Ononin inhibits triple-negative breast cancer lung metastasis by targeting the EGFR-mediated PI3K/Akt/mTOR pathway

The spreading of cancer cells from the primary tumor site to other parts of the body,known as metastasis,is the leading cause of cancer recurrence and mortality in patients with triple-negative breast cancer(TNBC).Overexpression of epidermal growth factor receptor(EGFR)is observed in approximately 70%of TNBC patients.EGFR is crucial for promoting tumor metastasis and associated with poor prognosis.Therefore,it is vital to identify effective therapeutic strategies targeting EGFR inhibition.Ononin,an isoflavonoid found in various plants,such as clover and soybeans,has been shown to have anticancer properties in several cancers.In the present study,we aimed to investigate the effects of ononin on TNBC lung metastasis and the associated molecular pathways.We used various assays,including cell viability,colony formation,Transwell,wound healing,ELISA,Western blotting,and staining techniques,to achieve this objective.The results demonstrated that ononin effectively suppressed cellular proliferation and induced apoptosis,as evidenced by the cell viability assay,colony formation assay,and expression of apoptosis markers,and reduced the metastatic capabilities of TNBC cells.These effects were achieved through the direct suppression of cell adhesion,invasiveness and motility.Furthermore,in TNBC xenograft lung metastatic models,ononin treatment significantly reduced tumor growth and lung metastasis.Additionally,ononin reversed the epithelial-mesenchymal transition(EMT)by downregulating the expression of EMT markers and matrix metalloproteinases,as confirmed by Western blot analysis.Furthermore,ononin treatment reduced EGFR phosphorylation and suppressed the PI3K,Akt,and m TOR signaling pathways,which was further confirmed using EGFR agonists or inhibitors.Importantly,ononin treatment did not exert any toxic effects on liver or kidney function.In conclusion,our findings suggest that ononin is a safe and potentially therapeutic treatment for TNBC metastasis that targets the EGFRmediated PI3K/Akt/m TOR pathway.Further studies are warranted to validate its efficacy and explore its potential clinical applications.

HPLC-UV法测定经典名方当归补血汤中5种化学成分含量

本研究旨在建立高效液相色谱-紫外检测法,同时测定当归补血汤中阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮及芒柄花苷的含量。采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇(B):0.4%甲酸水(A)梯度洗脱,检测波长280 nm。阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮和芒柄花苷分别在0.091~1.824、0.015~0.308、0.092~1.848、0.036~0.728、0.082~1.656μg/mL质量范围内线性关系良好,r> 0.999;定量限分别为0.091、0.015、0.092、0.036、0.082μg/mL;检测限分别为0.027、0.005、0.028、0.011、0.025μg/mL。该方法精密度、重复性、稳定性、加样回收试验的RSD均小于5%;回收率分别为99.68%、99.40%、100.24%、101.04%和100.88%。所建立的测定方法操作简单,分析灵敏快速,结果准确,可用于当归补血汤的含量测定及质量控制。

超高效液相色谱法同时测定红芪和黄芪药材中有效成分含量

目的建立同时测定红芪和黄芪药材中有效成分含量的超高效液相色谱法。方法色谱柱为Waters BEH C18柱(200 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液(梯度洗脱),流速为0.2 mL/min,检测波长为250 nm,柱温为35℃,进样量为1μL。结果香草酸、阿魏酸、毛蕊异黄酮苷、异阿魏酸、芒柄花苷、毛蕊异黄酮质量浓度分别在6.05~121.00μg/mL、4.37~87.32μg/mL、0.30~6.02μg/mL、1.09~21.81μg/mL、6.10~122.12μg/mL、1.00~20.05μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(R^(2)≥0.9996);精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于5.0%;平均加样回收率分别为98.26%,96.72%,98.78%,97.56%,99.18%,99.19%,RSD均小于4.0%(n=6)。武都红芪药材样品和蒙古黄芪药材样品的共有成分毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮含量差异较大,分别为2.73,46.61,8.45μg/g和42.36,13.03,37.45μg/g。结论所建立的方法可靠,操作简单,可为后期红芪及黄芪药材的质量控制提供参考。

