Onjisaponin B derived from Radix Polygalae enhances autophagy and accelerates the degradation of mutant α-Synuclein and Huntingtin in PC-12 cells

OBJECTIVE To investigate the autophagic effect of the compounds from the Chinese medicinal herbs,Radix polygalae as a potential neuroprotective agent that enhances the clearance of mutant Huntingtin andα-synuclein in PC-12 cells.METHODS Radix polygalae was extracted with 75%ethanol using refluxing method,and its quality was assayed by UHPLC-TOF-MS.The autophagic effect of Radix polygalae extract,and its major components including polygalacic acid,senegenin and onjisaponin B were investigated using the green fluorescent protein-light chain 3(GFP-LC3)autophagy detection and Western blot platforms for detecting the autophagic markers,GFP-LC3 puncta formation and LC3Ⅱ expression.The degradation of A53Tα-synuclein and the inhibition of α-synuclein oligo merization related to the Parkinson disease were assayed using Western blot and flow cytometer analysis,respectively.While the cytotoxicity and the degradation of the mutant Huntingtin associated with the Huntingtin disease were investigated using MTT method and flow cytometer analysis.RESULTS Radix polygalae ethanol extract and onjisaponin B improved the GFP-LC3 puncta formation and expression of LC3Ⅱ with time and dose manner,and this induction was activated via AMPK-m TOR and Atg 7 gene pathway.Furthermore,the clearance ofα-synuclein and mutant Huntingtin was enhanced via autophagy induction with the treatment of Radix polygalae ethanol extract and onjisaponin B.CONCLUSION Findings in the current study provide detailed insights into the protective mechanism of a novel autophagy inducer,onjisaponin B,which is valuable for further investigation as a new candidate agent for modulating neurodegenerative disorders through the reduction of toxicity and clearance of mutant proteins in the cellular level.

甘草汁蒸制远志对远志皂苷B和细叶远志皂苷含有量的影响

目的观察甘草汁蒸制远志过程中对远志皂苷B和细叶远志皂苷含有量的动态变化。方法采用HPLC同时测定远志生品及甘草汁蒸制不同时间(4、8、12、16、20、24 h)炮制品中远志皂苷B和细叶远志皂苷的量。色谱柱为Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液,梯度洗脱;体积流量1.0 m L/min;检测波长210 nm。结果随着蒸制时间的延长,细叶远志皂苷含有量逐渐升高,而远志皂苷B含有量变化不大。结论远志中远志皂苷B含有量较高,达到2.23%;甘草汁蒸制仅对远志中细叶远志皂苷含有量影响显著,但对远志皂苷B含有量无明显影响。

HPLC-TOF/MS法研究远志炮制过程中寡糖酯和皂苷类成分的转化机制

目的:采用HPLC-TOF/MS技术研究远志炮制过程中5种寡糖酯(远志蔗糖酯A、C,远志寡精A、H、J)和远志皂苷B的转化机制。方法:色谱条件:流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸溶液,梯度洗脱;流速0.25 mL/min,柱温30℃,检测波长230、254、280、302 nm;质谱使用Agilent 6230型TOF-HPLC/MS联用系统,在ESI/MS正离子模式下采集数据。结果:远志蔗糖酯A模拟炮制品中检测到了球腺糖A、对羟基苯甲酸和3,4,5-三甲氧基肉桂酸,远志蔗糖酯C模拟炮制品中检测到了球腺糖A、3,4,5-三甲氧基肉桂酸、黄花远志素C和芥子酸;远志寡精A、H、J模拟炮制品中均检测到对香豆酸;远志皂苷B检测到其异构体。结论:在加水、加热的条件下,远志中寡糖酯类成分其分子结构中的酯键发生水解,生成其次级苷和(或)苷元;远志皂苷B发生结构重排转化为其异构体。

HPLC波长切换法同时测定琥珀多寐丸中6个成分的含量

目的建立同时测定琥珀多寐丸中远志(口山)酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B、去氢土莫酸和茯苓酸含量的方法。方法采用波长切换检测的高效液相色谱法,色谱柱采用依利特C_(18)色谱柱,流动相为乙腈(A)-体积分数为0.1%的磷酸溶液(B)系统,进行梯度洗脱;0~36 min检测波长为320 nm(检测远志(口山)酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖),36~75 min检测波长为210 nm(检测细叶远志皂苷、远志皂苷B、去氢土莫酸、茯苓酸);流速为1.3 mL·min^(-1);柱温为30℃。结果在优化的色谱条件下,远志(口山)酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B、去氢土莫酸和茯苓酸分别在6.46~129.20 mg·L^(-1)(r=0.999 2)、6.13~122.60 mg·L^(-1)(r=0.999 5)、13.17~263.40 mg·L^(-1)(r=0.999 9)、14.15~283.00 mg·L^(-1)(r=0.999 6)、5.35~107.00 mg·L^(-1)(r=0.999 7)、4.50~90.00 mg·L^(-1)(r=0.999 3)内浓度与峰面积呈良好的线性关系;6种成分的平均加样回收率(n=6)分别为97.69%、96.87%、100.04%、97.74%、97.67%、99.16%,RSD分别为1.35%、0.96%、0.59%、0.93%、1.02%、1.10%。结论该检测方法可用于琥珀多寐丸中远志(口山)酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B、去氢土莫酸和茯苓酸的含量分析。

