滇紫草 Onosma paniculatum 愈伤组织中主要成分的抑菌作用

从诱导形成的滇紫草愈伤组织中分离得到四种单体.其中两种单体:β、β-二甲基丙烯酰阿卡宁(β,β-dimethyacrylalkannin,)和乙酰阿卡宁(Acetylalkannin,)的愈伤组织混合色素,对金黄色葡萄球菌和假单孢杆菌都有比较明显的抑制作用.尤其是乙酰阿卡宁抑制效果格外显著.然而对大肠杆菌却表现不出抑制效应.

药用紫草的研究进展

对药用紫草的研究状况 ,包括自然资源状况、有效成分的分离和提纯、紫草素及其衍生物的生物合成途径、药理研究现状以及植物细胞工程运用于紫草的研究进展进行综述 。

多糖对滇紫草培养细胞的影响

黑节草多糖、火棘果果胶和琼脂加入到培养基中,均能促进滇紫草细胞合成紫草素。黑节草多糖促进紫草素合成的最适浓度为0.05—0.1％,大于最适浓度紫草素合成逐渐受到抑制。三种黑节草多糖单体中以多糖Ⅱ最为有效,紫草素产量为90.07mg/l。加入火棘果果胶和琼脂均对紫草素合成呈现促进作用。最后对多糖的作用机理以及多糖与寡糖的关系进行了讨论。

滇紫草愈伤组织辐照和磁场效应研究初报

本文初步研究了Ｈｅ—Ｎｅ激光和磁场对滇紫草愈伤组织生长及色素形成的影响．结果表明：功率密度０．３７ｍｗ／ｃｍ２的Ｈｅ－Ｎｅ激光处理１ｈ刺激愈伤组织生长，而色素含量在２ｈ和３ｈ处理有较大提高，分别达１５．７％和２７．８％．１０ＫＧＳ场强的磁场处理１５ｍｉｎ对愈伤组织生长和色素形成均有促进，当代和第二代色素含量较高９．５％和２７．５％。色素含量提高的稳定正在进一步观察．

米曲霉激发子剌激滇紫草细胞活性氧的产生及与紫草色素形成的关系

米曲霉激发子剌激滇紫草细胞１０ｍｉｎ内快速释放活性氧，同时胞内具活性氧清除作用中的超氧化物歧化酶、过氧化物酶和过氧化氢酶的活性也相应增加。活性氧组分中的ＯＨ和Ｏ２自由基不利于紫草色素的合成，而外源的活性氧组分Ｈ２Ｏ２在低浓度（０．１ｍｍｏｌ／１）时可促进紫草色素的合成。

γ-射线对滇紫草细胞产生色素的影响

应用５００～２５００伦琴（Ｒ）的６０钴γ射线照射滇紫草（ＯｎｏｓｍａｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍＢｕｒ．ｅｔＦｒａｎｃｈ．）细胞系，确定了应用γ射线处理促进紫草素合成的最适辐照剂量为１５００Ｒ，处理后的细胞系在生产培养基上培养２１ｄ后紫草素含量（以干重计）达到９４．７９ｍｇ／ｇ，较对照提高了１４４６％，通过小团块选种法从中筛选到了色素含量（以干重计）高达１０３．４２ｍｇ／ｇ的高产细胞系Ｍｕｔ１，其营养生长与对照相比没有差别。

油菜素内酯促进滇紫草细胞产生紫草色素初探

研究了油菜素内酯（ＢＲ）对培养的滇紫草细胞产生紫草色素的影响．结果表明，在滇紫草细胞悬浮培养体系中加入最适浓度的ＢＲ（１０－５μｇ／ｍＬ）可以显著促进紫草色素的形成（增长７３．４％），并且在低浓度下ＢＲ可以轻微促进细胞生长，但ＢＲ并不能代替其它植物生长调节剂，如ＩＡＡ、ＮＡＡ和ＢＡＰ．