芒柄花苷对小鼠脓毒症引起认知功能障碍的影响

目的:探讨芒柄花苷对小鼠脓毒症引起认知功能障碍的影响。方法:选取60只8周龄雄性C57BL/6小鼠,采用随机数字表法分为假手术组(C组)、脓毒症组(CLP组)、芒柄花苷(ON组)和芒柄花苷+脓毒症组(ON+CLP组),每组各15只。采用盲肠结扎穿孔(CLP)制备脓毒症模型。ON组与ON+CLP组在造模前进行芒柄花苷(30 mg/kg)灌胃,1次/d,连续7 d;C组与CLP组每日给予等剂量生理盐水。造模后比较各组小鼠7 d生存率;Morris水迷宫实验检测各组小鼠认知功能,比较各组小鼠海马组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平。结果:与C组比较,CLP组小鼠生存率降低(P<0.05);与CLP组比较,ON+CLP组小鼠生存率增加(P<0.05)。与C组比较,CLP组小鼠逃避潜伏期延长,穿越平台次数减少,待在平台所在象限时间缩短(均P<0.05);与CLP组比较,ON+CLP组小鼠逃避潜伏期缩短,穿越平台次数增多,待在平台所在象限时间延长(均P<0.05)。与C组比较,CLP组小鼠TNF-α、IL-1β、IL-6及MDA含量升高,SOD活性降低(均P<0.05);与CLP组比较,ON+CLP组TNF-α、IL-1β、IL-6和MDA含量降低,SOD活性增加(均P<0.05)。结论:芒柄花苷可以改善小鼠脓毒症引起的认知功能障碍,机制可能与芒柄花苷抑制海马组织的炎症反应和氧化应激反应有关。

红芪化学成分及其抗氧化活性研究

目的对红芪化学成分及其抗氧化活性进行研究。方法采用色谱技术对红芪化学成分进行分离,利用理化性质和现代波谱技术确定化合物的结构,并应用过氧化氢损伤的SH-SY5Y细胞与野生型DJ-1基因转染的SH-SY5Y细胞模型对得到的代表性化合物进行抗氧化应激活性研究。结果从红芪中分离鉴定了6个化合物,其结构分别为大豆皂苷II甲酯(1),大豆皂苷I(2),芒柄花苷(3),柚皮苷(4),下箴桐碱(5)和色氨酸(6)。抗氧化活性实验结果表明化合物3具有较好的抗氧化作用。结论化合物4和6为首次从该属植物中分离得到,化合物3具有抗氧化应激作用。

基于一测多评法测定甘肃红芪中4种黄酮类成分

目的建立甘肃红芪中芒柄花苷、毛蕊异黄酮、金雀异黄酮、芒柄花素4种黄酮类成分的一测多评法,验证该方法在红芪质量评价中应用的准确性及可行性。方法以毛蕊异黄酮为内标,分别建立毛蕊异黄酮与芒柄花苷、金雀异黄酮、芒柄花素的相对校正因子,计算红芪中毛蕊异黄酮、金雀异黄酮、芒柄花素的含量,实现一测多评。结果各相对校正因子重复性良好,一测多评法测定结果与外标法无显著差异。结论以毛蕊异黄酮为内标,同时测定芒柄花苷、金雀异黄酮、芒柄花素的一测多评法可用于红芪的定量分析。

LC-MS-MS法同时测定黄芪注射液和黄芪口服液中5种成分

目的建立LC-MS-MS法同时测定黄芪注射液和黄芪口服液中黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花黄素5种有效成分的含有量。方法黄芪注射液和黄芪口服液甲醇稀释液在Agilent ZORBAX SB C18（2.1 mm×150 mm,5μm）色谱柱上分离,流动相为甲醇-水（含0.1%甲酸,70∶30,V/V）;体积流量为300μL/min。MS采用电喷雾离子源,多反应监测方式进行正离子扫描。结果 5种成分在测定浓度范围内均具有良好的线性关系,在黄芪注射液和黄芪口服液中的平均回收率分别为96.8%-102.3%和95.9%-101.5%。结论本法测得结果准确、可靠、灵敏度高,可用于黄芪注射液和黄芪口服液的质量控制。

