYS株TaqMan qPCR检测方法的建立
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作者 靳浩展 肖文婉 +13 位作者 廖申权 戚南山 李娟 吕敏娜 蔡海明 胡俊菁 林栩慧 宋勇乐 陈祥杰 朱易斌 尹理君 张健騑 张旭 孙铭飞 《广东畜牧兽医科技》 2024年第4期1-8,共8页
为了对E.necatrix ENYS株在生产中进行质控及对临床应用效果的监测,该研究对ENYS株和ENGD株进行全基因组重测序,结合生物信息学分析建立了一种TaqMan qPCR检测技术。结果显示,En-marker5测序结果与预期相符,最优的引物浓度和探针浓度分... 为了对E.necatrix ENYS株在生产中进行质控及对临床应用效果的监测,该研究对ENYS株和ENGD株进行全基因组重测序,结合生物信息学分析建立了一种TaqMan qPCR检测技术。结果显示,En-marker5测序结果与预期相符,最优的引物浓度和探针浓度分别为500nM和250 nM,标准曲线的斜率为-3.249,相关系数为0.999,可以通过Ct值对模板浓度定量,该方法检测下线为290个拷贝/反应和50个卵囊/反应,灵敏度是传统PCR的10倍;该方法可以特异性检测EnYS株,不能扩增其他种的疫苗株和野毒株以及肠道病原菌;重复性检测的变异系数小于0.6%,重复性良好。本研究针对E.necatrix EnYS株开发了一种灵敏度高、特异性强、稳定性好的TaqMan qPCR检测方法,为E.necatrix EnYS株的安全性评估及临床应用提供技术支持。 展开更多
关键词 毒害艾美耳球虫 减毒活疫苗 全基因组重测序 分子标记 TaqMan qpcr
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MeRIP-qPCR技术检测RNA m^(6)A甲基化修饰对t(8;21)AML细胞中KDM4B基因表达的调控作用
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作者 李雨晴 邵杨柳 +2 位作者 李梦月 王莉莉 高晓宁 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期382-388,共7页
目的:通过MeRIP联合逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)技术,证明WTAP介导的RNA m^(6)A修饰对伴t(8;21)急性髓系白血病(AML)细胞中KDM4B基因的直接调控作用。方法:采用靶向WTAP或KDM4B基因的短发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体沉默t... 目的:通过MeRIP联合逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)技术,证明WTAP介导的RNA m^(6)A修饰对伴t(8;21)急性髓系白血病(AML)细胞中KDM4B基因的直接调控作用。方法:采用靶向WTAP或KDM4B基因的短发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体沉默t(8;21)AML细胞系Kasumi-1和SKNO-1中WTAP或KDM4B基因表达,以转染随机打乱序列(scramble)的shRNA的细胞为对照。用超纯RNA提取试剂盒(DNaseⅠ)提取细胞RNA,Magna MeRIP^(TM)m^(6)A Kit试剂盒富集甲基化修饰片段,并通过RT-qPCR检测m^(6)A甲基化修饰的RNA区域;采用蛋白免疫印迹实验(Western blot)和逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)技术检测细胞中WTAP、KDM4B蛋白和mRNA的表达水平。采用克隆形成实验检测细胞体外克隆形成能力。结果:沉默Kasumi-1细胞中WTAP的表达后,m^(6)A甲基化修饰在KDM4B mRNA 3’UTR的富集程度显著下降(P<0.01),沉默Kasumi-1和SKNO-1细胞中WTAP的表达可显著抑制KDM4B蛋白(P<0.001)和mRNA表达水平(Kasumi-1:P<0.001;SKNO-1:P<0.01)、细胞体外克隆形成能力下降(Kasumi-1:P<0.001;SKNO-1:P<0.01)。结论:t(8;21)AML细胞系中,WTAP通过调控KDM4B基因mRNA 3’UTR的m^(6)A修饰调控KDM4B的表达,沉默KDM4B表达可以抑制t(8;21)AML细胞增殖。 展开更多
关键词 MeRIP-qpcr 急性髓系白血病 t(8 21)染色体易位 KDM4B RNA m^(6)A甲基化修饰
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伪狂犬病病毒RT-qPCR检测方法的建立与应用
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作者 李家奇 周汛 +1 位作者 汪涛 吴文明 《五邑大学学报(自然科学版)》 CAS 2024年第4期1-8,共8页