滇紫草愈伤组织培养与紫草素产生

浓度为10^(-5)Smol/1和10^(-6)mol/l的2,4-D和NAA分别与10^(-5)mol/l的KT组合,能明显抑制滇紫草(Onosma paniculatum Bur. et Fr.)愈伤组织中紫草素的产生,但几乎不受天然生长素IAA和KT组合的影响。葡萄糖较蔗糖能更有效地促进紫草素的产生,它们的最适浓度均为6％。LH和CH能抑制紫草素的产生,CH浓度大于0.02％时能抑制愈伤组织的生长,LH对生长无明显影响。椰乳浓度为10％时,能明显地促进紫草素的产生,紫草素的含量是对照的24倍。

真菌诱导物在滇紫草细胞培养中对紫草色素形成的影响

在滇紫草细胞悬浮培养中，真菌诱导物可抑制细胞生长，促进紫草色素的合成。将培养６ｄ的曲霉菌丝体的粗提物以６００μｇ碳水化合物／５０ｍｌ培养液的浓度加入到处于指数生长初期的滇紫草细胞悬浮培养物中，诱导物促进紫草色素合成的作用最大，紫草色素含量为对照的两倍。经高压锅处理２０ｍｉｎ到２ｈ不影响诱导物的活性。真菌诱导物还影响了紫草色素各衍生物的相对含量。

CTAB法提取中草药材滇紫草细胞的总RNA

介绍一种适合富含次生产物的中草药材滇紫草细胞总RNA的提取方法———CTAB法。采用CTAB作为去污剂,分别用氯仿和水饱和酚反复抽提以及LiCl沉淀以去除蛋白质、碳水化合物和次生代谢物等杂质,最后用纯乙醇沉淀获得RNA。该方法不但能获得完整性好和纯度高的总RNA,而且操作简单、快速、成本低廉,对其它富含次生物质的植物特别是中草药材组织总RNA的提取具有借鉴意义。

氯化铜对滇紫草细胞色素形成的影响

滇紫草细胞于Ｍ－９培养液中悬浮培养以形成紫草色素。当Ｍ－９培养液中ＣｕＳＯ４·５Ｈ２０由相同浓度的ＣｕＣｌ２·２Ｈ２Ｏ取代后，色素产量比对照提高了５８．７％，ＣｕＣｌ２·２Ｈ２Ｏ的最适浓度为３０μｍｏｌ／Ｌ。滇紫草细胞的继代培养基Ｂ—５中的ＣｕＳＯ４·５Ｈ２Ｏ取代后，培养所得的细胞接种于Ｍ－９培养液中，色素产量比对照提高了３２．０８％，ＣｕＣｌ２·２Ｈ２Ｏ的最适浓度为０．６μｍｏｌ／Ｌ．ＣｕＣｌ２·２Ｈ２Ｏ对细胞生长无不良影响。Ｍ—９培养液中，铜于色素形成的初期，可快速吸附于细胞上，这一现象为ＣｕＣｌ２·２Ｈ２Ｏ促进紫草色素合成机制的深入研究提供参考。

滇紫草愈伤组织培养的初步研究

滇紫草(Onosma paniculatum)属紫草科滇紫草属植物,其根部皮层富含的紫草素(α—萘醌系列衍生物),可用作治疗外伤与痔疮的药物或高级染料以及化妆品。滇紫草为云南特有,由于人工栽培困难,加之不断采挖,致使这一资源受到严重的破坏,产品供不应求。日本Tabata等对紫草(Lithospermum erythrorhizon)的组织培养进行了一系列的研究,但对滇紫草组织培养以生产紫草素的研究至今未见报道。基于这一现状,我们从1988年开始着手进行滇紫草组织培养的研究,以探讨应用组织培养技术生产紫草素的可能性。