安徽产葛根的化学成分研究

目的研究安徽产葛根的化学成分。方法采用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、制备薄层色谱、制备HPLC等手段,从葛根的乙醇提取物中分离得到7个化合物,利用理化性质和波谱学分析,鉴定它们的化学结构。结果与结论分离鉴定了7个化合物:5-羟基芒柄花苷(1)、4-羟基-3-甲氧基肉桂酸(2)、葛根素(3)、大豆苷元(4)、大豆苷(5)、3′-羟基葛根素(6)、3′-甲氧基葛根素(7)。化合物2为首次从该属植物中分得的已知化合物,化合物1为首次从该种植物中分离得到的已知化合物。

不同品种、产地和种植方式黄芪药材中黄酮类成分的质量分析

目的：建立同时测定黄芪药材中黄酮类成分含量的方法，探讨黄芪药材中黄酮类成分与品种、产地和种植方式的关系。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Venusil ASB，流动相为乙腈-0.3％甲酸（梯度洗脱），流速为1.0 ml/min，检测波长为260 nm，柱温为25℃。比较多省份28批野生和栽培的蒙古黄芪和膜荚黄芪的药材质量。结果：毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素检测质量浓度线性范围分别为0.0089～2.224 mg/ml（r＝0.9995）、0.0052～1.3 mg/ml（r＝0.9996）、0.0028～0.6976 mg/ml（r＝0.9999）、0.002～0.5 mg/ml（r＝0.9999）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜1％；加样回收率分别为99.52％～100.74％（RSD＝0.41％，n＝6）、98.84％～100.60％（RSD＝0.60％，n＝6）、98.47％～101.74％（RSD＝1.08％，n＝6）、100.10％～101.59％（RSD＝0.32％，n＝6）。从品种分析，蒙古黄芪药材中毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、总黄酮的含量要高于膜荚黄芪，但毛蕊异黄酮、芒柄花素的含量少于膜荚黄芪；从产地分析，内蒙古、山西产黄芪药材中毛蕊异黄酮苷、总黄酮的含量最高，东北、甘肃次之，山东、安徽、陕西较低；从种植方式分析，野生黄芪药材中毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、总黄酮的含量高于栽培品种，栽培黄芪药材中毛蕊异黄酮、芒柄花素含量高于野生品种。结论：该方法操作简便、稳定、重复性好，可用于黄芪药材中黄酮类成分含量的同时测定。不同产地黄芪药材中4种黄酮类成分含量差异大，药材的品种、产地和种植方式是影响黄芪质量的主要因素。

高速逆流色谱分离制备甘草中的甘草苷和芒柄花苷

应用高速逆流色谱分离制备甘草中的甘草苷和芒柄花苷。将甘草乙酸乙酯提取物经聚酰胺柱粗分后,30%乙醇洗脱物用高速逆流色谱进一步分离,所用两相溶剂系统为乙酸乙酯-水(5∶5,v/v),转速850 rpm,流速2.0 mL/min,检测波长254 nm,从50 mg30%乙醇洗脱物中得到甘草苷8.7 mg、芒柄花苷4.2 mg,纯度分别为99.5%和97.3%。所得产物的结构经核磁共振谱(NMR)鉴定。利用该方法可以对甘草中的甘草苷和芒柄花苷进行快速的分离和纯化。

六种甘草属植物根中黄酮类成分的高效液相色谱分析

应用反相高效液相色谱技术,对从甘草中提取的10个黄酮类化合物进行了分离,并且分析了6种甘草属植物根的9个样品的黄酮类化合物的组成,结果表明,不同种的甘草中所含黄酮类化合物的成分、含量均不同。

高速逆流色谱法分离制备甘草中的芒柄花苷

应用高速逆流色谱分离制备甘草中的芒柄花苷。将甘草乙酸乙酯提取物先经聚酰胺柱色谱分离,所得组分Fr1再用高速逆流色谱进一步分离,采用的两相溶剂系统为乙酸乙酯-水(5:5,v/v),以其上相作固定相,下相为流动相,主机旋转方向顺时针,转速850 r/min,流速2.0 mL/min,检测波长254 nm,从80 mg组分Fr1中得到12.3 mg纯度为99.3%的芒柄花苷。所得产物的结构经NMR鉴定。利用该方法可以对甘草中的芒柄花苷进行快速的分离和纯化。