为建立伪狂犬病病毒(PRV)高灵敏度、超快速双重实时荧光定量PCR检测方法,根据PRV经典毒株gD和gE基因的相对保守序列设计了多组引物探针,经试验筛选出2组最优特异性引物探针,通过正交试验对反应体系中引物和探针的浓度进行优化,通过特异... 为建立伪狂犬病病毒(PRV)高灵敏度、超快速双重实时荧光定量PCR检测方法,根据PRV经典毒株gD和gE基因的相对保守序列设计了多组引物探针,经试验筛选出2组最优特异性引物探针,通过正交试验对反应体系中引物和探针的浓度进行优化,通过特异性、灵敏度和重复性试验评测所建立检测方法的性能.结果表明,建立的检测方法具有多重优点:高灵敏度,gD和gE基因最低检测灵敏度分别为1.06 copies/μL和1.68 copies/μL;超快速,检测时间可缩短至1 h内;特异性好,阴性对照组中常见猪患病毒均无交叉反应,PRV野毒株出现了双gD和gE基因扩增曲线,缺失gE基因的疫苗株仅出现gD基因扩增曲线;重复性强,3次重复性批内与批间试验的变异系数均低于3%.综上所述,本研究建立的双重RT-qPCR检测方法可用于PRV野毒株和疫苗株感染的快速诊断鉴别,为猪伪狂犬病(PR)的诊断及流行病学监测提供了一种快速准确的检测方法. 展开更多
关键词 双重RT-qpcr 猪伪狂犬病 伪狂犬病病毒 疫苗株 野毒株
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副溶血弧菌QsvR ChIP-qPCR方法的建立 被引量:2
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作者 张苗苗 李雪 +2 位作者 陆仁飞 张义全 周敏 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2023年第6期516-520,527,共6页
目的:建立副溶血弧菌QsvR的染色质免疫共沉淀实时定量PCR(ChIP-qPCR)实验方法。方法:通过热激转化和转化结合将标记2×Flag标签的qsvR片段转入qsvR突变株(ΔqsvR)中,阿拉伯糖诱导表达QsvR-2×Flag蛋白,通过甲醛与基因组DNA进行... 目的:建立副溶血弧菌QsvR的染色质免疫共沉淀实时定量PCR(ChIP-qPCR)实验方法。方法:通过热激转化和转化结合将标记2×Flag标签的qsvR片段转入qsvR突变株(ΔqsvR)中,阿拉伯糖诱导表达QsvR-2×Flag蛋白,通过甲醛与基因组DNA进行交联形成2×Flag-QsvR-DNA复合物,将基因组DNA超声裂解为100~1000 bp大小不等的片段,通过特异性抗原抗体反应将蛋白质-DNA复合物沉淀下来,高盐和加热解交联,回收DNA进行qPCR定量DNA,分析副溶血弧菌体内QsvR与靶基因的结合情况。结果:成功构建出实验菌株ΔqsvR/pBAD33-qsvR-2×Flag,以不加阿拉伯糖诱导为对照,经阿拉伯糖诱导菌株的aphA、opaR、exsB和vtrA的免疫共沉淀量明显较高,表明在副溶血弧菌体内QsvR与aphA、opaR、exsB和vtrA具有结合作用。结论:成功建立了副溶血弧菌QsvR的ChIP-qPCR实验方法,可用于原核生物体内蛋白质-DNA相互作用的研究。 展开更多
关键词 ChIP-qpcr 蛋白质-DNA复合物 副溶血弧菌 QsvR
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直接多重TaqMan qPCR方法快速鉴定褐飞虱属3种飞虱
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作者 罗举 杨素文 +3 位作者 贝文勇 余军伟 唐健 刘淑华 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期329-336,共8页
【目的】褐飞虱(Nilaparvata lugens)是水稻重大害虫,灯光诱捕一直是褐飞虱监测的重要方法。然而,褐飞虱的两个同属近似种伪褐飞虱(N.muiri)和拟褐飞虱(N.bakeri)也具有扑灯行为,常被误判为褐飞虱。针对测报灯下褐飞虱属近似种形态鉴定... 【目的】褐飞虱(Nilaparvata lugens)是水稻重大害虫,灯光诱捕一直是褐飞虱监测的重要方法。然而,褐飞虱的两个同属近似种伪褐飞虱(N.muiri)和拟褐飞虱(N.bakeri)也具有扑灯行为,常被误判为褐飞虱。针对测报灯下褐飞虱属近似种形态鉴定费时费力、专业技能要求高,伪褐飞虱和拟褐飞虱常被误判为褐飞虱这一问题,拟建立一种褐飞虱属3种飞虱的快速分类鉴定方法。【方法】以条形码基因ITS1为靶标,筛选褐飞虱属通用引物及物种特异性探针,建立并优化直接多重Taqman qPCR检测体系(Direct Multiplex TaqMan quantitative PCR,dmTqPCR),并分析其特异性、灵敏度及实用性。【结果】本研究建立的3种飞虱dmTqPCR检测方法特异性强,可准确区分褐飞虱、伪褐飞虱和拟褐飞虱;灵敏度高,检出限可达10拷贝/反应;大样本检测结果表明,382个样本从样本获取到结果输出的整个过程可在3 h内完成,检出率及准确率均为100%。【结论】本研究建立的褐飞虱属近似种的dmTqPCR鉴定方法可以用于褐飞虱、伪褐飞虱和拟褐飞虱的快速分类鉴定,有利于灯下褐飞虱的精准测报。 展开更多
关键词 褐飞虱 伪褐飞虱 拟褐飞虱 ITS1 直接多重Taqman qpcr
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