促进紫草色素合成的米曲霉诱导子的纯化和活性鉴定

米曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｙｚａｅ）诱导子来源于该真菌的菌丝体部分。诱导子粗提物通过ＤＥＡＥ－Ｃｅｌｌｕ－ｌｏｓｅ、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ、Ｂｉｏ－Ｇｅｌｐ－４、７３２ 柱层析，得到既不吸附于阴离子交换纤维素又不吸附于阳离子交换树脂、分子量约为１２００～２２００ Ｄ、糖含量为粗提物６．７％ 的组分ＦⅠｂ２－Ｈ，与粗提物相比它的诱导子相对活性提高了１２０ 倍。诱导子粗提物中还含有低浓度不影响滇紫草（Ｏｎｏｓｍ ａ ｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ ）细胞合成紫草色素、而高浓度抑制紫草色素合成的核酸类组分ＦⅡ，核苷酸、氨基酸类组分ＦⅠｂ２－Ｎａ 及强烈抑制紫草色素合成的多糖类组分ＦⅠａ。ＦⅠａ可诱导细胞合成对照中没有的一种黄色素。

寡糖素和椰乳对滇紫草愈伤组织培养的影响

C-7和C-8、G-7和G-8是分别从黑节草和人参分离纯化的寡糖素。C-8提高愈伤组织中紫草色素含量最为明显,达5.795±0.024mg/gDW,为对照的3.27倍。C-7、C-8、G-7和G-8在滇紫草愈伤组织培养中促进色素合成的最适浓度分别为5.0ppm、1.0ppm、2.5ppm和2.5ppm。椰乳加入到培养基中,能明显地促进色素的合成。椰乳浓度为5.0％时,色素含量达最高值为8.935±0.242mg/gDW,明显高于对照(1.727±0.103mg/gDW)。椰乳和4种寡糖素对愈伤组织生长的影响均不大。

米曲霉中的紫草色素诱导物对滇紫草细胞代谢的影响

在滇紫草细胞培养第８天时加入来源于米曲霉的紫草色素诱导物，１２ｈ后滇紫草细胞中紫草色素含量增加，其衍生物之一的乙酰紫草素的相对含量增加，胞内可溶蛋白合成量上升，细胞对碳源消耗增多，而细胞生长受到抑制。处理１２ｈ后，培养液电导率下降，ｐＨ上升，Ｋ＋外泄和Ｎａ＋大量内流，表明离子跨膜运输发生改变。

激光和磁场对滇紫草愈伤组织色素含量的影响

用He－Ne激光和一定强度的磁场处理滇紫草愈伤组织，发现2～3h激光辐照可提高色素含量；而1．0T磁场能促进细胞生长和色素形成。硅胶薄层层析比较两种物理因子对紫草色素成分无显著影响。

滇紫草培养细胞中色素合成的代谢调节

培养基中分别加入浓度为10^(-5)mol/L的铜离子,滇紫草愈伤组织中色素含量提高了5.5倍,悬浮细胞中色素含量提高8.1倍。细胞培养第21天,加入浓度为10^(-5)mol/L的L-Phe,色素的合成量最大。浓度为10^(-6)mol/L的抗坏血酸,能明显地促进培养细胞中色素的合成。

滇紫草细胞发酵培养形成紫草色素

测定了滇紫草细胞发酵培养过程中细胞生长、色素形成、碳源、氮源、重要无机离子和ｐＨ值的动态变化。

生产培养基中寡糖素对滇紫草愈伤组织培养的影响

黑节草寡糖素C-7和C-8,人参寡糖素G-7和G-8分别加入到培养基中,均能影响滇紫草愈伤组织中色素的合成。C-7、C-8、G-7和G-8加入到培养基中,促进紫草色素合成的最适浓度分别为1.5ppm、2.5ppm、2.5ppm和2.5ppm,色素浓度分别为21.39mg/gDW、22.68mg/gDW、29.46mg/gDW和36.73mg/gDW,均明显地高于对照(16.73mg/gDW)。并对寡糖素的作用机理进行了讨论。

滇紫草及露蕊滇紫草的氨基酸和元素分析

为分析滇紫草及露蕊滇紫草中的氨基酸和元素含量 ,将样品用酸处理后 ,采用氨基酸分析仪及电感耦合等离子体发射光谱仪进行了测定。结果表明 ,两种紫草含有 1 8种氨基酸及 1 4种元素。可见滇紫草及露蕊滇紫草间氨基酸和元素含量没有重大的差异。