黄芪化学成分的研究

目的:对蒙古黄芪的化学成分进行研究。方法:采用 D101大孔树脂精制法、溶剂法、色谱法提取分离,用波谱法鉴定其化学结构。结果:从蒙古黄芪的乙醇提取物中分得3个化合物,并鉴定为芒柄花苷,9,10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D 葡萄糖苷,黄芪甲苷。结论:该方法简便易行,是一种较好的分离纯化方法。

HPLC内标法同时测定芪麝丸中9种成分

目的建立芪麝丸(黄芪、川芎、青风藤、粉防己等)中9种成分,毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素、芒柄花素苷、洋川芎内酯I、洋川芎内酯A、粉防己碱、防己诺林碱、青藤碱的定量分析方法。方法采用HPLC内标法,选用异补骨脂素为内标物,样品经过甲醇提取,采用Kromasil C18柱,甲醇-0.2%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,紫外检测波长262 nm。结果毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素、芒柄花素苷、洋川芎内酯I、洋川芎内酯A、粉防己碱、防己诺林碱、青藤碱分别在13.8～440μg/mL、25.9～830μg/mL、9.7～310μg/mL、6.6～212μg/mL、6.3～200μg/mL、6.3～200μg/mL、14.1～450μg/mL、11.3～360μg/mL、50.9～1 630μg/mL范围内呈良好线性关系,内标法与标准曲线法测定结果一致。结论该方法准确可靠,可用于芪麝丸的质量控制。

HPLC-UV法测定黄芪中黄酮类化合物含量

采用HPLC-UV法同时测定黄芪中毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷以及芒柄花素含量。样品经浸泡-超声处理,流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液,低压梯度洗脱;流速1.0 mL/min;进样量25μL;柱温30℃;检测波长254 nm。结果显示,毛蕊异黄酮苷在线性范围18.70~187.20μg/mL色谱峰峰面积与浓度线性关系良好,相关系数为0.999 7;毛蕊异黄酮在线性范围1.68~16.80μg/mL色谱峰峰面积与浓度线性关系良好,相关系数为0.999 4;芒柄花苷在线性范围7.50~75.00μg/mL色谱峰峰面积与浓度线性关系良好,相关系数为0.999 5;芒柄花素在线性范围4.90~49.20μg/mL色谱峰峰面积与浓度线性关系良好,相关系数为0.999 8。精密度、稳定性、适应性、重复性试验以及加样回收率均符合要求。该方法简便快捷,精密度高,重现性好,稳定性高,可用于黄芪药材中多成分含量的同时测定。

HPLC法同时测定参芪博力康片中7种成分的含量

目的建立HPLC法同时测定参芪博力康片中7种成分的的含量。方法采用Syncronis C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);柱温:30℃;流动相:乙腈-2 mL·L^(-1)冰醋酸,梯度洗脱;流速:1.0 mL·min^(-1);检测波长分别为258(检测新芒果苷、芒果苷、异芒果苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷和芒柄花素)和320 nm(检测2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷)。结果 7种成分分别在11.38~284.50,6.57~164.25,0.79~19.75,3.91~97.75,3.07~76.75,7.69~192.25和9.86~246.50μg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r≥0.999 1);平均回收率分别为100.04%,99.25%,96.86%,98.73%,98.12%,97.73%和99.59%;RSD值分别为0.62%,0.75%,1.42%,0.96%,1.22%,0.92%和0.89%。结论该方法操作简便、重复性好,可用于参芪博力康片中多指标性成分的质量评价。

HPLC法测定不同产地黄芪中芒柄花苷的含量

目的:测定十批不同产地黄芪药材中芒柄花苷的含量,用以评价不同产地的黄芪的质量,为实际生产和临床应用黄芪药材的选择提供参考。方法:采用80%甲醇回流提取,反相高效液相色谱法进行测定。Diamonsil钻石C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈:水=25:75等度洗脱;流速:1ml﹒min-1;柱温:30℃;检测波长254nm。结果:内蒙古和山西产的黄芪中芒柄花苷的含量较甘肃与长春高。结论:不同产地的黄芪中芒柄花苷的含量差异较大,同一产地黄芪中的芒柄花苷的含量也存在差异。