高效液相色谱法测定生远志及其炮制品中远志皂苷B的含量

目的：建立远志药材中远志皂苷B的测定方法。方法：采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent TC-C18色谱柱（4.6mm×250 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液（38∶62）,检测波长307 nm,柱温：30℃,流速：1.0ml·min-1。结果：回归方程为：Y=10.865 X＋220.16（r=0.999 8）,线性范围为1.778-17.78μg,平均回收率（n=6）为99.24%（RSD=2.4%）。5个产地药材中远志皂苷B含量为1.62%-2.26%;蜜制远志中远志皂苷B的含量明显下降,甘草汁炒远志、酒炙远志、炒远志含量则变化不大。结论：该方法操作简便、准确度高、重复性好,能够对远志及其炮制品中远志皂苷B进行含量测定,为提高远志药材的质量控制标准提供了另一个有效的方法。

HPLC法测定参茸安神片中远志酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B和五味子醇甲

目的建立HPLC法同时测定参茸安神片中远志酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B和五味子醇甲的方法。方法采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈–0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长:320 nm(0~16 min检测远志酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖)、210 nm(16~24 min检测细叶远志皂苷、远志皂苷B)、250 nm(24~35 min检测五味子醇甲);体积流量:1.0 m L/min;柱温:30℃;进样量为10μL。结果远志酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B和五味子醇甲分别在3.85~77.00、6.22~124.40、6.57~131.40、7.61~152.20、4.96~99.20μg/m L线性关系良好(r≥0.999 2);平均回收率分别为98.17%、99.24%、99.90%、97.63%、96.83%,RSD值分别为1.14%、1.23%、0.70%、1.52%、0.81%。结论本法稳定可靠、简便易行,为全面控制参茸安神片的质量提供了参考。

远志皂苷B对电离辐射损伤的保护作用及机制研究

目的:探究远志皂苷B对电离辐射损伤小鼠的保护作用及机制。方法:将120只SPF级雄性BALB/c小鼠随机分为空白组、模型组、远志皂苷B低剂量组(10 mg·kg^(-1))和远志皂苷B高剂量组(20 mg·kg^(-1)),每组30只。除空白组外,其他组小鼠进行全身一次性5.5 Gyγ射线照射3 h建立电离辐射损伤模型。造模完成的第2天开始给药,空白组和模型组灌胃给予等体积生理盐水,每天1次,持续4周。饲养期间,记录造模后及给药期间体质量的变化及动物死亡数和死亡时间。使用血球仪计数外周血淋巴细胞数,并计算百分率。取胸腺组织,计算胸腺系数。Western Bolt检测胸腺组织内核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)抑制因子α(inhibitor of NF-κBα,IκBα)、p-IκBα、p53、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达水平。RT-PCR检测胸腺组织中IκBαmRNA、p53 mRNA、caspase-3 mRNA的表达水平。结果:与空白组比较,模型组体质量、平均存活时间、生存率及外周血淋巴细胞数、淋巴细胞百分率、胸腺系数显著降低,IκBα蛋白及mRNA表达水平显著降低,p-IκBα、p53、caspase-3蛋白及p53 mRNA、caspase-3 mRNA表达水平显著升高。与模型组比较,给药8天后远志皂苷B各剂量组小鼠体质量及外周血淋巴细胞数、淋巴细胞百分率和胸腺系数显著升高,IκBα蛋白及mRNA表达水平显著上升,而p-IκBα、p53、caspase-3蛋白及p53 mRNA、caspase-3 mRNA表达水平显著下降;远志皂苷B低剂量组平均存活时间显著增加,远志皂苷B高剂量组的平均存活时间和生存率显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:远志皂苷B可改善电离辐射损伤,调节免疫功能,其作用可能与抑制NF-κB的激活及p53、caspase-3的表达有关。

开心散乙醇提取物中远志皂苷的入血成分及体内代谢产物分析

目的:鉴定开心散60%乙醇提取物(KXS-60%E)及其血中移行成分中的远志皂苷类成分,分析大鼠体内远志皂苷类成分的代谢产物。方法:应用UPLC-TOF-MS技术,分析TOF-MS/MS给出的二级离子信息,结合液质联用工作站Mass Lynx v4.1分析软件及现有的文献数据库,鉴定KXS-60%E中远志皂苷类成分、灌服KXS-60%E后血清中的远志皂苷类成分及其代谢产物。结果:鉴定了KXS-60%E中14个远志皂苷类成分,主要为三萜型皂苷;鉴定了大鼠口服KXS-60%E后血中的5个原型皂苷类成分及4个代谢产物。结论:远志皂苷类成分及4个代谢产物可能是KXS-60%E潜在的活性成分及直接药效物质基础,这将有助于阐明开心散防治阿尔兹海默症的有效成分及作用机制。