HPLC同时测定绛糖宁胶囊中5种活性成分的含量及聚类分析

目的:建立HPLC法同时测定绛糖宁胶囊中太子参环肽B、葫芦素B、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷和毛蕊异黄酮的含量。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Diamasil C18(200 mm×4.6 mm,5μm),柱温30℃;乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速:0.9 mL/min;检测波长:203 nm(太子参环肽B)、227 nm(葫芦素B)和254 nm(毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷和毛蕊异黄酮);采用SPSS 26.0统计软件对绛糖宁胶囊中5种成分含量进行聚类分析。结果:太子参环肽B、葫芦素B、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷和毛蕊异黄酮分别在1.16~23.20μg/mL、0.64~12.80μg/mL、8.78~175.60μg/mL、5.27~105.40μg/mL、3.59~71.80μg/mL范围内线性关系良好(r≥0.9991);平均加样回收率分别为98.52%、96.97%、100.15%、98.74%和99.34%,RSD分别为1.61%、1.26%、0.73%、1.12%和0.58%;10批样品聚类分析为2类。结论:该方法操作简便、重复性好,可用于绛糖宁胶囊中太子参环肽B、葫芦素B、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷和毛蕊异黄酮的含量测定。

高效液相色谱法同时测定黄芪精颗粒中3种黄酮类成分及其指纹图谱研究

目的建立HPLC同时测定黄芪精颗粒中3种黄酮类成分的含量,并对其进行指纹图谱研究。方法采用Agilent高效液相色谱仪,5 HC C18(2)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),VWD检测器,流速1.0 mL·min-1,进样量10μL,柱温25℃,毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素的含量测定和指纹图谱分别采用不同梯度条件进行洗脱,3个成分含量测定的检测波长为260 nm,指纹图谱的检测波长为240 nm。结果毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素分别在0.0257～1.0280、0.039 95～1.5980、0.0110～0.4400μg内与峰面积线性关系良好,平均加样回收率分别为104.3%、97.8%、96.9%,RSD值均小于3%。11批黄芪精颗粒样品的指纹图谱相似度均大于0.9,标定10个共有成分峰,确认毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素4个成分。结论黄芪精颗粒中3个黄酮类成分的含量测定方法及HPLC指纹图谱方法简便、稳定、可靠,可为黄芪精颗粒的质量控制提供参考。

基于在体单向肠灌流模型的红车轴草异黄酮类成分渗透性研究

目的研究红车轴草水提物的异黄酮类肠吸收成分及其肠渗透性,探讨其相应机制。方法采用超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS),建立红车轴草水提物肠灌流液中异黄酮类成分大豆苷元、大豆苷、染料木苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素、芒柄花苷的定量分析方法。基于大鼠在体单向肠灌流模型,研究红车轴草水提物中6种异黄酮类成分在不同小肠段(十二指肠、空肠、回肠)的肠渗透性,并对不同浓度的芒柄花素、芒柄花苷单体成分肠渗透特征进行研究。结果建立了红车轴草水提物肠灌流液中6种异黄酮类成分的UPLC-MS/MS定量分析方法,符合方法学要求。红车轴草水提物灌流液各成分的有效渗透系数(Peff)均大于5×10-5 cm/s,最大者为芒柄花素(Peff=3.20,十二指肠),其次为染料木苷(Peff=2.19,空肠);对于不同肠段,各成分Peff和吸收速率常数(Ka)均存在一定差异,大豆苷元、芒柄花素的十二指肠Peff最大,其余4种成分的空肠Peff最大,表明红车轴草水提物中异黄酮的最佳吸收窗口为十二指肠和空肠;不同浓度芒柄花素、芒柄花苷单体灌流的Peff、Ka差异均无统计学意义(P>0.05),吸收曲线近似线性,其吸收机制符合被动扩散的特征。结论本研究初步明确了红车轴草水提物中异黄酮类成分的肠渗透性及吸收机制,可为质控成分筛选、制剂开发及临床合理用药提供参考。